Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Экспрессия плацебоподобных рецепторов 2 и 4 у пациентов с астмой общим сывороточным уровнем IgE

Expression of toll-like receptors 2 and 4 in subjects with asthma by total serum IgE level
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4833957/

Новые данные свидетельствуют о том, что врожденный иммунитет может играть определенную роль в астме, особенно в отношении сходных рецепторов (TLR). В некоторых исследованиях указывалось на вовлечение TLR 2 и 4 в патогенез аллергической астмы и другие исследования, связанные с TLR, с IgE. Однако нет исследований, которые всесторонне оценивали экспрессию TLR 2 и 4 в воспалительных клетках, периферической крови и индуцированных образцах мокроты у пациентов с астмой, в соответствии с их полным сывороточным IgE.

Мы изучили 44 пациента с астмой (15 с высоким сывороточным IgE и 29 с нормальным общим сывороточным IgE). При одном посещении всем пациентам были подвергнуты: мокрота, легочные функциональные тесты, определение выдыхаемой фракции оксида азота, венепункция для анализа крови и тесты на аллергию на кожные уколы. Интенсивную клеточность мокроты анализировали с помощью проточной цитометрии, где экспрессию TLR 2 и 4 изучали с использованием моноклональных антител, конъюгированных с флуорохромом.

Астматические пациенты с высоким сывороточным IgE показали более высокий процент макрофагов, выражающих TLR4 (42,99 ± 22,49), по сравнению с астматическими пациентами с нормальным общим сывороточным IgE (28,84 ± 15,16) (P = 0,048). Кроме того, мы наблюдали корреляцию (но слабую) между процентом макрофагов, выражающих TLR4 в индуцированной мокроте, и общим уровнем IgE сыворотки (R = 0,314, P = 0,040).

Астматические субъекты с высоким общим сывороточным IgE проявляют повышенную экспрессию макрофагов TLR4 в индуцированной мокроте. Этот результат может быть результатом связи между врожденным иммунитетом и IgE-опосредованными, адаптивными иммунными ответами при астме и указывает на TLR4 в качестве потенциальной терапевтической цели.

IgE играет заметную роль в патофизиологии аллергической астмы. IgE связывается с рецепторами на поверхности различных типов иммунных эффекторных клеток, вызывая их высвобождение различных медиаторов, которые способствуют гиперреактивности дыхательных путей, секреции слизи и повышенной проницаемости сосудов [1]. Несколько стратегий для снижения IgE были разработаны как возможное лечение астмы [1]. В некоторых исследованиях сообщалось, что лигирование Toll-подобных рецепторов (TLR) бактериальными или вирусными антигенами может влиять на дегрануляцию маточных клеток, связанных с IgE, и высвобождение предварительно сформированных медиаторов, а также производство эйкозаноидов, тем самым обеспечивая доказательства участия врожденного иммунитета в патогенез астмы [2-5]. Среди различных агентов, участвующих в врожденном иммунитете в патогенезе астмы, TLR могут играть важную роль [6-10].

TLR представляют собой семейство белков клеточной поверхности, участвующих в распознавании ассоциированных с патогенами молекулярных структур (PAMPs). При стимуляции TLR могут модулировать последующие адаптивные иммунные ответы. TLR2 и 4 экспрессируются на клеточной поверхности и мигрируют в фагосомы после активации при распознавании лиганда. Просто потому, что эти рецепторы выражены на клеточной поверхности, их легко измерить. Наша лаборатория имеет опыт в их измерении [6].

TLR 2 и 4 функционируют как приемники сигналов для грамположительных и отрицательных бактерий (распознавание эндотоксинов) [6-8]. В некоторых исследованиях связь между микробными продуктами и регуляцией ответов Т-хелпера (Th) 1 и Th2 через TLR 2 и 4 наблюдалась при аллергических заболеваниях [11-13]. Интересно, что TLR 2 и 4 могут модулировать ответ Th в соответствии с бактериальной нагрузкой, где высокий уровень липополисахарида (LPS) индуцирует ответ Th1 и низкий уровень LPS способствует Th2-ответу [9, 14, 15]. Более того, есть доказательства того, что воздействие эндотоксина в раннем возрасте [16, 17] может быть защитным от развития атопии и астмы, что является аргументом в пользу гипотезы о гигиене, хотя такая связь остается плохо понятой [17].

Предыдущие исследования, посвященные роли TLR 2 и 4 у пациентов с астмой, имели несколько ограничений. Никакие исследования не приблизились к дифференциальному анализу TLR 2 и 4 в крови и индуцированной мокроте. Большинство исследований были ограничены клетками крови (часто моноцитами) [18, 19], в экспериментальных моделях астмы или в клеточных культурах [9, 13]. Несколько исследований, проведенных у людей, проводились на болезнях, отличных от астмы, таких как ХОБЛ, бронхоэктазы и кистозный фиброз [19-23]. Метод индуцированной мокроты является неинвазивной процедурой, которая обеспечивает прямую информацию о клетках и медиаторах, участвующих в воспалении дыхательных путей. Таким образом, мы ожидали, что индуцированный анализ мокроты особенно подходит для изучения роли врожденного иммунного ответа в патогенезе астмы. Основная цель настоящего исследования заключалась в оценке экспрессии TLR 2 и 4 в моноцитах / макрофагах и нейтрофилах как из периферической крови, так и индуцированной мокроты в группе взрослых астматических пациентов, стратифицированных по их уровню общего IgE сыворотки.

Исследование было одобрено Советом по институциональному контролю и зарегистрировано в ClinicalTrials.gov с идентификатором NCT02028637.

Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации (18-я медицинская ассамблея, 1964 г.) и было одобрено Комитетом по этике клинических исследований (номер официального утверждения: IIBSP / 43/2009) нашего учреждения. Участники подписали свое информированное согласие на участие в этом исследовании, а личные идентификационные данные были анонимизированы.

Это было наблюдательное, кросс-секционное исследование, проведенное в амбулаторной клинике больницы. Сорок четыре субъекта по поддерживающей терапии при астме в возрасте от 18 до 75 лет были включены. Все предметы были некурящими при включении исследования и были диагностированы с астмой в соответствии с критериями Global INITIative for Asthma (GINA) [24]. Кроме того, эти пациенты получали ингаляционные кортикостероиды в соответствии с GINA [24]. Астматические пациенты определялись как имеющие высокий общий IgE сыворотки, когда они имели общее значение IgE ≥ 160 МЕ / мл в образце периферической крови [25]. Нормальный уровень общего IgE сыворотки определяли как менее чем 160 МЕ / мл [25]. Пациенты были исключены, если они имели: (i) инфекцию дыхательных путей и / или требовали использования пероральных кортикостероидов в течение 30 дней до включения; (ii) иммуномодулирующее лечение (iii) низкая приверженность лечению; (iv) любая легочная патология, отличная от астмы, или значительная сопутствующая патология, которая может повлиять на результаты исследования по решению врача; или (v) когнитивные нарушения, которые могут ограничить их понимание или сотрудничество в исследовании.

Все процедуры исследования проводились при одном посещении клиники. После подписания информированного согласия участвующие пациенты выполнили вопросник по контролю астмы (АКТ) [26] и подверглись спирометрии, интродукции мокроты, измерению выдыхаемой фракции оксида азота (FeNO), взятию проб периферической венозной крови и тестированию кожного укола со стандартизованным экстракты аллергенов (на основе модифицированного теста Pepys) [27]. Спирометрия была выполнена с помощью Datospir 500 (Sibelmed S.A., Barcelona, ​​Spain) в соответствии со стандартами Европейского респираторного общества (ERS) [28] и Sociedad Española de Neumología y Cirugía Torácica (SEPAR) [29]. FeNO измеряли хемилюминесценцией (устройство SIR® N-6008, Мадрид, Испания) в соответствии с установленными стандартами [30] и справочными значениями [31]. Общий сывороточный IgE измеряли с помощью иммуноферментного анализа (ImmunoCAP, Phadia 250. Phadia AB, Uppsala, Sweden). Нормальные значения общего IgE были установлены лабораторией [25]. Индуцированные образцы мокроты собирали в соответствии с консенсусным протоколом ERS [32] и обрабатывали для проточной цитометрии и обычных показаний. Вкратце, индукция мокроты проводилась с использованием ингаляции аэрозоля гипертонического солевого раствора при возрастающих концентрациях (3,4 и 5%), генерируемых ультразвуковым распылителем (Omron NE U07, HEALTHCARE Europe, Germany) с выходом 3 мл / с и размер частиц 7 мкм с аэродинамической массой. Обработку мокроты инициировали из свежих образцов в течение двух часов.

Образцы индуцированной мокроты обрабатывались в соответствии с общепринятой стандартной процедурой [33]. Слизистые слитки вручную отбирали и взвешивали, инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре в 0,1% дитиотреитола (DTT) (Calbiochem, San Diego, CA) в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS) в общий объем мл в четыре раза по весу в мг выбранной пробкой, а затем промывали и фильтровали под действием силы тяжести через нейлоновую сетку размером 41 мкм (Millipore, мембранные растворы, Даллас, Tx, США). После гомогенизации с DTT каждый образец аликвотировали на две порции равного объема, один для обработки для обычного микроскопического исследования, а другой для анализа проточной цитометрии. Общее количество клеток было проведено в гемацитометре Нойбауэра, а цитоцентрифугированные слайды, окрашенные комплектом Diff-Quik (Polysciences Europe GmbH, Эппельхайм, Германия), использовались для дифференциальных подсчетов лейкоцитов. Плоские эпителиальные клетки были исключены из общего количества клеток и должны были составлять менее 20% от общего количества клеток в качестве критерия качества образца. Образцы, содержащие менее 106 клеток / г, не были включены в анализ. Жизнеспособность клеток определялась с помощью исключения трипанового синего красителя и в качестве критерия качества требовалась более 40%. Дифференциальные подсчеты лейкоцитов проводили на минимум 400 клеток и выражали как процент клеток лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов и макрофагов. Контрольные значения отсчетов клеток были установлены ранее [34]. К суспензии клеток мокроты для анализа проточной цитометрии доставляли в образцы размером 100 мкл / пробирки, содержащие приблизительно 10 [5] клеток / пробирку.

Периферическую венозную кровь обрабатывали тринатрийцитратом в качестве антикоагулянта, затем аликвотировали в 100 мкл / пробирки и эритролизировали препаратом TQ Prep Sample и COULTER PrepPlus 2 (Beckman Coulter, Miami, Florida) и последующим иммуноокрашиванием для проточной цитометрии.

Мозги и суспензии клеток крови блокировали мышиной сывороткой и иммунизировали насыщающими концентрациями следующих моноклональных антител, конъюгированных с флуорохромом, в течение 15 мин при комнатной температуре в темноте: фикоэритрин (PE) против TLR4 (клон HTA125), PE-анти-CD66b (G10f5) и PE / Cyanin-7 анти-CD14 (клон M5E2) от Biolegend (Сан-Диего, Калифорния); Alexa Fluor 488 anti-TLR2 (клон 11G7) и PE-анти-CD125 (A14) от BD Biosciences (Eembodegen, Belgium); PE-анти-CD16 (3G8), PE-анти-CD45 (MEM28), анти-CD16 (3G8) флуоресцеина-изотиоцианата (FITC), анти-CD66b (B13.9) FITC и PE / Dy-647 против CD45 (MEM28) Immunotools (Ольденбург, Германия) [33]. PE-мыши IgG2a, ƙ клон MOPC-173 и FITC мышиный IgG1, ƙ клон MOPC21 использовали для проверки специфичности антител TLR4 и TLR2. Затем клетки промывали 2 мл окрашивающего буфера (1% бычьего сывороточного альбумина в PBS) и центрифугировали в течение 5 мин при 400 ° С. Супернатанты декантировали, клетки ресуспендировали в 300 мкл окрашивающего буфера и образцы, хранящиеся при 4 ° C в темноте до анализа через проточный цитометр в течение 2 часов.

Сбор данных о проточной цитометрии выполнялся с использованием оборудования FC500 (Beckman Coulter, Pasadena, California, USA). Десять тысяч событий были проанализированы для всех пробных пробегов. Строение лейкоцитов мокроты основывалось на побочном рассеянии света по сравнению с экспрессией CD45, что позволило выявить популяции лимфоцитов, макрофагов и гранулоцитов. Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) клеток, окрашенных контрольным антителом, вычиталась из MFI клеток, окрашенных рецепторными антителами, чтобы обеспечить меру флуоресценции, специфичной для рецептора.

Воспалительные фенотипы астмы были классифицированы по клеточности мокроты. Пациенты были классифицированы как нейтрофильная астма, если количество нейтрофилов было> 61%, эозинофильная астма, если эозинофилы> 3%, как и те, у которых <61% нейтрофилов и <3% эозинофилов считались паусигранулоцитарной астмой [35].

Значения представлены в виде процентов и частот для качественных данных и среднего ± стандартного отклонения для количественных данных. Сравнение астмы с высоким и нормальным общим сывороточным IgE анализировали с помощью t-теста Стьюдента. Категориальные переменные контрастировали с помощью таблиц непредвиденных обстоятельств и тестировались с использованием хи-квадрата или, если необходимо, теста Фишера. Коэффициент Пирсона использовался для корреляционного анализа. Уровень статистической значимости был задан как α = 0,05. Анализ проводился с помощью программного обеспечения SPSS версии 18.0 для Windows (SPSS, Inc., Чикаго, Ил, США).

Из 44 пациентов с изученной астмой 15 имели высокий общий сывороточный IgE и 29 имели нормальный общий сывороточный IgE. Демографические данные, клинические и функциональные данные приведены в таблице 1. Никаких существенных различий между обеими группами не наблюдалось, за исключением уровней общего сывороточного IgE и результатов теста на укус кожи. Что касается последнего, 69% пациентов с астмой с высоким уровнем общего IgE были сенсибилизированы к домашним пылевым клещам, 23% к различным пыльцам и 8% к грибковым видам. Среди испытуемых, классифицированных как астматические пациенты с нормальным уровнем общего IgE, 53,57% показали положительный тест на кожный укус (60% для размещения пылевых клещей, 13% для пыльцы и 27% для других аллергенов). Данные по оценке качества мокроты и количеству клеток суммированы в таблице 2. Индуцированное качество мокроты было высоким в большинстве образцов в соответствии с содержанием клеток, жизнеспособностью клеток и процентом критериев плоскоклеточных клеток без существенных различий между группами. Дифференциальные лейкоциты мокроты выявили фенотип paucigranulocytic астмы как наиболее распространенный в обеих группах астмы, за которым следует эозинофильный фенотип в астматиках с высоким полным IgE и нейтрофильным фенотипом в астматиках с нормальным IgE соответственно, но между ними не было обнаружено существенных различий группы астмы с точки зрения классификации воспалительных фенотипов. Таблицы 1Демографические данные, клинические и легочные функции

Значения: среднее ± стандартное отклонение (STD) или процентное число и количество субъектов (n), как указано

Индекс массы тела BMI, Тест контроля астмы ACT, FEV
1 принудительный объем выдоха в первой секунде, принудительная жизненная емкость FVC, общий иммуноглобулин IgE, выдохая фракция оксида азота FeNO, пероральные кортикостероиды OC, ингаляционные кортикостероиды ICS, высокая доза ICS, доза ICS средней дозы, низкая доза ICS, N не использовать СНГ

Воспалительные фенотипы, общее и дифференциальное количество лейкоцитов при индуцированных параметрах качества мокроты и образца, распределенных по общему сывороточному IgE

Значения — это процент и количество предметов (n), средний процент и стандартное отклонение (STD), или среднее значение и STD, как указано

Данные экспрессии TLR показаны в таблице 3. TLR2 был в основном выражен в моноцитах / макрофагах и в меньшей степени в нейтрофилах как в индуцированной мокроте, так и в периферической крови. Не было обнаружено существенных различий между обеими группами в процентах клеток, экспрессирующих TLR2 в индуцированной мокроте или крови, или в средней интенсивности флуоресценции в анализируемых клетках. Таблица 3 Выражение TLR 2 и 4, распределенное в соответствии с общим сывороточным IgE

MFI Среднее значение интенсивности флуоресценции, TLL-подобные рецепторы. Значения представляют собой среднее процентное и стандартное отклонение (STD) для количества клеток и среднее значение (STD) для MFI

Процент макрофагов, выражающих TLR4 в индуцированной мокроте, был значительно выше при астме с высоким полным IgE сыворотки против астмы с нормальным полным сывороточным IgE (рис.1). В обеих группах астмы наблюдался больший процент экспрессии TLR4 в моноцитах / макрофагах, чем нейтрофилы как в индуцированной мокроте, так и в периферической крови. В остальных субпопуляциях лейкоцитов не было существенной разницы в процентах клеток, экспрессирующих TLR4, или в средней интенсивности флуоресценции. 1 Выражение TLR4 в макрофагах из индуцированной мокроты. Макрофаги были закрыты в клетках CD45 + и идентифицированы как CD14 + CD66b. Пример экспрессии TLR4 индуцированными макрофагами мокроты у пациентов с астмой с высоким общим сывороточным IgE (пунктирная гистограмма) по сравнению с астматическими пациентами с нормальным уровнем IgE (гистограмма серой линии). b Экспрессия TLR4 в макрофагах индуцированной мокроты у пациентов с астмой с нормальным и полным уровнем сывороточного IgE (значения представляют собой средний процент и 95% доверительные интервалы)

Процент TLR4 + макрофагов не влиял на терапевтический шаг GINA пациента (фиг.2, 35,59% (21,39) [средний процент (STD)] на стадиях GINA-1 и 2 вместе, n = 8, 28,01% (9,82) в GINA-3, n = 11, 28,99% (12,83%) в GINA-4, n = 9 и 38,66% (23,93) в GINA-5, n = 16, P = 0,501). 2 Выражение TLR4 индуцированными макрофагами мокроты согласно этапу поддерживающей терапии GINA

Мы наблюдали корреляцию (но слабую) между общим сывороточным IgE и процентом макрофагов, выражающих TLR4 в индуцированной мокроте (R = 0,314, P = 0,04). Была также обнаружена корреляция между процентом макрофагов и нейтрофилов, экспрессирующих TLR4 в индуцированной мокроте (R = 0,432, P = 0,008).

Основным результатом настоящего исследования было то, что процент макрофагов, выражающих TLR4 в индуцированной мокроте, был выше у пациентов с астмой с высоким общим IgE сыворотки, чем у астматиков с нормальным общим сывороточным IgE. Кроме того, мы наблюдали корреляцию (но слабую) между общим сывороточным IgE и процентом макрофагов, выражающих TLR4 в индуцированной мокроте. Этот результат согласуется с возможной связью между врожденным иммунитетом и адаптивным иммунным ответом в патогенезе опосредуемой IgE астмы. Роль TLR в воспалительном процессе была предметом недавних исследований. Однако большинство исследований оценивали клеточные ответы in vitro или системные реакции, и в немногих исследованиях основное внимание уделялось роли TLR в воспалении легких. В настоящем исследовании мы проанализировали клеточную экспрессию TLR 2 и 4 на одновременных индуцированных образцах мокроты и периферической крови у взрослых астматиков, и данные были стратифицированы в зависимости от типа астмы с точки зрения высокого и нормального уровня общего сывороточного IgE. Исследование ограничивалось обсервационной оценкой экспрессии TLR, но работа была выполнена на большой выборке пациентов с клинически хорошо охарактеризованной патологией, где все данные собирались вместе в один момент времени.

TLR представляют собой семейство белков, ответственных за распознавание PAMP, которые включают повторяющиеся микробные молекулярные домены, такие как липополисахариды, флагеллин, манноза и нуклеиновые кислоты от вирусов и бактерий. TLR 2 и 4 экспрессируются на поверхности клетки и транслоцируются в фагосомы после активации при связывании их лигандов. Активация TLR4 приводит к ряду событий, включая бронхоконстрикцию, экспрессию молекул адгезии сосудистыми эндотелиальными клетками и высвобождение цитокинов. Такие действия приводят к рекрутированию нейтрофилов и активации легочных дендритных клеток и макрофагов [36], а также поляризации Th2 последующих адаптивных иммунных реакций [37]. Предыдущие исследования показали, что у генетически восприимчивых субъектов воздействие аллергенов наряду с низкими дозами PAMP способствует аллергическим реакциям [38]. Напротив, высокая доза PAMP, как это происходит в животноводческих фермах, сельской среде в развивающихся странах и традиционном образе жизни, приводит к антигенной толерантности [39]. Такой защитный «ферментный эффект» объясняется иммуномодулирующей ролью воздействия ЛПС и других лигандов TLR в раннем детстве, что приводит к ингибированию развития аллергических иммунных реакций [9, 40-42]. Некоторые недавние исследования [6] привели к интересным ожиданиям, отметив, что при нейтрофильной астме наблюдается увеличение экспрессии TLR2, TLR4, CD14 и белка ПАВ-А (SP-A) и что активация TLR аллергеном например, генерирует каскад сигналов, управляемых активацией и ядерной транслокацией NF-kB, что приводит к опосредованному цитокинами воспалительному ответу. Открытие TLR и их действия обеспечивают иммунологическую основу для изучения гипотезы о гигиене. В этом исследовании мы измеряем TLR2 и 4 по нескольким причинам: 1) потому что они рецепторы, выраженные на поверхности клетки, и их легко измерить 2), поскольку в нашей лаборатории мы имеем больше опыта в измерении рецепторов, выраженных на клетке и 3), поскольку эти рецепторы связаны с патогенезом астмы, в частности с гипотезой о гигиене и респираторными инфекциями [16, 17]. В этом исследовании ни один из пациентов не включал респираторную инфекцию в течение предыдущего месяца и не страдал бронхоэктазом.

Имеются данные, свидетельствующие о том, что бактериальные и вирусные инфекции могут модифицировать течение аллергических заболеваний, влияя на активацию высокоукрепляющего IgE-рецептора (FcRI) -зависимой активации тучных клеток. В таких исследованиях сообщалось, что лигирование TLR бактериальными или вирусными антигенами может влиять на дегрануляцию, обусловленную IgE-зависимой дегрануляцией тучных клеток и выделением предварительно сформированного медиатора, а также продуцирование эйкозаноидов [2]. Кроме того, сообщалось, что синергическое взаимодействие между TLR-лигандами и аллергенами также может модифицировать синтез цитокинов тучными клетками, стимулированными их высокоаффинным IgE-рецептором FcRI [3-5]. Наши современные данные, показывающие большее количество индуцированных макрофагов мокроты, экспрессирующих TLR4 у пациентов с астмой с высоким полным сывороточным IgE, наряду с корреляцией (слабой) между процентом TLR4 + макрофагов и общим уровнем IgE сыворотки, согласуются с идеей взаимосвязи между респираторное воздействие PAMPs и астмы с повышенным IgE, и предполагают участие макрофага в таких отношениях.

Макрофаги являются ключевыми клетками в легочных врожденных иммунных ответах, поскольку они являются наиболее распространенным лейкоцитом в воздушных пространствах и одной из первых клеток, которые могут встретить вдыхаемые белки, которые могут действовать как аллергены. В зависимости от полученных сигналов макрофаги могут быть про-или противовоспалительными. Стимуляция макрофагов может быть результатом различных стимулов, включая включение TLR в присутствии IL-10 или других цитокинов [37]. Наш анализ экспрессии TLR 2 и 4 различными типами воспалительных клеток в индуцированной мокроте и крови показал более высокую экспрессию этих рецепторов в моноцитах / макрофагах, чем в нейтрофилах, как в мокроте, так и в периферической крови, что может отражать значимость макрофага в легочные врожденные иммунные ответы. Наши результаты также согласуются с предыдущими исследованиями, показывающими, что стимуляция TLR4 может стимулировать дальнейшую вербовку макрофагов в дыхательные пути [37].

Роль TLR2 в аллергическом воспалении дыхательных путей не совсем ясна. В нашей работе мы не обнаружили существенной зависимости между экспрессией TLR2 и полным IgE сыворотки. Однако сообщалось, что стимуляция TLR2 его лигандами усиливала Th2-ответы и усугубляла гиперреактивность дыхательных путей [43, 44]. Связь между активацией TLR2 и аллергическими ответами является сложной и может зависеть от природы и дозы антигена, времени и лигандов, связанных с TLR [45]. Изменчивость применяемых методов и популяций клеток и анализируемых образцов также могут объяснять ограничения в сопоставимости между различными исследованиями.

Наше исследование имеет некоторые ограничения: (i) влияние ингаляционных кортикостероидов на экспрессию TLR в индуцированной мокроте неизвестно; (ii) мы анализируем только рецепторы, выраженные на клеточной поверхности (TLR4 и 2); (iii) это описательное исследование. Наши результаты были значительными, но их следует изучать с более высоким размером популяции.

Таким образом, эта работа является первой оценкой экспрессии TLR по крови и индуцированных лейкоцитов мокроты у пациентов с астмой. Основной вывод заключался в том, что у пациентов с астмой с высоким общим сывороточным IgE более высокий процент макрофагов, выражающих TLR4 в индуцированной мокроте, по сравнению с пациентами с нормальными значениями общего IgE сыворотки. Этот результат подтверждает возможность терапевтических подходов к некоторым формам иммуно-опосредованного заболевания легких путем стимуляции или блокирования TLR с помощью агонистов или антагонистов [46] и может быть использован в будущем для терапевтического обнаружения цели.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Вклад авторов

Все авторы внесли существенный вклад в исследование (либо в концепцию и дизайн, получение данных, либо анализ и интерпретацию результатов), критически проанализировали незавершенное производство и утвердили окончательный вариант рукописи. В частности: AC создал гипотезу, зачислил пациентов, построил базу данных, выполнил статистический анализ и написал рукопись; EM обработал образцы индуцированной мокроты, забил подсчет воспалительных клеток и провел анализ проточной цитометрии; MT и JG проводили индуцированную технику мокроты, спирометрию, тесты на аллергию на кожные уколы, выборку крови и определения FeNO; CJ и SV разработали исследование и способствовали написанию рукописей; DRB и LS, собирали клинические данные пациентов и способствовали написанию рукописей; ВП разработал исследование, набрал пациентов и внес вклад в рукописное письмо. Эта статья является частью докторской диссертации ACL. Все авторы прочитали и утвердили окончательную рукопись.

Мы благодарны всем участникам исследования. Мы также благодарим Алисию Бельду за ее техническую поддержку.

Это исследование было поддержано Каталонским институтом пневмологии (FUCAP) (Beca Leti 2011, стипендия Мария Рава 2012); Испанское общество пневмонии и торакальной хирургии (SEPAR) (стипендия Гранта) и Социально-исследовательский план наиболее иллюстрированного управления (МВД, Частный фонд больницы Святого Креста и Святого Павла) (стипендия Гранта) , Барселона, Испания.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *