Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Нет Корреляция между PNPLA3 rs738409 Генотип и жирная печень и печеночный цирроз у японских пациентов с HCV

No Correlation between PNPLA3 rs738409 Genotype and Fatty Liver and Hepatic Cirrhosis in Japanese Patients with HCV
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3859490/

Конкурирующие интересы: Д-р TK сообщает о получении лекций от Chugai Pharmaceutical, MSD, Tanabe-Mitsubishi, Ajinomoto, Bristol-Myers Squibb и GlaxoSmithKline, а также отчеты проф. OY, получающие грантовую поддержку от Chugai Pharmaceutical, Bayer, MSD, Daiichi-Sankyo, Mitsubishi Tanabe Pharma и Bristol-Myers Squibb. Они не изменяют приверженность авторов ко всем политикам PLOS ONE по обмену данными и материалами.

Задуманные и разработанные эксперименты: MN TK. Выполнены эксперименты: MN TK SN TM. Проанализированы данные: MN TK SN TM XJ SW. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: MN TK SN TM XJ SW OY. Написал бумагу: MN TK.

Инфекция вируса гепатита С (HCV) связана с развитием цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы, а также связана с жировым изменением печени. Вариация в генах, содержащих пататин-подобный домен, содержащий фосфолипазу 3 (PNPLA3), связана с прогрессированием заболевания в безалкогольной жировой болезни печени (NAFLD). Недавние сообщения показали, что PNPA3, IL28B и TLR4-связанные однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) могут оказывать влияние на стеатоз печени или фиброз у пациентов с хронической инфекцией HCV.

У японских пациентов, инфицированных HCV, были идентифицированы четыре SNP (PNPLA3 rs738409, TLR4 rs4986790, TLR4 rs4986791, IL28B rs8099917). Мы исследовали связь между распределением этих SNP-аллелей и жировым изменением печени или наличием цирроза печени, диагностированным с помощью ультрасонографии, одним из широко доступных и простых в использовании методов. PNPLA3 rs738409 G-аллель и IL28B rs 8099917 минорный аллель были обнаружены у 70,0% и 31,1% соответственно. Эти два TLP4 SNP были одинаковыми на японском языке. Жирная смена печени развилась независимо от отсутствия цирроза печени при сонографических исследованиях и более раннем возрасте. Цирроз печени ассоциировался с более высоким показателем отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов (АПРИ), без жирового изменения печени, более высоким уровнем ИМТ и более высоким уровнем АФП. Связь между генотипами PNPLA3 rs738409 / IL28B rs8099917 и печеночным стеатозом или фиброзом печени не наблюдалась.

По данным ультразвуковых исследований, у японцев, инфицированных HCV, не было обнаружено связи между генотипом PNPLA3 rs738409 и жировым изменением печени или цирроза печени. Вместе наши результаты показали, что механизм печеночного стеатоза, связанного с инфекцией HCV, может отличаться от механизма NAFLD и должен быть изучен.

По оценкам, инфекция вируса гепатита С (HCV) поражает примерно 170 миллионов человек во всем мире [1], [2]. Хроническая инфекция гепатита С связана с развитием цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы [3], [4]. Связь стеатоза с хроническим гепатитом С была хорошо описана и показала, что она имеет место в 66% случаев [5], [6]. Стеатоз ускоряет деятельность и прогрессирование хронического гепатита С и независимо связан со стадией III / IV печеночного фиброза [5]. В целом устойчивый вирусологический ответ на лечение у инфицированных HCV пациентов с стеатозом также значительно ниже, чем у пациентов без стеатоза [6].

Изучение механизма стеатоза при хроническом гепатите С ограничено. Сообщалось, что основной белок HCV индуцирует печеночный стеатоз у трансгенных мышей [7]. Нишина и др. [8] наблюдали накопление жира в печени у трансгенных мышей, экспрессирующих полипротеин HCV, и сообщали, что вызванный железом разворачиваемый белковый ответ оказался одним из механизмов, ответственных за печеночный стеатоз при HCV-инфекции. Частицы HCV наблюдались в непосредственной близости от липидных капель, органеллы, используемые для хранения нейтральных липидов, которые динамически движутся через цитоплазму, взаимодействуя с другими органеллами, включая эндоплазматический ретикулум [9]. Эти данные показывают, что некоторые стадии сборки HCV происходят вокруг липидных капель [9], предполагая, что это может быть возможным механизмом для HCV, непосредственно вызывающего печеночный стеатоз.

Пататин-подобный фосфолипазный домен, содержащий 3 (PNPLA3), который кодирует белок из 481 аминокислот, представляет собой липид триацилглицерина, консервированный от картофеля до людей с 10-кратной высшей экспрессией в печени по сравнению с жировой тканью [10]. Вариация гена PNPLA3 способствует этническим и межличностным различиям в содержании жиров в печени и восприимчивости к безалкогольной жировой болезни печени (NAFLD) [11]. Сообщалось, что незначительный аллель rs738409 C / G, несинхронный кодирующий однонуклеотидный полиморфизм (SNP) в гене PNPLA3, кодирующий I148M, был связан с стеатозом, портальным воспалением, донным воспалением, телами Мэллори-Денка, оценкой активности NAFLD ( NAS) и фиброзом [12]. Малый аллель rs738409 C / G также сильно связан с содержанием жиров в печени и с повышенными уровнями сыворотки ALT и AST [11] — [15].

Toll-подобный рецептор 4 (TLR4) является рецептором для бактериального липополисахарида (LPS), который предлагается участвовать в патогенезе гепатобилиарных заболеваний [16] — [18]. Сообщалось, что минорный аллель rs4986791 c.1196C> T, SNNN несинхронного кодирования в гене TLR4, кодирующий T399I, появился как обеспечивающий защиту от прогрессирования фиброза по сравнению с основным, аллельным типом дикого типа (WT), наряду с еще один высококонфигурированный SNP (rs4986790, c.896A> G), расположенный в положении кодона 299 (p.D299G) [19]. Эти SNR4 TLR4 были связаны с притупленным ответом на ЛПС и восприимчивостью к инфекционным заболеваниям и сепсисом [20], [21], и они связаны с защитой от фиброза печени, уменьшают опосредованную TLR4 воспалительную и фиброгенную сигнализацию и снижают апоптотический порог активированных гепатических звездчатых клеток [22]. TLP4 SNP также модулируют риск фиброза печени у кавказцев с хронической инфекцией гепатита С [23].

Было несколько сообщений о том, что SNP, расположенный выше по потоку от гена интерлейкина-28B (IL28B) (rs8099917), был связан с ответом на терапию пегинтерферон-альпа плюс рибавирин у пациентов с хроническим гепатитом С [24], [25]. Хотя данные остаются противоречивыми, в предыдущих исследованиях сообщалось об ассоциации генотипа IL28B (rs12979860) с печеночным стеатозом и фиброзом печени [26], [27].

Таким образом, мы генотипировали четыре SNP (PNPLA3 rs738409, TLR4 rs4986790, TLR4 rs4986791 и IL28B rs8099917) у японских пациентов, инфицированных HCV. Мы также сравнили распределение этих SNP-аллелей с жировым изменением печени на УЗИ (США) этих пациентов. Кроме того, мы исследовали связь между распределением этих SNP-аллелей и наличием цирроза печени, диагностированного у США у этих пациентов. Наши результаты показывают, что распределение этих SNP-аллелей не оказывает существенного влияния на жировое изменение печени или наличие цирроза, выявленного у американских пациентов с хроническим гепатитом C.

В этом исследовании было зарегистрировано 200 пациентов с HCV. Базовые характеристики пациентов показаны в таблице 1. У всех пациентов был средний возраст в возрасте 55,6 лет, а 137 (52,7%) были мужчинами. Средний индекс массы тела (ИМТ) составлял 23,1 кг / м2, причем 45 и 9 из этих пациентов классифицировались как избыточный вес (25,0-29,9 кг / м2) и ожирение (≥30 кг / м2) соответственно. Был включен только один пациент с генотипом 3 HCV. В США выявлено жировое изменение печени и цирроза печени у 127 (47,6%) и 37 (14,2%), соответственно.

± стандартное отклонение. Уровень РНК ВГС, высокий: ≥5 logIU / mL; Уровень РНК ВГС, низкий: <5 logIU / mL; ALT, аланинаминотрансфераза; γ-GTP, гамма-глутамилтранспептидазу; APRI, показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов: AST (IU / L) / 35 / PLT (103 / мкл) × 100; жировая печень и цирроз печени были диагностированы с помощью УЗИ. Данные представлены как среднее

Частота генотипа генотипов PNPLA3 rs738409 и IL28B rs8099917 среди пациентов показана на рисунке 1. Среди 260 пациентов в общей сложности 182 (70,0%) и 81 (31,1%) имели PNPLA3 rs738409 G-аллель и IL28B rs 8099917 G-аллель, соответственно , Все пациенты были генотипом генотипа TLR4 rs4986790 и генотипом CC TLR4 rs4986791. Эти результаты показали, что японские пациенты в настоящем исследовании имели равномерное распределение этих двух SNP4 TLR4.

Клинические характеристики пациентов в настоящем исследовании сравнивались между группами GPL-аллелей PNPLA3 rs738409 и не-G (таблица 2). Существенных различий между этими двумя группами не было, хотя уровни РНК HCV были выше в группе G-аллелей PNPLA3 rs738409, чем в группе аллелей не-G. У США наблюдалось сходное жировое изменение печени в обеих группах, а также аналогичное распределение пациентов с развитым фиброзом в настоящем исследовании (таблица 2).

± стандартное отклонение. * P-значение между двумя группами с и без PNPLA3 rs738409 G аллель по t-критерию Стьюдента или хи-квадрат; Уровень РНК ВГС, высокий: ≥5 logIU / mL; Уровень РНК ВГС, низкий: <5 logIU / mL; ALT, аланинаминотрансфераза; γ-GTP, гамма-глутамилтранспептидазу; APRI, показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов: AST (IU / L) / 35 / PLT (103 / мкл) × 100; жировая печень и цирроз печени были диагностированы с помощью УЗИ. Данные представлены как среднее

Характеристики пациентов с генотипом IL28B rs809917 показаны в таблице 3. Уровни γ-GTP были выше в группе минорных аллелей IL28B rs809917 (TG или GG), чем в основной группе аллелей (TT). Однако в настоящем исследовании не было обнаружено никакой связи между генотипом IL28B rs809917 и жировым изменением печени или наличием цирроза печени на основе данных, полученных в США.

± стандартное отклонение. * P-значение между двумя группами с IL28B rs8099917 TT и с TG / GG по t-критерию Стьюдента или хи-квадратному тесту; Уровень РНК ВГС, высокий: ≥5 logIU / mL; Уровень РНК ВГС, низкий: <5 logIU / mL; ALT, аланинаминотрансфераза; γ-GTP, гамма-глутамилтранспептидазу; APRI, показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов: AST (IU / L) / 35 / PLT (103 / мкл) × 100; жировая печень и цирроз печени были диагностированы с помощью УЗИ. Данные представлены как среднее

Характеристики пациента с жировым изменением печени и без жирового изменения печени на основании результатов поиска в США приведены в таблице 4. При однофакторном анализе более молодой возраст (P <0,01), более высокий ИМТ (P <0,01) и более низкая доля пациентов с циррозом ( P <0,01) наблюдались у пациентов с жировым изменением печени. Факторы, значительно связанные с жировым изменением печени при однофакторном анализе, снова анализировались многовариантным логистическим регрессионным анализом (таблица 5). Жировое изменение печени было достигнуто независимо от отсутствия цирроза печени в США и возрасте ≤58 лет.

± стандартное отклонение. * P-значение, между двумя группами с жирной печенью и без нее с помощью t-теста Стьюдента или хи-квадратного теста; Уровень РНК ВГС, высокий: ≥5 logIU / mL; Уровень РНК ВГС, низкий: <5 logIU / mL; ALT, аланинаминотрансфераза; γ-GTP, гамма-глутамилтранспептидазу; APRI, показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов: AST (IU / L) / 35 / PLT (103 / мкл) × 100; жировая печень и цирроз печени были диагностированы с помощью УЗИ. Данные представлены как среднее

Печеночный цирроз был диагностирован с помощью ультрасонографии.

Характеристики пациента с циррозом печени и без него по данным США показаны в таблице 6. При однофакторном анализе более высокий ИМТ (P = 0,016), более высокий γ-GTP (P <0,01), меньшее количество тромбоцитов (P = 0,046), ниже общий холестерин (P = 0,013), более высокий AFP (P <0,01), более высокий показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов (APRI) (P <0,01) и более низкая доля жирового изменения печени (P <0,01) наблюдались у пациентов с циррозом печени. При многомерном логистическом регрессионном анализе цирроз печени был достигнут независимо от более высокого АПИ, никакого жирового изменения печени у американских пациентов, более высокого уровня ИМТ и более высокого уровня АФП (таблица 7).

± стандартное отклонение. * P-значение между двумя группами с циррозом печени и без него по t-критерию Стьюдента или хи-квадратному тесту; Уровень РНК ВГС, высокий: ≥5 logIU / mL; Уровень РНК ВГС, низкий: <5 logIU / mL; ALT, аланинаминотрансфераза; γ-GTP, гамма-глутамилтранспептидазу; APRI, показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов: AST (IU / L) / 35 / PLT (103 / мкл) × 100; жировая печень и цирроз печени были диагностированы с помощью УЗИ. Данные представлены как среднее

3 / мкл) × 100; жировая печень была диагностирована с помощью ультрасонографии. APRI, показатель отношения аспартатаминотрансферазы / тромбоцитов: AST (IU / L) / 35 / PLT (10

В настоящем исследовании мы использовали абдоминальные США для оценки жирового изменения печени и наличия цирроза печени у японских пациентов с хроническим гепатитом С. Несмотря на то, что наша популяция исследования относительно невелика, генотипы PNPLA3 rs738409 и IL28B rs8099917, по-видимому, не связаны с жирной печени или наличия цирроза печени, хотя генотипы TLR4 rs4986790 и rs4986791 были одинаковыми у пациентов настоящего исследования.

Печеночный стеатоз часто наблюдается у пациентов с хроническим гепатитом С (42-73%) [28] и под влиянием нескольких факторов, таких как потребление алкоголя, возраст, ИМТ, ожирение, гипергликемия, сахарный диабет и генотип 3 HCV [29]. Печеночный стеатоз у пациентов с хроническим гепатитом С связан с более серьезным повреждением печени, более развитым фиброзом печени [30] и плохим ответом на лечение пегинтерфероном-альфа плюс рибавирин [31], [32]. Несмотря на то, что большинство наших пациентов, являющихся генотипом ВГС 1 или 2, жировое изменение печени ассоциировалось с более молодым возрастом и отсутствием цирроза печени (таблица 5).

Сообщалось, что PNPLA3 rs738409 ассоциировался с печеночным стеатозом и стеатогепатитом в NAFLD [11], [33]. Было показано, что генотип GG связан с большим риском воспаления и цирроза. Японские исследования [34] — [36] также показали аналогичные результаты. Kitamoto et al. [36] продемонстрировал, что NAFLD типа Matteoni4 является генетически и клинически отличным подмножеством от других спектров заболевания и что ген PNPLA3 сильно связан с прогрессированием безалкогольного стеатогепатита (NASH) на японском языке, ИМТ которого ниже, чем у США и европейских стран [37] — [39].

У пациентов с хроническим гепатитом С несколько исследований показали, что генотип PNPLA3 влияет на печеночный стеатоз и фиброз печени [40], [41]. Однако наши результаты не показали никакой связи между PNPLA3 rs738409 и стеатозом печени или фиброзом печени. Возможно, что различные методы оценки, такие как биопсия США и печени, а также различная этническая принадлежность или различное распределение генотипов PNPLA3 rs738409 могут иметь различную связь с печеночным стеатозом и фиброзом печени у японских пациентов с хроническим гепатитом C. Мы также не могли полностью править что существуют различные механизмы печеночного стеатоза и фиброза печени между НАФЛ и гепатитом С [7] — [9]. Дальнейшие исследования понадобятся по этому вопросу.

В отличие от предыдущих исследований [26], [27], IL28B rs8099917 также не влиял на печеночный стеатоз и фиброз печени в настоящем японском исследовании. США — широко доступный и простой в использовании диагностический метод визуализации, подходящий для качественной оценки диффузного заболевания печени в клинической повседневной практике [42]. Клинически стеатоз или жирная печень появляются как более яркое изображение относительно соседней почки или селезенки и проявляют большее ослабление в тяжелых случаях, часто затеняя стенки печени и портальной вены [42]. Разница в результатах между предыдущими исследованиями и нашими может быть отнесена к методам, используемым для диагностики жировой печени и цирроза печени [43]. Хотя биопсия печени остается стандартным методом диагностики диффузного заболевания печени, это, безусловно, инвазивная техника по сравнению с США. В ближайшем будущем переходная эластография будет полезна для оценки фиброза печени у пациентов с хроническим гепатитом С с печеночным стеатозом. Однако в настоящее время его следует интерпретировать осторожно у пациентов с НАФЛ, где факторы, связанные с хозяином или заболеванием, могут изменять свою точность [44].

Гепатоцеллюлярная карцинома является документированным осложнением в неизвестном проценте случаев цирроза NASH [45]. Yoshioka et al. [46] сообщают, что у неспущенной печени наблюдалось выгорание NASH; стеатоз, некровоспаление, дегенерация баллона и тела Мэллори исчезли при вскрытии случая HCC с циррозом NASH. Интересно, что наше настоящее исследование также продемонстрировало связь между жировым изменением печени и отсутствием развитого фиброза у японских пациентов с хроническим гепатитом С.

В заключение, настоящее исследование продемонстрировало отсутствие связи между генотипом генотипа PNPLA3 rs738409 генотипа / IL28B rs8099917 и стеатозом печени или фиброзом печени у японских пациентов, инфицированных HCV, хотя результаты нашего исследования были основаны на результатах США. Мы обнаружили, что жировое изменение печени связано с возрастом пациента и фиброзом печени. Кроме того, цирроз печени также ассоциировался с более высоким АПРИ, отсутствием жирового изменения печени, более высоким уровнем ИМТ и более высоким уровнем АФР. Возможно, потребуется более высокая точность неинвазивных методов диагностики пациентов, чтобы обеспечить дальнейший анализ. Вместе наши результаты показывают, что механизм, который существует при печеночном стеатозе инфекции HCV, может отличаться от механизма NAFLD, и для дальнейшего изучения этих механизмов потребуется дополнительное исследование.

В общей сложности 260 пациентов с хроническим гепатитом С были последовательно завербованы для настоящего исследования в клинической больнице Университета Чиба, Чиба, Япония, в период с февраля 2010 года по январь 2013 года. Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике Школы медицины Университета Чиба (номера разрешений 244, 374 и 1462) и соответствовали этическим принципам Хельсинкской декларации. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов.

Генотип HCV определяли с использованием теста на серотипирование на основе антител на основе антител, описанного Tsukiyama-Kohara et al. [47]. В Японии более 98% генотипа HCV 1 относится к субгенотипу HCV 1b [48], [49], согласно классификации Симмонда [50].

Уровень РНК HCV определяли с использованием анализатора Amplicor HCV, версии 2.0 (Roche Diagnostics, Tokyo, Japan), или теста COBAS TaqMan HCV (Roche). Мы определили РНК HCV ≥5 log IU / mL и <5 log IU / mL в качестве высоких и низких вирусных титров соответственно.

Чтобы подготовить образцы ДНК из клеток крови, мы использовали ДНК Extract All Lysis Reagents (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA, USA). Конкретный анализ генотипирования TaqMan проводили для PNPLA3 rs738409, IL28B rs8099917, TLR4 rs4986790 или TLR4 rs4989791. Все датчики TaqMan были приобретены у Applied Biosystems. ПЦР выполняли с помощью TaqMan GTXpress Master Mix (Applied Biosystems) в соответствии с протоколом производителя. Условия ПЦР были следующими: 95 ° С в течение 20 секунд, затем 40 циклов при 95 ° С в течение 3 секунд и 60 ° С в течение 20 секунд. Флуоресцентные сигналы оценивали с использованием ПЦР ABI Step One в реальном времени (Applied Biosystems) [51], [52].

В настоящем исследовании, PNPLA3 rs738409 GG / CG или CC аллель анализировали как G аллель или не-G аллель соответственно, и IL28B rs8099917 TT или TG / GG также анализировали как основной аллель или минор аллелей соответственно.

APRI: AST (IU / L) / 35 / PLT (103 / мкл) × 100 оценивали как показатель фиброза печени [53].

Мы проводили трансабдоминальные УЗИ для оценки жировой печени и цирроза, по крайней мере, дважды, когда исключали гепатоцеллюлярную карциному [42], [43]. Для пациентов с гепатитом С абдоминальные американцы регулярно проводили каждые 4-6 месяцев в Японии. Жирная печень была диагностирована при наблюдении хотя бы одного из следующих факторов: (1) диффузное усиление эхоидных уровней в печени, (2) контраст по печени, почечная недостаточность, (3) постепенное затухание эхоидных уровней в печени, (4) нечеткое отображение печеночных сосудов. Цирроз был диагностирован, когда были соблюдены все следующие критерии: (1) круглые тупые границы печени, (2) неровности поверхности, (3) грубый эхоидный вид в паренхиме печени, с или с спленомегалиями или коллатеральными сосудами.

Данные выражаются как среднее ± стандартное отклонение (SD). Различия оценивали по t-критерию Стьюдента или хи-квадратному тесту. P <0,05 считалось статистически значимым.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *