Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Является ли западный диетически индуцированный безалкогольный стеатогепатит в Ldlr — / — Мыши обратимы?

Is Western Diet-Induced Nonalcoholic Steatohepatitis in Ldlr-/- Mice Reversible?
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4711955/

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Задуманные и разработанные эксперименты: KAL DBJ. Выполнял эксперименты: KAL DBJ. Проанализированы данные: KAL DBJ. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: KAL DBJ. Написал газету: KAL DBJ.

Безалкогольная жирная болезнь печени (NAFLD) является основным бременем общественного здравоохранения в западных обществах. Прогрессивная форма NAFLD, безалкогольного стеатогепатита (NASH), характеризуется гепатостатиозом, воспалением, окислительным стрессом и повреждением печени, которое может прогрессировать до фиброза и цирроза; факторы риска гепатоцеллюлярной карциномы. Учитывая объем НАСГ, необходимо подтвердить правильность протоколов лечения (например, диеты с низким содержанием жиров и потери веса).

Мы оценили эффективность двух диет, не очищенной чау-чау (NP) и очищенной (с низким содержанием жиров с низким содержанием холестерина, LFLC) диеты, чтобы отменить западную диету (WD) -индуцированный NASH и фиброз у мышей Ldlr — / -.

Мыши, которых кормили WD в течение 22-24 недель, развивали устойчивый гепатостатиоз с легким фиброзом, тогда как мыши, поддерживаемые на WD, дополнительно 7-8 недель развивали NASH с умеренным фиброзом. Возвращение мышей, получавших WD, в диеты NP или LFLC значительно уменьшало массу тела и плазменные маркеры метаболического синдрома (дислипидемия, гипергликемия) и маркеры экспрессии гена печени воспаления (Mcp1), окислительный стресс (Nox2), фиброз (Col1A, LoxL2, Timp1 ) и сшивание коллагена (гидроксипролин). Анализ временного курса показал, что триглицериды плазмы и печеночная МР-1 Col1A1 быстро снижались после перехода от WD к диете LFLC. Однако содержание триглицеридов в печени и фиброз не возвращались к нормальным уровням через 8 недель после изменения диеты LFLC. Исследования временных курсов дополнительно выявили сильную связь (r2 ≥ 0,52) между плазменными маркерами воспаления (активаторы TLR2) и маркеры фиброза печени (Col1A, Timp1, LoxL2). Маркеры воспаления и фиброза были обратно связаны (r2 ≥ 0,32) с изменениями, вызванными диетой в содержании полиненасыщенных жирных кислот (PUFA) в печени.

Эти исследования устанавливают временную связь между плазменными маркерами воспаления и печеночной ПНЖК и фиброзом. Низкожирные низкохолестериновые диеты способствуют изменению многих, но не всех, особенностей, связанных с WD-индуцированным NASH и фиброзом у мышей Ldlr — / -.

Все соответствующие данные содержатся в документе и его файлах вспомогательной информации.

Безалкогольная жирная болезнь печени (NAFLD) является наиболее распространенной причиной хронической жировой болезни печени в США, которая поражает 10-35% взрослых и все большее число детей [1-3]. Частота NAFLD особенно высока (≥60%) у пациентов с ожирением и диабетом типа 2. NAFLD в первую очередь характеризуется избыточным отложением нейтрального липида (гепатостатиоза) в печени, в котором> 5% печени хранится нейтральный липид (триглицериды и эфиры холестерина). Гепатостатиоз может прогрессировать до безалкогольного стеатогепатита (NASH). NASH характеризуется воспалением печени, повреждением / смертью гепатоцитов и окислительным стрессом. Чрезмерное повреждение печени способствует фиброзу, то есть отложению внеклеточного матрикса (ECM), состоящему из коллагенов, эластина и других белков. Фишез, связанный с NASH, является фактором риска развития цирроза и первичной гепатоцеллюлярной карциномы. Предполагается, что осложнения, вызванные NASH, будут основной причиной пересадки печени к 2020 году [4].

В настоящее время нет одобренных FDA терапий для NAFLD, и в целом клиницисты просто лечат основные сопутствующие заболевания, связанные с метаболическим синдромом (MetS), то есть гипергликемия и дислипидемия натощак. Учитывая, что NAFLD / NASH характеризуется осаждением липидов в печени и часто сопровождается центральным ожирением, это логическая рекомендация для клиницистов поощрять своих пациентов изменять диетическое потребление и потерять лишний вес тела. Однако эффективность этих рекомендаций по продвинутому NASH не очень хорошо охарактеризована.

Более того, осложнение передового NASH — это развитие фиброза, вызванного значительным повреждением печени. Хотя фиброз когда-то считался необратимым, более поздние исследования грызунов и людей показывают, что фиброз печени является обратимым [5-12]. Общие результаты этих исследований показывают, что фиброз печени решает, как только удаляется стимул для повреждения печени. Эти исследования, однако, исследовали обратимость фиброза в отсутствие хронического метаболического фенотипа, который характеризует НАСГ у пациента с ожирением-MetS. Таким образом, применимость этих данных для пациентов с ожирением-MetS с NASH неясна.

Для решения этой проблемы мы разработали модель мыши с использованием Ldlr — / — мышей, питавшихся западной диетой (WD) [13-15]. WD умеренно высокий (~ 43% общего количества калорий) в насыщенных, мононенасыщенных и транс-жирах, сахарозе (30% общего количества калорий) и холестерина (0,15 г%). Долгосрочная подача WD вызывает тяжелый фенотип NASH в контексте MetS у мышей Ldlr — / -; в которой Ldlr — / — мыши становятся ожирением и отображают метаболические маркеры MetS, такие как гипергликемия натощак и дислипидемия. Плазма у этих мышей выявила признаки эндотоксинемии и поражения печени (ALT и AST), а печень от этих мышей проявляет гистологические и биохимические признаки ожирения, воспаления и фиброза. Фенотип NASH у этих мышей развивается в сочетании с наступлением MetS, ожирением, гипергликемией, дислипидемией и резистентностью к инсулину. Таким образом, эта модель мыши является репрезентативной для NASH, основанной на рационе, и повторяет фенотип NASH у людей с ожирением с помощью MetS.

Чтобы проверить гипотезу о том, что потеря веса и диетические изменения являются эффективными при обращении NASH, индуцированных в контексте MetS, мы определили способность неочищенного чау (NP) и очищенной диеты с низким содержанием жиров с низким уровнем холестерина (LFLC), как правило используется в качестве контрольной диеты в исследованиях ожирения, вызванных диетой [16], для обратной WD-индуцированной MetS и NASH у мышей Ldlr — / -. Мы использовали подход временного курса для установления ассоциаций между изменениями в плазме и параметрами печени во время диетической ремиссии MetS и NASH. В результате этого анализа установлено, что переключение WD-питаемых Ldlr — / — мышей на диету NP или LFLC оказывает большое влияние на многие, но не все, функции, связанные с MetS и NASH.

Все процедуры по использованию и уходу за животными для лабораторных исследований были одобрены Комитетом по организации и уходу за животными в Орегонском государственном университете. Самцы Ldlr — / — мышей [B6; 129S7-Ldlrtm1Her / J, запас № 002207, приобретенные у Jackson Labs] индивидуально размещались, поддерживались в 12-часовом цикле света / темноты и были акклиматизированы для животных объектов в OSU для 1- за неделю до начала экспериментов. По окончании обоих исследований все мыши были голоданы в течение ночи (с 1800 до 0800 ч) до пожертвования путем введения СО2 и обескровливания; кровь и печень были собраны, как описано ранее [14].

В возрасте 10 недель мышей рандомизировали до 3 групп лечения (4 мыши на группу): группа 1) кормили ad libitum Purina Pico Lab Diet 5053 для 29 недель [(неочищенная диета, [NP], таблица S1], группа 2 ) кормили ad libitum Western Diet (WD, Research diets D12079B) за 29 недель [WD-29]; Группа 3) мышей кормили ad libitum WD на 22 недели, а затем переключили на диету ad libitum NP на 7 недель (от WD до NP). Все мыши были умерщвлены после 29 недель на диете NP или WD.

Исследование 2 состояло из 6 групп (5-6 мышей на группу). В возрасте 9 недель мышей кормили одним из двух диет: диеты с низким содержанием жиров и низким содержанием холестерина (LFLC) (Research Diets 12450B). Содержание сахарозы в диете LFLC почти соответствовало содержанию сахарозы в WD (таблица S1). Мышей поддерживали на их соответствующих диетах в течение 24 недель. В этом исследовании оценивался эффект снижения диетического липида (жиров и холестерина) на ремиссию NASH. Группа, получившая WD, была принесена в жертву после 24 недель на диете, чтобы установить исходный статус печени (WD-24). В 24 раза дополнительные WD-группы были переведены на диету LFLC (WD-24 в LFLC) на 1, 2 или 8 недель; (то есть WD-24 до LFLC 1 wk, WD-24 — LFLC 2 wks, WD-24 — LFLC 8 wks, соответственно). Мышей с LFLC (LFLC-32) и WD-кормящих мышей (WD-32) поддерживали на их соответствующих диетах в течение 32 недель.

Расчет мощности (http://www.dssresearch.com/toolkit/spcalc/power_a1.asp) выполнялся со следующими параметрами: разность между тестом (тестовое значение = 8) и контролем (контрольное значение = 4), т. Е. средняя разница в 2 раза; стандартное отклонение 20% от среднего; 95% достоверность, статистическая мощность для 4 и 6 животных (размер выборки) составила 99,1% и 99,9% соответственно.

РНК была извлечена из печени, используя Trizol (Life Technologies), как описано [16]. РНК количественно определяли с помощью спектрофотометрии с использованием нанотрубки-1000. qRT-PCR проводили с использованием быстродействующей машины 7900HT из Applied Biosystems, как описано ранее [16].

Печеночные липиды экстрагировали, как описано ранее [17]. Общий липидный экстракт подвергали омылению и метилированию; и метиловые эфиры жирных кислот отделяли и количественно определяли газовой хроматографией [17]. Стандарты GC были приобретены у Nu-Chek Prep Inc. Содержание белка в печени измерялось с использованием Quick Start Bradford Reagent (Bio-Rad) и альбумина бычьей сыворотки (Sigma-Aldrich) в качестве стандарта.

Плазменные триглицериды, общий и свободный холестерин и глюкозу измеряли с использованием наборов, полученных от Wako. Плазменную аспартатаминотрансферазу (АСТ) и аланин-аминотрансферазу (АЛТ) измеряли с использованием наборов из Thermo Fischer Scientific. Плазменный эндотоксин измеряли с использованием кинетического хромогенного набора, полученного от Lonza. Активность агониста плазменной толерантности как рецептора (TLR) 2 и TLR4 измеряли с использованием систем клеток Hek-Blue из Invivogen. Плазменный лептин и адипонектин измеряли наборами ELISA от R & D Systems. Печеночный гидроксипролин измеряли с использованием колориметрического анализа, полученного от Sigma-Aldrich в соответствии с протоколом производства и нормализованного к содержанию белка в печени, как измерено с помощью анализа Брэдфорда.

Печень (~ 100 мг) фиксировали в буферизованном формалине, вставляли парафином, нарезали и окрашивали гематоксилин-эозином, трихромом или сириусом (National Histology, Veradale, WA). Каждый слайд содержал 4-6 ломтиков / печень. Стеатоз и фиброз наблюдались последовательно на всех участках печени у одного и того же животного. Микрофотографии секций печени, показанные на рисунках, являются репрезентативными для всей печени в каждой группе.

Карты тепла были подготовлены с использованием данных о массе тела, плазме (глюкозе, липидах, АЛТ, АСТ, лептине, адипонектине, TLR2 и TLR4 агонисте) и печеночных (триглицериды, холестерин, жирные кислоты, экспрессия генов, гидроксипролин). Данные были проанализированы с использованием статистической упаковки в MetaboAnalyst 3.0 [http://www.metaboanalyst.ca/MetaboAnalyst/] [18]. В результате анализа были получены карты тепла, графики вулканов, корреляционные анализы и ANOVA с помощью теста Tukey HSD Post-hoc. Мы также использовали отдельный онлайн-статистический пакет [http://vassarstats.net/] для однонаправленного ANOVA с HSD по методу Tukey Post-hoc для определения особых особенностей для выявления существенных различий между группами, когда в анализ были включены более двух групп. Т-критерий Стьюдента использовался, когда сравнивались только две группы, и использовались непараметрические тесты, когда между двумя группами выявлялась неравная дисперсия, определяемая f-критерием. Значение p ≤ 0,05 считалось статистически иным. Все значения указаны как среднее ± SD.

Кормление Ldlr — / — мышей WD для 29 недель вызвало фенотип MetS и NASH, характеризующийся ожирением, дислипидемией, гепатостатиозом и фиброзом (рис. 1 и S2, S1 и S2 Figs). Пероральные триглицериды (маркер стеатоза) и гидроксипролин (маркер фиброза и сшивание коллагена) были увеличены у мышей, получавших WD ~ 2,5 и ~ 2 раза, соответственно. Повышенные уровни гидроксипролина в печени коррелировали с гистологическими данными о ветвящем фиброзе (трихром: синий окрашенный коллаген, желтые стрелки, рис. 1).

Мышам вводили диеты NP (Lab Chow) или WD, как описано в «Материалах и методах». [A]: Левая и правая панели представляют собой окрашивание гематоксилином-эозином (H & E) и трихром (TC) секций печени соответственно. Увеличение для панелей H & E и TC составляло 4X соответственно. Липидные капли появляются в виде белых кругов (черные стрелки), в то время как ветвящийся фиброз (желтые стрелки) появляется в виде синих нитей в трихромных пятнах печени. Слайды являются репрезентативными для всей печени в каждой группе. [B]: Триглицерид печени определяли количественно, как описано в Методах и Материалах. Результаты представлены в виде триглицерида, мкг / мг белка. [C]: содержание гидроксипролина в печени определяли количественно, как описано в Методах и Материалах. Результаты представлены в виде белка Hydroxyproline мкг / мг. Статистический анализ использовал ANOVA plus Tukey’s HSD для установления статистической значимости.

После 22 недель на WD мышей переключили на диету NP на 7 недель. Это изменение в рационе снизило вес тела; печеночных триглицеридов до уровней, наблюдаемых у мышей, получавших НП за 29 недель. В то время как уровни гидроксипролина в печени были снижены в этой группе, это изменение в гидроксипролине было незначительным. Трихромное окрашивание также обнаружило признаки фиброза в печени мышей, перешедших из диеты WD в NP. При переключении диеты с WD на NP удалось значительно уменьшить массу тела и гепатостатиоз, он не смог полностью отменить индуцированный WD печеночный фиброз.

Затем мы определили, изменились ли изменения гистологических признаков в других физиологических маркерах NASH. Карта тепла (рис. 2) включает данные о массе тела, параметрах плазмы и печени, а также о печеночных жирных кислотах. Данные, используемые для карты тепла, отображаются в таблице S2; S1 и S2 Рис. Большинство параметров увеличилось у мышей, которым вводили WD, по сравнению с мышами, получавшими диету NP; это включало вес тела, уровень глюкозы в крови и уровни липидов в крови, активаторы TLR2 и TLR4, маркеры поражения печени (ALT & AST), TNFα и лептин. Гепатит липидов (триглицерид и холестерин) и маркеры экспрессии гена NASH, связанные с воспалением; и содержание печеночной насыщенной и мононенасыщенной жирной кислоты также было увеличено. Факторы, снижающиеся в ответ на подавление WD, включали адипонектин плазмы, печеночные ферменты, участвующие в ремоделировании ECM печени (Col4A1, Mmp9), удлинение жирных кислот (Elovl5 и Elovl6), углеводный метаболизм (Pck1, G6Pase) и уровни печеночной активности ω3 и ω6 PUFA.

Карта тепла была создана с использованием статистической упаковки в MetaboAnalyst 3.0 (http://www.metaboanalyst.ca/MetaboAnalyst/), как описано в «Материалах и методах». [A]: Карта тепла представляет собой визуализацию изменений в изобилии / уровне признаков в строках (например, глюкозы в плазме) для каждого животного (столбцы). Число в нижней части карты тепла — идентификационный номер животного. Цвет варьируется от темно-оранжевого (высокий уровень или уровень) до темно-синего (низкий уровень обилия или уровень); белый не меняется.

У мышей, которым вводили WD в течение 22 недель и переключили на НП в течение 7 недель, наблюдалось почти полное изменение всех параметров. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что диета с низким содержанием жира, простым сахаром и холестерином может изменить многие функции организма, плазмы и печени, связанные с WD-индуцированным NASH. Однако в этой группе сохраняется фиброз (рис. 1).

Диета NP, используемая в исследовании 1, — это диета для поддержания грызунов и не характерна для человеческого питания. В исследовании 2 была оценена диета с низким содержанием жиров с низким уровнем холестерина (LFLC), обычно используемая в качестве контрольной диеты в исследованиях ожирения с диетой с использованием мышей дикого типа C57BL / 6J [16, 19]. Это исследование также предназначалось для определения временного курса, по которому диетическое питание LFLC разрешало физиологические маркеры NASH.

Ldlr — / — мышей подавали WD на 24 недели (WD-24) и расширенную подачу на 32 недели (WD-32). Как и в случае с исследованием 1, эти мыши набрали вес и проявили множественные плазменные и печеночные особенности, связанные с MetS и NASH (рис. 3, таблица S3). Плазменные маркеры этого фенотипа включали: гипергликемию, дислипидемию и повышенные уровни плазмы АЛТ, лептина, TNFα и TLR2 и активаторов TLR4. Печень этих мышей была насыщена липидом и показала признаки слабого фиброза, что отразилось на увеличении синего окрашивания в окрашенных трихром печени и повышенных уровнях гидроксипролина (рис. 3).

[A]: Левая и правая панели представляют собой окрашивание гематоксилином-эозином (H & E) и трихром (TC) секций печени соответственно. Увеличение для панелей H & E и TC составляло 16X и 10X соответственно. Липидные капли появляются в виде белых кругов (черные стрелки), в то время как фиброз (разветвление) появляется в виде синих нитей (желтых стрел) в трихромных пятнах печени. Слайды являются репрезентативными для всей печени в каждой группе. [B]: содержание гидроксипролина в печени определяли количественно, как описано в материалах и методах. Результаты представлены гидроксипролин мкг / мг белка

Переключение мышей из WD (WD-24) в диету LFLC на 8 недель (WD-LFLC-8 wks) исправляло многие, но не все, эффекты 24 недель приема WD. В частности, это вмешательство привело к снижению массы тела, уровня глюкозы в крови и уровня липидов, агонистов ALT, лептина и TLR2 и TLR4 до уровней, наблюдаемых у контрольных мышей, поддерживаемых на диете LFLC в течение 32 недель. Однако печень от мышей WD-LFLC-8 весила больше и имела больший уровень триглицеридов и холестерина, чем контрольные мыши, которым кормили диету LFLC для 32 недель. Фиброз печени, измеряемый гидроксипролином, не отличался от мышей, получавших WD, в течение 24 недель и WD-LFLC-8 wk, и был выше, чем мышам, которые получали диету LFLC в течение 32 недель. В соответствии с этими данными гистологический анализ (трихромное окрашивание, рис. 3) указывает на то, что ветвящийся фиброз (желтые стрелки на фиг. 3) все еще присутствует в печени мышей WD-LFLC-8. Таким образом, диета LFLC не способствует полной ремиссии NASH или фиброза.

Фенотипическое сравнение Ldlr — / — мышей, которым вводили две контрольные диеты (NP и LFLC) на 29 и 32 недели, соответственно показало, что мыши, которым кормили диету LFLC на 32 недели, весили больше (23%) и имели более высокие параметры плазмы, связанные с MetS , повреждение печени и системное воспаление, чем мышам, получающим НП (таблица S4). Печень этих мышей не отличалась от общего веса, веса печени в% от массы тела или содержания триглицеридов, но увеличивала (72%) уровень холестерина в печени. Маркеры экспрессии гена воспаления (Mcp1) и фиброз (Col1A1, Timp1) в печени мышей, получавших LFLC, значительно повышались по сравнению с мышами, питавшими диету NP.

WD влияет на широкий спектр функций, связанных с MetS и NASH (рис. 4). Используя карты теплоты и графики вулканов, мы сравнили LFLC-группу WD-32 и WD-LFLC-8 wk-группы (рис. 4 и таблица S3). Карта тепла иллюстрирует, что подавление WD было связано с изменениями массы тела и печени, множественными параметрами плазмы, связанными с MetS, содержанием жирных кислот в печени и многочисленными изменениями экспрессии гена печени, связанными с MetS и NASH. Маркеры экспрессии печеночных генов воспаления (Mcp1, Cd68, Trl4), окислительный стресс (Nox2, Hmox1), фиброз (Col1A1, Mmp2, Timp1 и 2), а также содержание гидроксипролина и мононасыщенных жирных кислот в печени (16: 1, ω7; 18: 1, ω7; 18: 1, ω9) были значительно увеличены с помощью диетического питания WD. Как видно из исследования 1, некоторые функции уменьшались с помощью NASH, включая экспрессию генов, участвующих в катаболизме триглицеридов (ATGL, TGH / Ces3), удлинении жирных кислот (Elov5) и содержании печенки ω3 и ω6 PUFA. На графике вулкана представлена ​​информация о величине изменения (Log 2 Fold Change) и p-значениях [-Log10 (P)], связанных с этими изменениями. Все плазма (ALT, холестерин), воспаление печени (Mcp1), жирные кислоты (18: 1, ω7, 20: 0) и маркеры фиброза (метки Timp1, Mmp2, Mmp13, LoxL2, Col1A1) были значительно индуцированы WD (Фиг. 4В).

Биоинформационный анализ данных использовал статистическую упаковку в MetaboAnalyst 3.0 (http://www.metaboanalyst.ca/MetaboAnalyst/), как описано в материалах и методах. [A]: Карта тепла представляет собой визуализацию изменений в изобилии / уровне признаков в строках (например, глюкозы в плазме) для каждого животного (столбцы). Число в нижней части карты тепла — идентификационный номер животного. Цвет варьируется от темно-оранжевого (высокий уровень или уровень) до темно-синего (низкий уровень обилия или уровень); белый не меняется. [B и C]: все данные в тепловой карте были использованы для построения графиков вулканов с использованием пакета статистики в MetaboAnalyst 3.0. График вулкана позволяет визуализировать распределение р-значений по сравнению с изменением складки для всех измеряемых объектов, которые включают массу тела, параметры плазмы и печени, печеночные транскрипты и жирные кислоты.

Чтобы определить влияние 8 недель диеты LFLC на ремиссию NASH, мы сравнили группы лечения WD-32 и WD-LFLC-8 (рис. 4A и 4C). Карта тепла и графики вулканов показывают, что большинство особенностей, которые были вызваны подачей WD, были отменены путем подачи мышей NASH на диету LFLC на 8 недель. В отличие от исследования 1, где мышей, которым вводили WD, переводили в диету NP, мыши, которым вводили WD, переключились на группу LFLC-8 wks (исследование 2), не имели снижения стеатоза печени (триглицерид и холестерин) (фиг.3, 4), что указывает на то, что две диеты, используемые для обратного WD-индуцированного NASH, не дают полностью тех же печеночных исходов. Вывод, что ни контрольная диета не способна обратить вспять индуцированный WD фиброз печени, предполагает, что уменьшение фиброза печени требует действий в дополнение к тем, которые вызваны потерей веса и потреблением низкокалорийной диеты с низким уровнем холестерина.

Установив, что диета LFLC может по крайней мере частично отменить многие из WD-индуцированных признаков, связанных с фенотипом NASH, мы определили время, по которому диета LFLC способствует ремиссии NASH. Обзор этих эффектов показан на диаграмме тепла (рис. 5), гистологии печени (рис. 6) и рис. 7-10, где мы количественно определяем выбранные функции. У мышей, кормящих диету LFLC, наблюдается умеренный уровень стеатоза и не обнаруживаемый фиброз (рис. 6). Мыши, которых кормили WD на 24 или 32 недели, показали более высокий уровень стеатоза (нейтральное хранение липидов) и фиброз от легкой до умеренной (фибрин фибрин с синими красными пятнами). Переключение мышей на диету LFLC на срок до 8 недель не отменяет стеатоз печени или фиброз (рис. 3 и 6).

Как поясняется на фиг. 2, тепловая карта представляет собой визуализацию изменений сущностей (строк, например, глюкозы в плазме) у мышей (столбцов). Эта цифра представляет собой анализ 6 групп в исследовании временного курса: LFLC, WD-24, WD-32, WD-24 до LFLC в течение 1, 2 или 8 недель. Количество мышей в каждой группе составляет: 6, 5, 5, 6, 6, 5 соответственно. Номера внизу карты тепла обозначают идентификационные номера мыши.

Секции печени окрашивались Сириусом Красным, чтобы выявить фиброз, появляющийся как красный ветвящийся фиброз (черные стрелки). Витражи разделены на мышей, которым вводили WD в течение 24 недель, LFLC или WD в течение 32 недель, а мыши вводили WD в течение 24 недель и переключились на диету LFLC на 1, 2 или 8 недель. Разделенные участки печени представляют собой всю печень в каждой группе. Увеличение всех изображений составляет 4X.

Уровни глюкозы [A], триглицеридов [B], общего холестерина [C] и свободного холестерина [D] были проанализированы, как описано в материалах и методах. Результаты представлены в виде значений плазмы; среднее ± SD с 5-6 животными / группой. ANOVA: a, p≤0,05 по сравнению с группой LFLC; b, p≤0,05 по сравнению с группой WD-32; c, p≤0,05 по сравнению с группой WD-24.

Уровни плазмы аланинаминотрансферазы (АЛТ) [А], активаторы плацебоподобного рецептора 2 (TRL2), [B] и TLR4 [C] и лептина [D] были количественно определены, как описано в «Материалах и методах». Адипонектин также определяли количественно, но адипонектин не оказывал существенного влияния на диету (не показан). Результаты представлены в виде значений плазмы; среднее ± SD с 5-6 животными / группой. ANOVA: a, p≤0,05 по сравнению с группой LFLC; b, p≤0,05 по сравнению с группой WD-32; c, p≤0,05 по сравнению с группой WD-24.

Печеночная экспрессия транскриптов мРНК, кодирующих белки, участвующие в воспалении (Mcp1, CD68) [A] и фиброз (Col1A1
[B], Timp1
[C], Mmp2 и Lox
[D]) количественно определяли с помощью qRTPCR, как описано в материалах и методах. Результаты представлены как изменение мРНК-Fold; среднее ± SD с 5-6 животными / группой. ANOVA: a, p≤0,05 по сравнению с группой LFLC; b, p≤0,05 по сравнению с группой WD-32; c, p≤0,05 по сравнению с группой WD-24.

Линейный регрессионный анализ использовался для оценки связи между транскриптами печени, участвующими в фиброзе печени, [A]: Col1A1 по сравнению с LoxL2; [B]: LoxL2 против Timp1. Этот анализ был использован для оценки связи между активаторами TLR2 плазмы и транскриптами печени, участвующими в воспалении [C]: Mcp1 по сравнению с TLR2] и фиброзом [D]: LoxL2 по сравнению с TLR2]. Как указано в таблице 1, активаторы плазмы TLR 2 были идентифицированы как высокозначительный плазменный маркер NASH. R2 и p-значения были такими же, как описано в материалах и методах.

Глицида плазмы натощак повышалась путем подачи мышей в WD и возвращалась к контрольным уровням (LFLC) на 8 недель (рис. 7). Изменения в глюкозе в плазме сопровождались изменениями в плазме в плазме и свободным холестерином. Напротив, плазменные триглицериды были индуцированы WD, но быстро возвращались к контрольным уровням (в течение 1 недели) после переключения с WD на диету LFLC.

Плазма ALT была увеличена (в 3 раза) WD, и этот маркер повреждения печени уменьшился до контрольных уровней в течение 2 недель после переключения на диету LFLC (рис. 8). Активаторы плазмы TLR2 и TLR4 представляют собой как полученные из кишечника микробные продукты, так и эндогенно полученные молекулы, которые были связаны с системным и печеночным воспалением и NASH [20-23]. Активаторы плазмы TLR2 и TLR4 были увеличены WD и были уменьшены до контрольных уровней после 2 недель кормления диеты LFLC. Лептин, цитокин, вырабатываемый преимущественно жировой тканью, был связан с фиброзом печени [24]. Плазменный лептин был значительно повышен в группе WD-32.

Анализ экспрессии гена печени свидетельствует о влиянии диеты на сигнальные пути, влияющие на воспаление, фиброз и окислительный стресс. Кормление WD увеличивало экспрессию Mcp1, CD68 (рис. 9) и другие маркеры воспаления печени (рис. 4). Переключение мышей с WD на диету LFLC уменьшило количество печеночных транскриптов в течение 2 недель. Этот ответ соответствовал изменениям в активаторах TLR2 и TLR4 печени (рис. 8 и 9).

WD также увеличивал экспрессию транскриптов, связанных с фиброзом печени и ремоделированием матриц. Коллаген 1A1 (Col1A1) является основным подтипом печеночного коллагена, связанным с NASH у грызунов (рис. 9) и человека [25, 26]. Экспрессия Col1A1 сильно варьировалась в группе WD-24, тогда как группа WD-32 проявляла более чем 20-кратное увеличение экспрессии Col1A1 по сравнению с мышами, питавшими диету LFLC в течение 32 недель. Переключение мышей WD-24 на LFLC на восемь недель не позволило вернуть выражение Col1A1 в уровни, наблюдаемые у контрольных мышей, что было согласуется с гистологией, представленной на рис. 6. Ингибитор тканевой ингибиторной реакции металлопротеиназы-1 (Timp1) был хорошо индуцирован у мышей подавали WD на 24 или 32 недели. Выражение Timp1 показало аналогичный общий профиль, как Col1A1, но с меньшей вариабельностью в его выражении. Металлопротеаза-2 (Mmp2) и лизилоксидаза (Lox) участвуют в ремоделировании ECM и сшивке коллагена, соответственно. Оба транскрипта были увеличены в группах WD-24 и WD-32. Экспрессия Lox вернулась к контрольным уровням после подачи LFLC на 8 недель. Напротив, выражение Mmp2 не смогло вернуться к уровням управления в течение 8 недель перехода от WD к диете LFLC.

Регрессионный анализ использовался для оценки ассоциаций между параметрами плазмы и печени. Статистический анализ оценил плазменные и печеночные особенности, связанные с NASH у мышей Ldlr — / -; 10 лучших функций перечислены в таблице 1, а все функции, которые значительно изменились, перечислены в таблице S5. Верхние плазменные и печеночные признаки были активаторами TLR2 и мРНК лизилоксидазы-2 (LoxL2), соответственно. Регрессионный анализ был использован для определения степени, в которой показатели плазмы и печени демонстрировали аналогичные закономерности во время изучения курса времени. Гепатические гены, связанные с образованием коллагена и катаболизмом (Col1A1 & Timp1), были сильно связаны с экспрессией LoxL2 (r2 ≥ 0,8) (фиг. 10A и 10B). LoxL2 является одним из нескольких лизилоксидаз / лизилоксидазоподобных ферментов, участвующих в сшивании коллагена.

1Все данные, использованные для построения тепловой карты на рис. 5, использовались для статистического анализа с использованием статистического пакета MetaboAnalyst 3.0. В приведенной выше таблице перечислены 10 лучших функций с наименьшими значениями p, т. Е. Большое значение. Полный список функций и их p-значений предоставляется как «Таблица S5. Значительные особенности, связанные с NASH у мышей Ldlr — / -, как определено ANOVA-Tukey HSD ».

Агонисты TLR2 связывают рецепторы TLR2 и активируют NFκB, ключевой транскрипционный фактор, участвующий в воспалении [27]. Печеночный Mcp1 является геном-мишенью NFκB; уровни агониста плазмы TLR2 были сильно связаны с экспрессией гена печени Mcp1 (r2 = 0,77) (фиг.10С). Связь между уровнями агониста TLR2 и экспрессией LoxL2 также была сильной (r2 = 0,52) (рис. 10D).

Уровни липидов плазмы (триглицерид и холестерин) проявляли умеренную связь с печеночной экспрессией LoxL2 и Timp1 (не показаны). Интересно отметить, что связь между агонистом TLR2 плазмы и липидами печени была сильнее с холестерином печени (r2 = 0,19), чем триглицерид (r2 = 0,025). Аналогично, связь между экспрессией печени LoxL2 была сильнее с печеночным холестерином r2 = 0,35, чем триглицерид в печени (r2 = 0,063). Однако ассоциации между триглицеридами печени и агонистом TLR2 или экспрессией LoxL2 были слабыми.

Люди с NASH и Ldlr — / — мышами, получавшими WD, имеют более низкую плазменную и печеночную содержание ω3 и ω6 PUFA [14,15, 28-30]. Оба исследования, представленные здесь (рис. 2 и 5), показывают, что мышам-хозяевам WD уменьшалась печеночная ω3 и ω6 PUFA, и что мы возвращали мышей, получавших WD, в диету NP или LFLC, по крайней мере частично, восстанавливали уровни печеночной концентрации этих PUFA. Здесь мы показываем, что существует небольшая обратная связь между изменениями печеночной ПНЖК и плазменной и печеночной маркеров NASH, то есть агониста TLR2 и мРНК LoxL2 (r2 = 0,32 и 0,35) соответственно (фиг.11). WD подавляла измененную экспрессию для некоторых генов, участвующих в десатурации жирных кислот (Scd1) и удлинения (Elovl5 & Elovl7) (рис. 12). В частности, WD увеличивал экспрессию Scd1 и Elovl7, подавлял экспрессию Elovl5 и не оказывал влияния на экспрессию Fads1, Fads2 или Elov6. Переключение мышей из WD в LFLC на 8 недель возвращало экспрессию гена Scd1 и Elovl7 в уровни, наблюдаемые у мышей, которым кормили диету LFLC на 32 недели. Elovl5, напротив, не был восстановлен до нормального уровня диетой LFLC. В целом, изменения в печеночных десатуразах и элонгазах не полностью объясняют WD-индуцированные изменения содержания печеночной ПНЖК.

Линейный регрессионный анализ использовался для оценки связи между печеночной PUFA и активацией TLR2 плазмы [A]: ω3 PUFA против активации TLR2; [B]: ω6 PUFA против активации TLR2] и содержание транскрипта в печени LoxL2 [C]: ω3 PUFA по сравнению с мРНК LoxL2; [D]: ω6 PUFA против мРНК LoxL2]. R2 и р-значения были получены, как описано в материалах и методах.

[A]: количество энзимов в печеночной транскрипции количественно определяли, как описано в материалах и методах. Результаты представлены как изменение мРНК-Fold; среднее ± SD с 5-6 животными / группой. [B]: содержание печеночной ПНЖК. Всего печеночных жирных кислот количественно определяли, как описано в материалах и методах. Печеночная ПНЖК представлена ​​в виде мас.% Жирной кислоты, средняя ± SD с 5-6 животными / группой. ANOVA: a, p≤0,05 по сравнению с группой LFLC; b, p≤0,05 по сравнению с группой WD-32.

Наша цель состояла в том, чтобы оценить способность двух низкокалорийных диет с низким уровнем холестерина, чтобы отменить WD-индуцированные MetS и NASH у мышей Ldlr — / -. Обе нечистые сыворотки (НП) и очищенные (с низким содержанием жиров с низким содержанием холестерина, LFLC) диеты были с низким содержанием жира (13% и 10% соответственно) и низким содержанием холестерина (0,014% и 0,0014% соответственно). Определяющей макроэлементной разницей между двумя диетами было содержание сахарозы (5,5% по сравнению с 35% общего количества калорий) в диетах НП и LFLC, соответственно. Эта разница в простом содержании сахара в рационе является, по крайней мере частично, ответственной за различия в результатах между исследованиями. Хотя мы признаем, что существуют небольшие различия в продолжительности исследования (всего 29 недель для исследования 1 и 32 недели для исследования 2), а также возраст мышей при старте исследования (9 против 10 недель возраста), результаты и выводы исследования поразительно похожи.

В отличие от диеты NP, диета LFLC не смогла отменить индуцированный WD гепатостатиоз (рис. 1, 3 и 6). Более того, как диеты NP, так и LFLC имели ограниченную способность реверсировать индуцированный WD печеночный фиброз как измеренный биохимически и гистологически. Обе диеты также не смогли восстановить WD-индуцированные изменения в содержании печеночных специфических MUFA и PUFA. В результате этих исследований установлено, что состав рациона, используемый для содействия ремиссии НАСГ / фиброза, значительно влияет на степень, в которой происходит ремиссия НАСГ, и что все признаки НАСГ не являются обратимыми в одном масштабе времени. Эти результаты также предполагают, что вмешательства, в дополнение к потере веса и потреблению низкокалорийной диеты с низким уровнем холестерина, необходимы для полного обратного вызванного WD NASH.

Кормление Ldlr — / — мышей WD повышает параметры плазмы, связанные с NASH и MetS, включая липиды плазмы (триглицериды и холестерин) и глюкозу (рис. 2, 4, 5 и 7). Изменения в этих метаболических маркерах сопровождались изменениями в циркулирующих биомаркерах поражения печени, например, ALT (рис. 8). У людей с NASH и T2DM потеря веса приводит к снижению уровня этих маркеров плазмы [31]. Возвращение мышей, которым вводили WD для контроля диет (NP или LFLC), приводило к снижению всех метаболических маркеров плазмы до нормального уровня. Эти параметры метаболизма плазмы быстро снижаются после изменения диеты и предшествуют изменениям общего статуса болезни печени NASH, и поэтому эти циркулирующие биомаркеры воспаления, гомеостаза глюкозы и повреждения печени не имеют параллельного печеночного статуса в отношении стеатоза или фиброза.

Как системное, так и печеночное воспаление может привести к прогрессированию NASH [15, 30, 32]. WD подавали увеличенные плазменные воспалительные маркеры (TLR2 и TLR4 агонисты, лептин) и индуцировали транскрипты мРНК печени, связанные с воспалением. TLR2 и TLR4 связывают бактериальные компоненты, а также некоторые компоненты хозяина (окисленные липиды, компоненты внеклеточного матрикса) [33-36]. Наши исследования показывают, что расширенная подача WD увеличивала как плазменные агонисты TLR2, так и TLR4. Активация сигнальных путей TLR2 и TLR4 включает в себя увеличение ядерной транслокации NFκB и последующую регуляцию воспалительных генов, включая сигнальные цитокины, такие как TNFα и IL1β. Сигналы, полученные из кишечника, такие как липополисахарид (LPS / эндотоксин), активируют TLR и способствуют патогенезу NASH [27, 37-40]. Уровни LPS в крови повышаются у людей [41] и мышей [15] с NAFLD. Диеты с высоким содержанием жиров (например, WD) способствуют увеличению циркуляции ЛПС путем перемещения ЛПС из просвета кишки в кровоток с помощью сборки и транспортировки хиломикрона [38, 42]. Взятые вместе, наши данные свидетельствуют о том, что WD является мощным индуктором системного воспаления, что способствует патогенезу NASH. Предоставление альтернативной диеты (LFLC или NP) мышам может улучшить некоторые из этих системных воспалительных медиаторов. Временной ход ремиссии этих показателей показывает, что печеночная экспрессия воспалительных генов (Mcp1 и CD68) снижалась в том же масштабе времени, что и потеря активаторов TLR2 и TLR4 плазмы (рис. 8 и 9).

Основная цель этих исследований заключалась в определении способности диетической модификации к обратному WD-индуцированному фиброзу печени. Недавнее исследование показало стадию фиброза как ведущий предиктор общей и смертности от болезней у пациентов с NASH [43]; таким образом, знание того, является ли фиброз обратимым, необходимо для лечения. Обратимость фиброза печени ранее изучалась в моделях острого химического (углеродного четыреххлористого, CCL4) индуцированного фиброза [5] и лигирования желчных протоков (BDL) [7]. Реверсирование индуцированного CCL4 фиброза происходит быстро, то есть полное разрешение фиброза происходит в течение 30 дней [6]. Разрешение на развитие фиброза печени в модели BDL потребовалось более 12 недель после удаления стимула [7]. Однако ни один из этих подходов не повторяет начало или ремиссию фиброза печени в контексте MetS и / или диабета типа 2. Поэтому наши исследования были посвящены модели WD-индуцированного NASH и фиброза, который является основным патофизиологическим признаком, связанным с NASH у людей с ожирением.

WD-кормление в течение 22-32 недель значительно повышает биохимические и гистологические маркеры фиброза. Возвращение мышей к диетам с низким содержанием жиров и холестерина уменьшилось, но не разрешило фиброз печени (рис. 1, 3 и 6). Обратимость NASH в моделях CCL4 и BDL предполагает, что фиброз печени является обратимым после удаления фактора (-ов), стимулирующего развитие и прогрессирование NASH. Учитывая, что контрольные мыши на диете LFLC проявляют небольшой фиброз, это говорит о том, что наше вмешательство в переключение с WD на LFLC должно было обратить вспять печеночный фиброз. Однако мыши, которые были переключены на NP или LFLC, по-прежнему проявляли фиброз после 8 недель на этих диетах с низким содержанием жира и низким холестерином. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что фиброз, который развивается из долговременного WD-кормления (то есть в патофизиологическом контексте MetS), не может быть обратимым только путем диетической модификации; и полное разворот фиброза потребует других стратегий.

Фиброзный статус печени определяется балансом осаждения и оборота ECM; и этот процесс контролируется экспрессией ECM-компонентов (коллагенов, эластинов и т. д.), Mmps, Timps и белков, контролирующих сшивание коллагена (лизилоксидаза [Lox] и LoxL подтипы 1-4 [5, 44-48] WD-индуцированный печеночный фиброз у мышей Ldlr — / — включает в себя индукцию образования коллагена (Col1A1, Col1A2, Col4A1). Это увеличение экспрессии коллагеновых подтипов согласуется с данными у людей [49]. Кроме того, WD также индуцирует несколько Mmps , Timps и ферменты, участвующие в химическом сшивании (подтипы Lox & LoxL) [25]. Биохимические и гистологические данные о фиброзе у мышей, получавших WD, которые мы сообщаем, дают четкое свидетельство того, что скорость производства коллагена превышает его деградацию. Наш анализ фиброза (Рис. 1, 3 и 6) согласуется с результатами, полученными у людей после потери веса после желудочной хирургии (желудочная полоса или Ру-эн-Y) [8, 31, 50]. К сожалению, у людей существуют как значимые долгосрочные осложнений и высоких показателей отказов желудочных операций [51] d, таким образом, эти подходы не могут быть идеальными для лечения как ожирения, так и НАСГ.

В то время как диетический холестерин является известным драйвером прогрессирования NASH [52], синдром дисрегуляции холестерина и метаболизм также является отличительной чертой NASH [53]. Холестерин может быть превращен в оксистеролы, некоторые из которых являются лигандами для LXR, ключевым регулятором экспрессии липогенных генов [54]. Мы и другие сообщили, что содержание холестерина в печени связано с серьезностью НАСГ [14, 15, 52]. Несмотря на очень низкое содержание холестерина в диете LFLC (таблица S1), печени в WK-LFLC-8 wk-группе не наблюдалось снижения уровня холестерина в печени или триглицеридов по сравнению с WD-32 wk-группой (таблица S3). Это говорит о том, что удаление избыточного холестерина из диеты недостаточно для снижения содержания холестерина в печени после начальной индукции NASH. Несмотря на то, что у мышей WD-LFLC-8 у мышей было 2 — 3-кратное повышение уровня холестерина, большинство маркеров воспаления печени были разрешены (рис. 9). Эти данные показывают диссоциацию между содержанием холестерина в печени и воспалением.

Ранее была описана роль простых сахаров в развитии жировой печени [55, 56]. Избыточная диетическая сахароза, наблюдаемая в диетах WD и LFLC, вероятно, увеличивает как липогенез de novo, так и синтез холестерина, что приводит к увеличению образования липидов в качестве триглицеридов и сложных эфиров холестерина и их хранению в каплях липидов, то есть гепатостатиозу, как это видно в WD и WD -LFLC-8wk (рис. 3). Кормление мышей диетой NP после индукции NASH (группа WD-NP), снижало как пищевой холестерин, так и простые сахара и разрешало гепатостатиоз; как триглицериды, так и холестерин в печени возвращаются в норму (таблица S2). Поскольку печеночное воспаление, разрешенное как в группах WD-NP, так и в WD-LFLC, сохраненный холестерин, то есть сложный эфир холестерина, сам по себе не вреден. Однако, снижение холестерина в печени требует снижения как диетического холестерина, так и простого сахара.

В отличие от фиброза, реверсирование вызванного раком гепатостатиоза существенно зависит от типа диеты, используемой для стимулирования ремиссии. Диета NP с низким содержанием жира, холестерина и простого сахара способствовала большему снижению уровня гепатостатиата, чем диета LFLC, диета с более высоким содержанием сахарозы (таблицы S2 и S3). Содержание сахарозы в диете LFLC сопоставимо с содержанием сахарозы в WD. Вывод о том, что диета LFLC не позволяет обратить вспять гепатостатиоз, настоятельно указывает на то, что ограничение диетического простого сахара в дополнение к диетическим жирам требуется для отмены гепатостатита. Роль фруктозы и других простых сахаров хорошо установлена ​​в продвижении нейтрального хранения липидов в печени [57]. Однако обнаружение того, что некоторые из контрольных мышей, получавших LFLC, проявляли гистологически мягкий гепатостайоз (биохимически, триглицеридные меры между LFLC и NP не различны), но не NASH поддерживает концепцию, согласно которой другие факторы, такие как системные воспалительные факторы, способствуют прогрессированию NASH.

В то время как большая часть WD-индуцированных изменений в профилях печени и плазмы уменьшалась путем удаления WD-кормления, в частности, профили печеночных жирных кислот не менялись на уровни, наблюдаемые у контрольных мышей. В частности, подавление WD изменяет распределение жирных кислот путем увеличения MUFA и уменьшения ω3 и ω6 PUFA (рис. 2, 4, 5 и 12). В частности, добавка WD увеличивала содержание печеночной кислоты в олеиновой кислоте (18: 1, ω9) и цис-вакгенной кислоте (18: 1, ω7). В то время как 18: 1, ω9 находится в рационе, 18: 1, ω7 не находится в диетах NP, LFLC или WD [15, 16]. Таким образом, 18: 1, ω7 генерируется удлинением 16: 1, ω7; и этот жир образуется посредством SCD1-опосредованной десатурации пальмитиновой кислоты (16: 0). Увеличение печеночной MUFA (16: 1, ω7, 18: 1, ω7, 18: 1, ω9) было связано с соответствующим увеличением экспрессии SCD1 и Elov7 (рис. 12).

Мы также сообщаем, что WD уменьшал содержание печеночной кислоты в линолевой кислоте (18: 2, ω6), α-линоленовой кислоте (18: 3, ω3), арахидоновой кислоте (20: 4, ω6) и докозагексаеновой кислоте (22: 6, ω3 ). Все диеты являются необходимыми (18: 2, ω6 и 18: 3, ω3) жирной кислотой. Снижение C20-22 ω3 и ω6 PUFA было связано с уменьшением экспрессии Elovl5, но без изменения экспрессии Fads1 или Fads2 (рис. 12). Альтернативное объяснение снижения содержания печеночных C20-22 PUFA может быть обусловлено конкуренцией субстрата на уровне Fads2. Недавно сообщалось, что Fads2 десатурации насыщенных жирных кислот, таких как пальмитат [58], и обилие пальмитата в жировой печени [15].

Размещение WD-питающихся мышей на диете LFLC на 8 недель частично восстанавливало содержание ω3 и ω6 PUFA до уровней, наблюдаемых у мышей, которым кормили диеты NP или LFLC на время исследования. Ранее сообщалось, что увеличение диетического C20-22 ω3 PUFA, особенно DHA, в WD-ослабленном WD-индуцированном NASH у мышей Ldlr — / -. DHA был более эффективным, чем EPA, при предотвращении гепатостатиоза, воспаления и фиброза [15]. Диетический DHA повышал уровень печеночных уровней как DHA, так и EPA (посредством ретро-конверсии) и мешал передаче сигналов TGFβ в печени [25]. TGFβ играет важную роль в начале и развитии фиброза [22].

Наконец, наши анализы выявили слабую связь между верхними характеристиками NASH (т. Е. МРНК LoxL2 и агонистами плазмы TLR2) и общим триглицеридом в печени (r2 = 0,063 и r2 = 0,025). Напротив, эти верхние функции NASH продемонстрировали более сильную связь с содержанием жирной кислоты в печени и ω3 (r2 = 0,32 и r2 = 0,35) (рис. 11). Эти находки показывают, что степень NASH может быть более связана с содержанием печеночных специфических жирных кислот, а не с общим количеством триглицеридов в печени.

Долгосрочное ВД кормление использовали для индуцирования NASH у мышей Ldlr — / -. Мы протестировали эффективность двух обезжиренных диет с низким содержанием холестерина, чтобы способствовать ремиссии NASH. В то время как большинство маркеров экспрессии генов, все исследованные параметры плазмы и веса тела возвращались в норму, это вмешательство не позволило отменить как профили печени жирной кислоты, так и связанные с NASH фиброзы. Исходя из этих исследований, удаление WD и переход на диеты с низким содержанием жиров и низким содержанием холестерина (NP или LFLC) недостаточны для обеспечения полного разрешения NASH. Эти исследования также продемонстрировали дифференциальный ответ ремиссии NASH в зависимости от используемой диеты. Диета NP превосходила диету LFLC при разрешении NASH. Это говорит о том, что положительные результаты этих диет не основаны исключительно на удалении жира и холестерина из рациона, но могут также зависеть от уровня простого сахара в пище, то есть сахарозы и фруктозы. Независимо от того, разрешено ли полное разрешение, и в частности, устранение фиброза происходит с продолжением поддержания веса, добавлением упражнений или целенаправленной лекарственной терапией в сочетании с изменениями образа жизни, еще предстоит определить.

Мышей кормили диетами Chow или WD, как описано в материалах и методах. РНК экстрагировали и количественно определяли количество транскриптов мРНК, кодирующих белки, участвующие в воспалении [А], окислительном стрессе [В] и фиброзе и ремоделировании ЭКМ [С]. Результаты представлены в виде изменения мРНК Abundance-Fold. Результаты выражаются как среднее ± SD с 4 животными / группой. a, p≤0,05 по сравнению с группой чау.

(TIFF)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Печеночные липиды экстрагировали, омывали, превращали в метиловые эфиры жирных кислот и количественно определяли газовой хроматографией, как описано в разделе «Материалы и методы». [A]: содержание жирной кислоты в печени, результаты выражены в виде белка нмоль / мг; [B]: сумма жирных кислот в определенных классах; результаты выражены как белок нмоль / мг; [C]: печеночные C20-22 n-3 и n-6 жирные кислоты, результаты выражены в виде белка нмоль / мг. Результаты выражаются как среднее ± SD с 4 животными / группой. a, p≤0,05 по сравнению с группой чау.

(TIFF)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

(DOCX)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

(DOCX)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

(DOCX)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

(DOCX)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

(DOCX)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Кеннета Филбрика за его критический обзор и редакционные предложения в отношении рукописи.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *