Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Дифференциальное действие экстрактов Pistacia vera на экспериментальный атеросклероз в модели животного кролика: экспериментальное исследование

Differential effect of Pistacia vera extracts on experimental atherosclerosis in the rabbit animal model: an experimental study
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2917426/

Липид-обогащенные диеты и окислительный стресс являются факторами риска развития атеросклероза. Эффекты метанольных (ME) и циклогексановых (CHE) экстрактов гайки Pistacia vera, часто включаемые в средиземноморскую диету, изучались в кроличьей модели атеросклероза.

Двадцать четыре новозеландских белых кролика получали атерогенную диету (контрольная группа), дополненную ME (группа ME) или CHE (группа CHE) в течение 3 месяцев. Ранее для исследования химических профилей экстрактов были разработаны GC-MS и UHPLC LC-DAD-ESI (-) — HRMS / MS. Образцы крови на начальном и месячном уровнях липидного профиля, перекисное окисление липидов и функция печени. Аорту, миокард и печень гистологически исследовали через 3 месяца.

Группы ME и CHE имели значительно более высокий уровень ЛПВП и не значительно меньший средний уровень ЛПНП холестерина в% от исходного уровня, чем контрольная группа. Триацилглицерин был значительно выше в группе CHE против контроля. Значения MDA были значительно ниже в группе ME по сравнению с контролем и CHE. ALT и AST были значительно выше в группе CHE против Control. γ-GT был ниже в группе ME по сравнению с контролем. Толщина интимы аорты была значительно меньше в группах ME и CHE против контроля; Атеросклеротические поражения группы ME были значительно менее обширными по сравнению с контролем групп и CHE. Только у группы CHE была значительная жировая инфильтрация печени.

Во время кратковременного введения одновременно с атерогенной диетой оба экстракта P. vera были полезны для HDL-, LDL-холестерина и толщины интимы аорты. ME дополнительно представил антиоксидантный эффект и значительное уменьшение поверхностных повреждений аорты. Эти результаты показывают, что диетическое включение P. vera, в частности ее ME, потенциально выгодно при управлении атеросклерозом.

Сердечно-сосудистые заболевания являются ведущей причиной смертности в промышленно развитой части мира, основным состоянием которой является атеросклероз [1]. Развитие и прогрессирование атеросклеротических поражений изучено широко. Было проведено множество клинических исследований в отношении диетических протоколов, таких как исследование «Семь стран» средиземноморской диеты, которое включает оливковое масло [2]. Другие клинические исследования включали фармацевтические [3] и хирургические вмешательства только [4] или в комбинации [5]. Научные свидетельства патогенеза и терапии атеросклероза в прошлом веке получили в значительной степени протоколы исследований на животных моделях.

Кролик, одна из наиболее важных моделей для изучения атеросклероза, быстро реагирует на стимуляцию атеросклеротических поражений с помощью диеты с высоким содержанием холестерина [6]. Некоторые диетические исследования использовали эту модель, в том числе введение оливкового или рыбьего жира и различных экстрактов семян или масел, полученных из семян подсолнечника, арахиса, семян льна или фундука [7-10]. Пищевая гайка, потребляемая либо отдельно, либо как ингредиент в традиционных рецептах, — это фисташковый орех из дерева Pistacia vera, который принадлежит к семейству Anacardiaceae и распространяется в центральной и юго-восточной Греции, а также в других странах Средиземноморья и Ближнего Востока. Насколько нам известно, опубликованы только исследования in vitro относительно его биологически активного воздействия на развитие атеросклероза [11]. Поэтому мы стремились исследовать влияние введения P. vera cyclohexane (CHE) и метанольного экстракта (ME) на экспериментальную модель кроликов атеросклероза на биохимию сыворотки, а также поражение аорты, сердца и печени.

В таблице 1 показаны описательная статистика измеренных параметров 3-х групп. В таблице 2 показаны средние изменения в процентах от исходных показателей биомассы организма, липидного профиля и антиоксидантного статуса, а также общие статистические значения. В таблице 3 показаны средние изменения в процентах от исходного уровня активности ферментов печени и общие статистические значения. В таблице 4 показан морфометрический анализ аорты кроликов.

Описательная статистика: средние значения ± стандартное отклонение массы тела и биохимических параметров

Средние значения веса тела, профиля липидов и окислительного стресса в течение периода наблюдения в трех группах: контроль (атерогенная диета), ME (атерогенная диета плюс ME), CHE (атерогенная диета плюс CHE).

Все переменные представлены как среднее ± SD

Процент изменения массы тела, профиля липидов и окислительного стресса в сыворотке кролика

Медиана% изменяется от исходного уровня массы тела, липидного профиля и значений окислительного стресса в течение периода наблюдения в трех группах: контроль (атерогенная диета), ME (атерогенная диета плюс ME), CHE (атерогенная диета плюс CHE).

Значительная разница при р <0,05 по сравнению с контрольной группой

b Значительная разница при p <0,05 по сравнению с группой ME

Общий Sig: Общая значимость, NS: Незначительное

Процент изменения активности ферментов печени в сыворотке кроликов

Медиана активности ферментов печени% изменяется от исходного уровня в течение периода наблюдения в трех группах. Группа контроля: атерогенная диета, группа ME: атерогенная диета плюс ME, группа CHE: атерогенная диета плюс CHE

Значительная разница при р <0,05 по сравнению с контрольной группой

b Значительная разница при p <0,05 по сравнению с группой ME

Общий Sig: Общая значимость, NS: Незначительное

Морфометрический анализ на аортах кролика

Результаты выражены как медиана ± SD.

Группа контроля: атерогенная диета, группа ME: атерогенная диета плюс ME, группа CHE: атерогенная диета плюс CHE

Значительная разница при р <0,05 по сравнению с контрольной группой

b Значительная разница при p <0,05 по сравнению с группой ME

Конечное среднее изменение% от базовой линии в группах Control, ME и CHE не было статистически значимым (таблица 2), хотя наблюдалось умеренное увеличение абсолютных средних значений (таблица 1).

Уровни липидов в плазме всех трех групп были сходными на исходном уровне. Среднее изменение% от базовой линии в течение периода наблюдения, описанного ниже, показано в таблице 2.

Среднее изменение% от базовой линии до 1-го месяца для групп ME и CHE было статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой (p = 0,01 и 0,05 соответственно).

Среднее изменение группы CHE было статистически значимо выше по сравнению с контролем групп и ME в 1-й и 2-й месяцы, тогда как группы ME и CHE имели статистически значимые более высокие значения, чем контрольная группа во 2-м (p = 0,001 и p <0,005 соответственно ) и 3-го месяца (p = 0,01, p <0,005 соответственно).

Среднее изменение группы CHE было статистически значительно ниже по сравнению с контрольной группой в 1-м и 2-м месяце (p <0,005), тогда как среднее изменение группы CHE было статистически значительно ниже по сравнению с группой ME только в 1-м месяце (p = 0,038).

Медиана% изменения группы ME была статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой в 1-й и 2-й месяцы (р <0,005 и р = 0,001 соответственно). Изменение значения CHE группы было значительно выше, чем у контрольной группы на протяжении всего исследования (p <0,005, p = 0,003 и p = 0,05 соответственно).

Среднее изменение группы CHE было статистически значимо выше по сравнению с группой ME во 2-м и 3-м месяце (p = 0,032 и 0,012 соответственно). Более того, среднее изменение группы МЭ статистически значимо отличалось по сравнению с контрольной группой в 1-м и 3-м месяце (p <0,0005 и р = 0,032 соответственно).

Медиана% изменения группы ME была статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой во 2-м месяце (p = 0,05), тогда как среднее изменение группы CHE по сравнению с контрольной группой было значительно выше во время исследования (p <0,05) ,

Медиана% изменения значений плазмы всех групп не показывала статистически значимого увеличения за весь экспериментальный период, когда группа CHE имела более высокие значения только в 3-м месяце (p = 0,007).

Среднее изменение значений группы ME по статистике было статистически значимым ниже по сравнению с контролем групп и CHE в течение третьего месяца эксперимента (p <0,005).

Макроскопические образцы аорты из группы Control и CHE показали обширные атеросклеротические бляшки, покрывающие почти всю верхнюю часть вырезанной аорты (таблица 4 и фиг.1A и 1E). Показатели группы ME показали менее обширные поражения по сравнению с группой A, а также по сравнению с группой CHE (таблица 4 и фиг.1C).

Макро- и микроскопические изображения представителей аорты у кроликов трех групп. 1A, 1C, 1E являются репрезентативными изображениями из грубых образцов аорты, принадлежащих группам Control, ME и CHE, соответственно. Стрелки указывают на образования атеросклеротических бляшек. Как показано, контрольная группа демонстрировала обширные атеросклеротические бляшки, покрывающие почти всю верхнюю часть вырезанной аорты. Группы ME и CHE проявляли менее обширные поражения по сравнению с контрольной группой, и между этими двумя группами группа ME имела наименьшее образование поражения. 1B, 1D, 1F — микрофотографии с 1A, 1C, 1E соответственно (эозин — гематоксилин, первоначальное увеличение × 100). На рисунке 1B (контрольной группы) показана уязвимая доска с множеством пенных клеток, воспаление и замечательное утолщение интимы. Рисунок 1D (группа ME) показывает вышеописанное поражение, но менее обширная (толщина интима / среды меньше, чем в 1B. Рисунок 1F (группа CHE) демонстрирует эндотелий аорты с подтверждением утолщения и многих пенных клеток, однако интима / среда Отношение меньше, чем в 1 В. Стрелки указывают ширину эндотелия.

Гистопатологические данные группы Control и CHE показали уязвимые бляшки со многими пенными клетками, воспаление и замечательное утолщение интимы (рис.1B и 1F). В группе ME обнаружены описанные выше поражения, но менее обширные (рис.1D).

Гистологическое исследование сердца не выявило значительных изменений между группами.

Гистологическое исследование печени не выявило значительных изменений между Групповым контролем и МЭ. Группа CHE показала статистически значимую жировую инфильтрацию по сравнению с контрольной группой.

Негенетический гиперлипидемический кролик — это животная модель, широко используемая при исследованиях атеросклероза. Различные уровни диетического холестерина (0,2-1,3%) были использованы для создания эксперимента экспериментально [12,13], а одновременное введение других потенциально полезных веществ изучалось в периоды, варьирующие от 8 [12] до 14 недель [10, 12].

Заводы Pistacia — это деревья или кустарники, принадлежащие Греции и другим странам Средиземноморья и Ближнего Востока. Было показано, что среди них было обнаружено, что у P. lentiscus антиоксидант [14], антибактериальный [15,16], печеночно-защитные [17] и цитостатические [14] эффекты и для предотвращения холестерина ЛПНП от окисления in vitro [18 ]. Было показано, что P. terebinthus оказывает полезное действие на маточные кондиломы и меланомы кожи [14]. На P. vera было проведено мало исследований. Сообщалось, что он обладает противогрибковыми эффектами растений [19]. P. vera ME содержит небольшие количества катехина, полифенольного флавоноида, который показывает потенциально более высокую антиоксидантную активность, чем аскорбиновая кислота и α-токоферол в исследованиях in vitro [20]. Катехин и его продукты также были указаны как факторы снижения риска сердечно-сосудистых заболеваний путем снижения уровня холестерина в сыворотке, уменьшения агрегации тромбоцитов и снижения артериального давления [21].

В настоящем исследовании мы исследовали влияние совместного введения P. vera на прогресс индуцированного холестерином атеросклероза модели животного кролика в течение 12 недель. Мы решили отдельно управлять ME или CHE P. vera в разных группах животных, чтобы иметь возможность идентифицировать, какие компоненты будут отвечать за потенциально разные результаты. Анализ GC-MS CHE показал, что его основными соединениями являются b-ситостерол, сквален, стигмастерин, олеиновая и пальмитиновая кислоты. Клинические испытания уже показали защитные эффекты таких растительных стеролов при развитии ишемической болезни сердца [22]. Кроме того, анализ МЭ с использованием методов LC-HRMS / MS выявил присутствие галлового метилового эфира, протокатехиновой кислоты и галловой кислоты. Показано, что галлова кислота обладает антиатерогенной активностью [23].

Результаты настоящего исследования показывают положительный эффект совместного введения P. vera ME и CHE в обогащенной холестерином диете при изменениях HDL-C. ME также продемонстрировало меньшее изменение MDA от исходного уровня, тем самым проявляя мягкий антиоксидантный эффект. Благоприятный эффект ЛПНП-С не был статистически значимым. Другие исследованные биохимические параметры (TC, TAG и ферменты печени) не продемонстрировали положительного эффекта ME при анализе данных с использованием средних средних значений. Анализ наших данных с использованием средних абсолютных значений показал статистически значимый защитный эффект МЭ по вышеуказанным параметрам (табл. 1). Однако из-за отсутствия нормального распределения значений, использование непараметрического анализа (тесты Крускал-Уоллиса и Манна-Уитни) было сочтено необходимым.

Несколько растительных веществ оказывают благотворное влияние на биохимию крови у кроликов, получающих холестерин. Полифенол оливкового масла, известный как гидрокситирозол, увеличивал уровни HDL-C атерогенных кроликов с диетическим питанием [13]. Мука из кунжута благотворно влияла на общий уровень холестерина и триглицеридов у кроликов, получавших холестерин [24]. Кроме того, сециолаларицирезиновый диглюкозид (SDG), лигнин растений, выделенный из льняного семени при введении кроликам в течение 8 недель, приводил к уменьшению LDL-C и увеличению ЛВП-C и антиоксидантной активности [9], аналогично нашему исследованию. Кроме того, в другом исследовании на кроликах с использованием этанольного экстракта лизимахиоидов Hypericum Boiss var lysimachioides (Guttifera) показано статистически значимое снижение уровней MDA, а также увеличение уровней HDL-C, что согласуется с нашим исследованием [25].

Наши результаты показали, что лечение обоими экстрактами P. vera вызывает умеренное увеличение значений TC, хотя это не сильно отличается от контрольной группы во втором и третьем месяце введения.

Средние значения HDL-C в контрольной группе были ниже в конце эксперимента, тогда как совместное введение экстрактов P. vera (группы ME и CHE) значительно ингибировало это снижение. Учитывая, что низкий уровень HDL-C связан с более высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний, подтверждается, что увеличение уровня HDL-C приведет к защитному эффекту против атеросклероза после длительного введения экстрактов P. vera.

Наши результаты показали значительные различия в уровнях MDA в плазме между МЭ и контрольными группами. Это говорит о том, что положительный эффект P. vera ME на некоторые липиды и аорту может быть вызван мягким антиоксидантным эффектом.

В нашем исследовании уровни ферментов печени увеличились, достигнув максимальных уровней третьего месяца во всех группах. В частности, изменения ALT и AST были увеличены в группах ME и CHE по сравнению с контролем. Как клинические, так и экспериментальные исследования показали, что повышенные АЛТ и АСТ могут быть прогностическими для развития атеросклероза [26,25]. Кроме того, изменения γGT группы ME были статистически значительно ниже в третьем месяце по сравнению с контрольной группой. Это свидетельствует о положительном эффекте P. vera ME и CHE в функции желчной системы атеросклеротических животных. В исследовании Hakimoglu et al. [25] печеночная гидропическая и липидная дегенерация была снижена в этанольном экстракте лисимахоидов Hypericum по сравнению с кроликами, получавшими только с обогащенной холестерином диетой. Этот вывод похож на наш, где гистология печени, которую я кормила кроликов, была менее затронута, чем группа холестерина (контрольная группа), хотя статистически значимой разницы не было. В частности, кролики контрольной группы страдали от повреждения печени, характеризующегося стеатозом и фиброзом, что было еще более очевидным в группе CHE.

Макроскопическое образование бляшек в группе ME было менее обширным по сравнению с контролем групп и CHE. Как и в нашем исследовании, другие исследователи отметили, что, несмотря на увеличение уровня холестерина в сыворотке после введения экстракта, результаты патологии образцов аорты могут показать улучшение атеросклероза [27]. Aguilera et al. [8] обнаружили, что девственные оливковое масло и рыбьего жира уменьшают развитие атеросклеротических бляшек. Было также показано, что масло орехового ореха уменьшает атеросклеротические поражения в аорте холестерина, питающегося кроликами [10]. Кроме того, эффект введения зеленого чая, содержащий соединения, полученные из эпикатехина у кроликов, оказал благотворное влияние на артериальные атеросклеротические бляшки [28]. Это согласуется с нашими результатами, что свидетельствует о значительном положительном эффекте P. vera ME на развитие атеросклероза аорты. В частности, группа ME продемонстрировала значительное ингибирование атеросклеротических бляшек как по их толщине, так и по ширине в просвете аорты. Это может быть связано с основными компонентами МЭ, такими как галльная кислота и катехин, которые могут быть ответственны за этот процесс ингибирования, как уже указывалось [22,28]. С другой стороны, группа CHE проявляла более мягкое ингибирование атеросклероза относительно толщины бляшек, что можно объяснить наличием b-ситостерола, сквален, стигмастерола, олеиновой и пальмитиновой кислот, как показано аналогично [29,30].

Группа CHE проявила самую низкую антиоксидантную активность. Этот эффект может быть связан с обширными, но не столь сложными атеросклеротическими поражениями, наблюдаемыми в образцах аорты группы CHE, по сравнению с таковыми для группы Control и ME. Однако группа ME проявила гораздо более сильную антиоксидантную активность. Статистически значимый наблюдаемый антиоксидантный эффект МЭ, очевидный при анализе MDA, также значительно уменьшает осаждение аортальной бляшки. С другой стороны, CHE не влиял на степень атеросклеротических поражений. Эти данные могут быть отнесены к компонентам P. vera ME, оказывающим антиоксидантную активность [11].

В заключение, при кратковременном введении одновременно с атерогенной диетой оба экстракта P. vera были полезны для HDL-, LDL-холестерина и толщины интимы аорты. ME дополнительно представил антиоксидантный эффект и значительное уменьшение поверхностных повреждений аорты. Эти результаты показывают, что диетическое включение P. vera, в частности ее ME, потенциально может быть полезным при лечении атеросклерозом. P. vera ME и CHE впервые используются in vivo в наших знаниях при изучении атеросклероза и показывают многообещающий эффект в отношении процесса ингибирования. Больше исследований требуется до того, как P. vera может быть клинически рекомендована для диетического включения для управления атеросклерозом.

Двадцать четыре обычных новозеландских белых кролика (2,7 ± 0,2 кг), приобретенных у греческого сертифицированного коммерческого заводчика, были случайным образом разделены на три равные группы (контроль, ME и CHE) и содержались отдельно в клетках из нержавеющей стали с бесплатным доступом к пище и водопроводной воды. Условия животного жилища составляли 20 ± 2 ° C, относительная влажность 60 ± 5%, в 12:12 ч свет: темный цикл. Животных обрабатывали в соответствии со стандартами, установленными Европейской директивой 86/609 / EEC. Местные ветеринарные органы и комитет по этике животных одобрили (лицензия № K / 950) исследование. Контрольная группа получила стандартную сбалансированную диету с кроликом (химический состав: общая жирная кислота 2,5%, целлюлоза — 18,5%, общий белок — 16,5%, вода — 13%, зола — 11%, кальций — 1,4%, лизин — 0,6%, метионин-цистин — 0,55%, фосфор 0,55%, натрий 0,25%), обогащенный 1% холестерина (Dolder, Швейцария) (атерогенная диета), группа ME получила атерогенную диету плюс ME (1% по весу) и атерогенную диету группы CHE плюс CHE (5% по массе) , Диеты были свежеприготовлены каждые три дня перед употреблением.

Количество порошкообразных фисташковых орехов на 15 кг, собранных на греческом острове Эгина, экстрагировали при комнатной температуре, сначала обезжиривали циклогексаном, получая 7,5 кг зеленого масляного остатка после выпаривания растворителя. CHE омыляли обычной процедурой, приводящей к этерифицированным жирным кислотам. Метиловые эфиры жирных кислот и неосажденный остаток анализировали с помощью GC и GC / MS с получением в качестве основных соединений b-ситостерола, сквален, стигмастерола, олеиновой кислоты и пальмитиновой кислоты (см. Дополнительный файл 1)
,

После извлечения порошкообразных фисташковых орехов циклогексаном растительный материал дополнительно экстрагировали дихлорметаном, получая 1,5 кг зеленого маслянистого экстракта, а затем метанолом с получением остатка 500 г после выпаривания растворителя. Количество 400 г остатка подвергали смоле XAD-4 для удаления сахара и получали ME, обогащенные фенольными соединениями. Для описания химического профиля обогащенного экстракта был разработан метод LC-DAD-ESI (-) — HRMS / MS. Анализ проводили с использованием устройства UHPLC, подключенного к высокоэффективному гибридному спектрометру LTQ-Orbitrap Discovery. В качестве стандартов для анализа использовались фенольные соединения, галоидный метиловый эфир (1), галловая кислота (2), протокатехиновая кислота (3) катехин (4) и эпикатехин (5), а их идентификация была выполнена путем сравнения времени удерживания, UV-Vis и высокоточные масс-спектры пиков в образце с образцами стандартных соединений.

В прилагаемом дополнительном файле 1 представлен подробный анализ компонентов экстрактов.

Все животные голодали за 12 часов до взятия крови. Они были слегка успокоены (кетамин гидрохлорид 12 мг / кг, ксилазин 2,5 мг / кг массы тела, им) для процедуры, чтобы избежать стрессового воздействия. Образцы крови из ушной артерии животных помещали в пробирки Вассермана, содержащие антикоагулянт в течение 0, 1, 2 и 3 месяца экспериментальной процедуры. Плазму отделяли центрифугированием при 3500 об / мин в течение 15 мин. Общий уровень холестерина в плазме (ТС), холестерин липопротеинов высокой плотности (HDL-C), холестерин липопротеинов низкой плотности (LDL-C), концентрации триацилглицерина (TAG), сывороточная аланинаминотрансфераза (ALT), аспартат-аминотрансфераза (АСТ) и гамма-сыворотка активность глютамилтрансферазы (γGT) измеряли коммерческими наборами ферментативных тестов в соответствии с инструкциями производителя (Biomerieux, Lyon, France) с использованием автоматического анализатора (тип 7170A, Hitachi, Tokyo, Japan). MDA рассчитывали по ручному методу реактивных веществ тиобарбитуровой кислоты (TBARS), как описано Yagi [31]. В конце экспериментального исследования и после последнего взятия пробы крови при седации кроликов эвтаназировали тиопенталом натрия (30 мг / кг внутривенно).

Аорта была удалена из артерии аорты в подвздошную бифуркацию. Ткани, прилипающие к адвентиции, удаляли, а аорту разрезали продольно вдоль средней вентральной стенки. Затем аорту фиксировали в 10% -ном фосфатном буферном растворе формалина. Сняли просветную поверхность каждого образца аорты, и изображение было сохранено в электронном виде. Разделы из всех образцов были получены из трех стандартных участков (непосредственно дистальных к ветви левой подключичной артерии, в седьмой межреберной артерии и непосредственно позади целиакии). Эти образцы были встроены в парафиновые блоки и окрашены гематоксилин-эозином. Гистопатологические атеросклеротические поражения аорты были классифицированы по классификации Стари [32], а толщина и площадь поверхности атеросклеротических поражений в стенке аорты были полуквантизированы с использованием автоматизированной системы анализа изображений [33]. Вкратце, оцениваемые параметры: утолщение интимы, накопление пенных клеток, моноядерные инфильтраты, липидное ядро ​​и образование волокнистых колпачков. Цифровые изображения были получены из слайдов с помощью фотомикроскопа (Nikon Eclipse 80i, Nikon Corp, Токио, Япония), оснащенного цифровой камерой (Nikon DS — 2 МВт). Все изображения были перенесены на ПК с соответствующим программным обеспечением (Image ProPlus v. 5.1, Media Cybernetics, MD, USA).

Сердце и печень взвешивали и фиксировали в 10% -ном фосфатном буферном растворе формалина. Были взяты стандартные секции, встроенные в парафиновые блоки для гематоксилин-эозина, а образцы миокарда дополнительно окрашивались трихромным пятном Массона.

Повреждения миокарда оценивались от 0 до 3 относительно интерстициального отека, фиброза и инфильтратов пенных клеток. Повреждения печени были классифицированы в четырех классах, как описано ранее [34], в отношении изменений архитектуры, жировой инфильтрации и фиброза.

Данные были выражены как средние значения ± стандартное отклонение (SD), а также медианные значения из-за нарушения нормальности. Для анализа нормальности параметров использовался тест Колмогорова-Смирнова.

Чтобы указать тенденцию в первые 3 месяца лечения, средний процент изменений после 1, 2 и 3 месяцев переменных был рассчитан. Сравнение процентного изменения от базового значения переменных в течение периода наблюдения и переменных гистопатологии между тремя группами было проанализировано с использованием теста Крускала-Уоллиса и теста Манна-Уитни (парные сравнения).

Все тесты были двусторонними, статистическая значимость была установлена ​​при p <0,05. Все анализы проводились с использованием статистического пакета SPSS vr 16.00 (Статистический пакет для социальных наук, SPSS Inc., Чикаго, штат Иллинойс, США).

P.vera: Pistacia vera; ME: метанольный экстракт Pistacia vera; CHE: циклогексановый экстракт Pistacia vera; GC: газовая хроматография; МС: масс-спектрометрия; UHPLC: ультравысокая жидкостная хроматография; LC: жидкостная хроматография; DAD: детектор диодных матриц; ESI: ионизация электронного спрея; HRMS: масс-спектрометрия высокого разрешения; TC: общий холестерин; LDL-C: холестерин липопротеинов низкой плотности; HDL-C: холестерин липопротеинов высокой плотности; TAG: триацилглицерин: MDA: малоносный альдегид; ALT: аланинаминотрансфераза; АСТ: аспартатаминотрансфераза; γ-GT: гамма-глутамилтрансфераза; TBARS: реакционноспособные вещества тиобарбитуровой кислоты; SD: стандартное отклонение; SPSS: статистический пакет для социальных наук; SDG: сециолаларицирсинол диглюкозид.

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

КМ провела экспериментальное исследование, включающее общий обзор животных, подготовку диет, отбор проб крови, эвтаназию и составление рукописи. KG и MH подготовили экстракт циклогексана и метанола и соответствующие диеты, а также провели их анализ. GA и EP выполняли и координировали все этапы патологии образцов тканей. TK и DI участвовали в удалении тканей и подготовке рукописи. AP и AC способствовали разработке исследования. Премьер-министр провел проект по производству экстрактов пистаци. NT способствовала подготовке диет и рукописи. LAS и ID задумали дизайн исследования, скоординировали эксперименты и подготовили рукопись. Все авторы прочитали и утвердили окончательную рукопись.

Методы приготовления циклогексановых и метанольных экстрактов. Подробная информация о методологии приготовления циклогексановых и метанольных экстрактов, включая 2 рисунка.

Нажмите здесь для файла

Д-р К. Марино признателен Греческому министерству развития сельских районов и продовольствия за поддержку и образовательный отпуск, а также профессору Д. Н. Перреа за ценную консультацию и поддержку в исследовании. Д-р Дантас признает Специальный счет для исследовательских грантов (№ 70/4/2591) Национального и Каподистрианского университета в Афинах за финансовую поддержку. Авторы признают биостатистика доктора А. Галаноса за экспертный статистический анализ исследования и признают экспертную помощь К. Перреа, К. Пападаки, Э. Дуси, Г. Пантелиса, П. Рапоса и З. Мертири во время экспериментов.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *