Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Гаплоинтенсивность глюкокортикоидного рецептора вызывает гипертонию и ослабляет гипоталамо-гипофизарно-надпочечную ось и адаптацию артериального давления к диете с высоким содержанием жиров

Glucocorticoid receptor haploinsufficiency causes hypertension and attenuates hypothalamic-pituitary-adrenal axis and blood pressure adaptions to high-fat diet
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2749453/

Корреспонденция: отдел эндокринологии, Центр сердечно-сосудистых наук, Медицинский научно-исследовательский институт королевы, 47 Little France Crescent, Эдинбург, EH16 4TJ, Великобритания. E-mail: karen.chapman@ed.ac.uk

Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/us/), которая разрешает неограниченное некоммерческое использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что оригинальная работа была должным образом указана.

Глюкокортикоидные гормоны имеют решающее значение для реагирования и адаптации к стрессу. Генетические вариации гена глюкокортикоидного рецептора (GR) изменяют активность оси гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (HPA) и ассоциируют с гипертензией и восприимчивостью к метаболическим заболеваниям. Здесь мы проверяем гипотезу о том, что уменьшенная плотность GR изменяет кровяное давление, глюкозу и липидный гомеостаз и ограничивает адаптацию к обезогенной диете. Гетерозиготные мыши GRβgeo / + генерировались из клеток эмбриональных стволовых клеток (ES) с интеграцией генов-ловушек кассеты β-galactosidase-неомицинфосфотрансферазы (βgeo) в ген GR, создавая транскрипционно неактивный слитый белок GR. Хотя мыши GRβgeo / + имеют на 50% менее функциональный ГР, у них нормальный гомеостаз липидов и глюкозы из-за активации компенсационной оси HPA, но они гипертоничны из-за активации ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (RAAS). При вызове с высоким содержанием жиров диета, увеличение веса, ожирение и непереносимость глюкозы были одинаково увеличены в контроле и мышей GRβgeo / +, что свидетельствует о сохранении контроля за промежуточным метаболизмом и энергетическим балансом. Однако, в то время как диета с высоким содержанием жиров вызывала активацию HPA и повышенное кровяное давление у контрольных мышей, эти адаптации были ослаблены или отменены у мышей GRβgeo / +. Таким образом, уменьшенная плотность GR, сбалансированная активацией HPA, оставляет функции глюкокортикоидов незатронутыми, но функции минералокортикоидов увеличиваются, вызывая гипертонию. Важно отметить, что снижение GR ограничивает адаптацию HPA и артериального давления к обезогенной диете. — Michailidou, Z., Carter, RN, Marshall, E., Sutherland, HG, Brownstein, DG, Owen, E., Cockett, K., Kelly, V ., Ramage, L., Al-Dujaili, EAS, Ross, M., Maraki, I., Newton, K., Holmes, MC, Seckl, JR, Morton, NM, Kenyon, CJ, Chapman, KE Гаплоустойчивость глюкокортикоидного рецептора вызывает гипертонию и ослабляет гипоталамо-гипофизарно-надпочечную ось и адаптацию артериального давления к диете с высоким содержанием жиров.

Глюкокортикоиды координируют регуляцию путей генов в ответ на внешние (стресс) и внутренние (циркадные) сигналы и составляют часть важных механизмов гомеостатического контроля, критичных в адаптации к стрессовым факторам окружающей среды. Они необходимы для целостности функции центральной нервной системы, для ответа на инфекцию и травмы, а также для сердечно-сосудистого и метаболического гомеостаза. Они регулируют кровяное давление (1), потребление энергии и расходы, а также гомеостаз глюкозы и липидов (2). В избытке глюкокортикоиды вызывают гипертонию, висцеральное ожирение, резистентность к инсулину / диабет и неупорядоченное настроение и познание (синдром Кушинга), тогда как дефицит глюкокортикоидов вызывает гипотонию, усталость, потерю веса и анорексию.

Большинство действий глюкокортикоидов опосредуются через широко распространенный глюкокортикоидный рецептор (GR, ref. 345), который относится к надсемейству факторов транскрипции ядерных рецепторов (6). Исследования in vitro (7, 8) и in vivo (9, 10) показали важность плотности рецепторов при определении клеточной глюкокортикоидной чувствительности. Полная потеря ГР несовместима с постнатальной выживаемостью (11, 12), но частичная потеря функции ГР у людей вызывает редкий синдром резистентности к семейным / спорадическим глюкокортикоидам (13), характеризующийся гиперкортизолизмом без других особенностей синдрома Кушинга. Полиморфизмы в гене Nr3c1 человека (кодирующие GR, здесь сокращенно GR) связаны с гипер- или гипочувствительностью к экзогенному глюкокортикоиду (дексаметазону), подавлению оси гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (HPA) и диапазоном метаболических и сердечно-сосудистых параметров. Таким образом, полиморфизмы, связанные с гиперчувствительностью глюкокортикоидов (BclI, N363S), как правило (в зависимости от возраста, пола и этнического происхождения) связаны с гипертонией, ожирением, уменьшенной скудной массой, резистентностью к инсулину и повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний, несмотря на снижение уровня кортизола в плазме, тогда как полиморфизм ER22 / 23EK, связанный с глюкокортикоидной гипочувствительностью, связан с полезными результатами метаболизма (обзор в 14).

Несколько линий мыши с измененной экспрессией или функцией GR были созданы для исследования роли GR в регуляции оси HPA и ее роли в регуляции настроения и в иммунной системе (см. Ссылки 151617). Меньше исследований исследовали влияние измененной плотности GR на сердечно-сосудистые и метаболические исходы. Уменьшенная плотность GR через антисмысловую экспрессию трансгена GR (центральная нервная система, хотя и широко выраженная) снижала потребление энергии, но также вызывала ожирение (18, 19). Тем не менее, специфическая для нейронов делеция ГР вызвала мелкосуточный фенотипический рост и увеличение затрат энергии из-за периферических эффектов высоких уровней глюкокортикоидов в сочетании с нормальными уровнями периферической ГР (20). Специфическая для печени регенерация гена GR приводила к гипогликемии, но только после длительного голодания и улучшенной гипергликемии при индуцированном стрептозотоцином диабете (21). Недавно трансгенные мыши были описаны с гиперэкспрессией GR, специфичной для кардиомиоцитов. Эти мыши обнаруживают дефекты проводимости, уменьшают частоту сердечных сокращений, атриовентрикулярный блок, измененный гомеостаз кальция и ремоделирование ионных каналов в изолированных кардиомиоцитах (22). Хотя эти исследования предоставили важную информацию о тканеспецифических функциях ГР, сердечно-сосудистые и метаболические последствия измененной ГР плотности и, следовательно, глюкокортикоидной чувствительности не были описаны, хотя это клинически значимая ситуация.

Здесь мы создали новую линию мышей с пониженной плотностью GR, гетерозиготную для нулевой мутации гена GR (GRβgeo / +), чтобы исследовать, влияет ли глобальное снижение плотности GR на сердечно-сосудистое (артериальное давление), распределение жира и метаболизм ( глюкозы и липидного гомеостаза). Была введена диета с высоким содержанием жиров (HF) для определения того, изменила ли GR гаплоинтенсивность адаптивные гормональные и метаболические изменения, которые сопровождают диетическое ожирение.

Линия мышиных ES-клеток (ESKN92), генерируемая мутагенезом генов-ловушек, в которой ранее была описана кассета-репортер-β-галактозидаза-неомицинфосфотрансфераза (βgeo), интегрированная в ген GR, генерирующая трансляционное слияние между GR и βgeo (23) , 5′-Быстрая амплификация концов кДНК (RACE) подтвердила интеграцию репортерной кассеты β-галактозидаза-неомицин фосфотрансферазы (βgeo) между экзонами 3 и 4 гена GR. Флуоресценция in situ гибридизации (FISH) подтвердила единый сайт интеграции на хромосоме 18 в локусе GR. Химерные мыши получали путем инъекции клеток ESKN92 в бластоцисты C57BL / 6J. Химеры были сопряжены с мышами C57BL / 6J для достижения передачи зародышевой линии и последующего обратного скрещивания для создания конгенической линии (полное имя, Nr3c1gtESK92MRCHGU, здесь сокращенно GRβgeo). Гетерозиготы идентифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) для присутствия lacZ (в βgeo-кассете) с использованием следующих праймеров: вперед, 5′-GTTGCGCAGCCTGAATGGCG-3 ‘; и наоборот, 5’-GCCGTCACTCCAACGCAGCA-3 ‘. Все описанные эксперименты были выполнены для взрослых мужчин (5-6 месяцев) GRβgeo / + и GR + / + однопометников, скроенных в течение пяти поколений (F5) до C57BL / 6J. Экспериментальные группы составляли от 8 до 9 на группу, если не указано иное. Для генерации гомозиготных мышей GRβgeo / βgeo мышей F7 GRβgeo / + пересекали.

Все эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с принятыми стандартами гуманного ухода за животными под эгидой Закона о животных (научные процедуры) UK 1986 после предварительного одобрения местным этическим комитетом. Мышей размещали в стандартных клетках под контролируемым освещением (12: 12-часовой светло-темный цикл, включали в 7 часов утра) и получали стандартную чау из отлучения, если не указано иное. Для измерения безударной плазмы кортикостерона АКТГ и глюкозы в образцах хвостовой никовой крови животные были акклиматизированы в одном корпусе, а хвостовые ники были выполнены в течение 1 мин от нарушения клетки. Для экспериментов на ожирение, вызванных диетой, мышей отнимали от груди или на диете с низким содержанием углеводов (58% ккал в виде жира, D12331, Research Diets, New Brunswick, NJ, USA) или с низким содержанием жиров (LF) / с высоким содержанием углеводов (11 % ккал как жир, D12328, исследовательские диеты) и остался на диете в течение 22 недель с доступом к воде и диете. Вес тела и потребление пищи контролировались еженедельно и в течение 3 недель соответственно.

Экспериментальные мыши были убиты обезглавливанием между 8 и 10 часами утра. Образцы ствола крови собирали в пробирки с ЭДТА (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) и центрифугировали (6000 г, 10 мин), а плазму хранили при -80 ° C перед анализом. Ткани быстро замораживали в сухом льду для анализа РНК или Вестерн-блоттинга или фиксировали в формалине (левый надпочечник, почка) для гистологии. Величины уровня кортикостерона в плазме крови определяли по образцу крови (по хвосту) в 7 часов вечера. Плазменный кортикостерон измеряли внутренним радиоиммуноанализом, как описано ранее (24). Уровни плазмы АКТГ измеряли с помощью ELISA (Biomerica, Newport Beach, CA, USA). Для теста на толерантность к глюкозе (GTT) животные были лишены пищи в течение 6 часов, 2 мг / г массы тела 25% глюкозы инъецировали внутрибрюшинно, а отбор проб нищей нитки хвоста проводили в момент времени 0 (до инъекции) и 15, 30 , 60 и 120 минут после инъекции. Плазменную глюкозу измеряли с использованием системы мониторинга глюкозы (One Touch Ultra, Lifescan, Johnson & Johnson, Langhorne, PA, USA), инсулина с помощью ELISA (Crystalchem, Downers Grove, IL, США), неэтерифицированных жирных кислот (NEFA) с NEFA C (Wako Chemicals GmbH, Nuess, Германия) и триглицериды с комплектом триглицеридов L-типа (Wako Chemicals GmbH). Инсулин, NEFA и триглицериды измеряли через 24 часа с лишением пищи. Пероральные триглицериды экстрагировали после гомогенизации 100 мг печени в изопропаноле (10 об.), А затем инкубацию при 37 ° С в течение 45 мин. После центрифугирования (3000 г, 10 мин) 10 мкл супернатанта инкубировали при 37 ° С в течение 5 мин с 1 мл триглицеридного реагента Thermotrace (Alpha Laboratories, Eastleigh, UK) и измеряли поглощение при 500 нм. Активность плазмы ренина и концентрацию ангиотензиногена измеряли радиоиммуноанализом, как описано ранее (25). Концентрацию плазменного альдостерона измеряли с помощью внутреннего ИФА, как описано ранее (26, 27). Образованные формалином ткани обрабатывали для гистопатологии, секционировали (4 мкм) и окрашивали гематоксилином и эозином для гистопатологического исследования.

Систолическое артериальное давление измерялось в течение 2 отдельных дней у сознательных мышей плетизмографией манжеты хвоста (Harvard Apparatus, Edenbridge, UK), как описано ранее (28). Перед записью измерений все мыши прошли три периода обучения, чтобы акклиматизировать их до процедуры. Мышей выдерживали при 37 ° С в течение 10 мин до начала измерений. Среднее систолическое артериальное давление рассчитывали по среднему значению 12 измерений на мышь.

Общая РНК экстрагировалась из замороженных тканей, как описано ранее (25). Один микрограмм РНК предварительно обрабатывали ДНКазой (Invitrogen, Paisley, UK), а затем обратно транскрибировали в кДНК с использованием олиго (dT) праймера и комплекта синтеза первой кДНК Superscript III (Invitrogen). ПЦР в реальном времени проводили на кДНК с использованием LightCycler 480 (Roche Diagnostics, Burgess Hill, UK) с коммерческой мастер-смесью (FAM-гидролизный зонд, диагностика Roche) и следующими наборами праймеров / зондов (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA): β-актин, Mm00607939_s1; GR, Mm01260497_m1 (амплифон, охватывающий экзоны 5-6) и Mm00433832_m1 (амплифон, охватывающий экзоны 2-3); 11β-HSD1, Mm00476182_m1; ангиотензиноген, Mm00599662; 11β-HSD2, Mm00492541_g1; и минералокортикоидный рецептор (МР), Mm01241597_m1. Рениновые праймеры были внутренними праймерами следующим образом: вперед, 5′-GGTGCCCTCCACCAAGTG-3 ‘; обратный 5’-TCAGAGGACTCATAGAGGCTGTGA-3 ‘; и зонд, 5’-AGCCGCCTCTACCTTGCTTGTGGG-3 ‘. Были включены отрицательные контрольные показатели, исключающие Superscript III или РНК. Температура отжига составляла 60 ° C. Данные анализировали с использованием метода второй производной. Для каждого образца определяли отношение уровней транскрипта, представляющего интерес, к уровням β-актиновой мРНК.

Уровни мРНК головного мозга и гипофиза определяли гистохимией in situ мРНК-гибридизации, как описано ранее (29). Короче говоря, участки коронального мозга (10 мкм) гибридизуются в течение ночи при 55 ° С до 35S-меченых зондов GRR, комплементарных экзонам 5-9 GR (29, отсутствующим из ESKN92-кодированной GR-βgeo мРНК). Затем срезы обрабатывали РНКазой при 37 ° С в течение 1 ч и промывали при 60-70 ° С. Гибридизованные секции подвергали воздействию авторадиографической пленки в течение 7 дней. Для денситометрии авторадиограммы были отображены на лайтбокс, снабженный камерой фотосъемки coolsnap, и анализировали с использованием программного обеспечения MCID (InterFocus Imaging, Cambridge, UK).

Пятьдесят миллиграммов эпидидимальной жировой ткани гомогенизировали в 600 мкл буфера для экстракции белка (Invitrogen). Белки (25 мкг гомогената) разрешались на 4-12% сборных гелях Bris-Tris Novex (Invitrogen), переносили на нитроцеллюлозную мембрану и затем инкубировали с GR-специфическим антителом (M-20, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Иммунореактивные полосы были визуализированы хемилюминесценцией (ECL kit, Amersham Biosciences, Little Chalfont, UK). Для проверки равной загрузки белка между образцами использовали моноклональное антитело против β-тубулина (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) или окрашивание мембраной красным Ponceau.

Окрашивание X-gal (5-бром-4-хлор-3-индолил-β-d-галактопиранозид) для определения активности β-галактозидазы проводилось на замороженных срезах коронального мозга (10 мкм). Секции переносили непосредственно с -80 ° C в фиксирующие (4% параформальдегида, 0,02% нонидетов P-40, 0,01% дезоксихолата натрия, 5 мМ ЭГТА и 2 мМ MgCl2) в течение 15 мин при 4 ° С; дважды промывали в PBS, содержащем 2 мМ MgCl2, 0,02% Nonidet P-40 и 0,01% дезоксихолата натрия; и окрашивали в течение 6 ч в PBS, содержащем 2 мМ MgCl2, 0,02% Nonidet P-40, 0,01% дезоксихолата натрия, 5 мМ феррицианида калия, 5 мМ ферроцианида калия и 1 мг / мл X-gal.

Клетки эмбриональной почки человека (HEK293) поддерживали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM), дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина при 37 ° С, 5% СО2. Для трансфекции 2,5 × 105 клеток высевали на лунку в 6-луночных планшетах, покрытых поли-d-лизином в DMEM, дополненном 10% сырой сывороткой теленка, покрытой углем, и трансфектировали на следующий день с использованием Lipofectamine 2000 (Invitrogen) с 500 нг репортером плазмиду, 200 нг плазмиду экспрессии и / или пустой вектор, pcDNA3.1 (-) (Invitrogen) и 50 нг pRL-CMV (Promega, Саутгемптон, Великобритания), кодирующую люциферазу renilla, используемую в качестве внутреннего контроля. Дексаметазон (1 мкМ) добавляли через 1 ч после трансфекции, и клетки собирали через 48 часов для анализа люциферазы. Репортерными плазмидами были MMTV-LTR-люцифераза (30) или rPNMT-998 / -466 Luc (31). Экспрессирующие плазмиды кодировали мышь GR (GR) типа дикого типа (WT) или GR-βgeo. WT GR субклонировали из pSV2wrec (32). Полиморфизм в домене связывания ДНК pSV2wrec-кодированного GR (кодирующий Val437) (33) был заменен на Gly437, чтобы быть идентичным GRNA с кодированием штамма C57BL / 6J и 129 с помощью сайт-направленного мутагенеза. КДНК GR-βgeo собирали из кДНК WT GR, продукта 5′-RACE и вектора pGT3 в ловушке гена (23) путем субклонирования соответствующих фрагментов ДНК. Все конструкции были подтверждены секвенированием ДНК.

Эффекты генотипа и диеты оценивались с помощью двухстороннего ANOVA, за которым последовали тесты Tukey для групповых различий. Значение было установлено при P <0,05. Для оценки существенных различий уровней GR мРНК между мышами GR + / + и GRβgeo / + использовали t-критерий Стьюдента. Для сравнений GTT площадь под кривой была рассчитана для каждого животного, а затем по сравнению с 2-сторонним ANOVA. Для анализа трансфекции данные анализировали с помощью ANOVA, а затем послеоперационные тесты. Значения - это значения ± se.

Мутантные мыши GRβgeo / + были получены из линии ES-клеток (ESKN92), в которой кассета-репортер βgeo интегрировалась в ген GR, генерируя транскрипционный и трансляционный синтез (23). 5′-RACE, проведенный на ESKN92 РНК и ПЦР-анализ геномной ДНК продемонстрировал сайт интеграции между экзонами 3 и 4 (данные не показаны). Полученный слитый белок не имеет части ДНК-связывающего домена и всего связывающего лиганда домена (фиг.1А).

Способность слитого белка GR-βgeo активировать транскрипцию тестировали в трансфецированных клетках HEK293, у которых отсутствует функциональная эндогенная ГР. В отличие от WT GR слитый белок GR-βgeo не оказывал влияния на активность промотора ни в присутствии, ни в отсутствии дексаметазона (фиг.1B, C), демонстрируя, что он транскрипционно неактивен и что часть, кодирующая экзон 2-3, GR, присутствующий в слитом белке, не имеет конститутивной активности. Важно отметить, что котрансфекция GR-βgeo с помощью WT GR не влияла на трансактивацию WT GR с использованием дексаметазона либо MMTV-LTR (фиг.1B), либо промотор PNMT (фиг.1C), демонстрируя, что слитый белок не оказывает доминирующего -негативная активность. Таким образом, хотя слитый белок экспрессируется у мышей GRβgeo / + (например, на фиг.2), эти свойства предсказывают, что аллель GR-βgeo является нулевым аллелем.

Предыдущие данные показали, что гомозиготность для нулевого аллеля GR летальна (34), тогда как ~ 10-15% мышей, гомозиготных для аллергической аллели, выживают (11). Для проверки летальности аллеля GR-βgeo гетерозиготные мыши GRβgeo / + были взаимно пересечены. Из 145 потомков ни один из них не был гомозиготным по аллелю GR-βgeo, предполагая, что гомозиготные мыши умирают до взрослой жизни, что соответствует предыдущим данным, свидетельствующим о летальности нулевой аллели вокруг рождения (11, 34). Напротив, исследование эмбрионов из гетерозиготных межпересечений показало наличие гомозиготных эмбрионов GRβgeo / βgeo на ожидаемой частоте (26,6%).

Окрашивание X-gal разделов мозга у мышей GRβgeo / + показало экспрессию GR-βgeo во всем мозге, что отражает нормальную экспрессию мРНК GR (фиг.2A, B). Кроме того, количественные ПЦР (qPCR) измерения уровней мРНК GR у мышей GR + / + и GRβgeo / + с использованием праймеров, которые охватывают экзоны 2-3 (присутствующие как в нормальных GR, так и в GR-βgeo-аллелях), не различались между генотипами (данные не показаны ). Однако гистохимия in situ мРНК-гибридизации мРНК GR с использованием зонда, комплементарного экзонам 5-9 GR (отсутствовала в мРНК, кодирующей GR-βgeo, фиг.1A), показала снижение вдвое на уровнях GR мРНК полной длины в головном мозге ( гиппокамп и паравентрикулярное ядро ​​гипоталамуса) и гипофиз мышей GRβgeo / + по сравнению с одноразовыми группами GR + / + (рис. 2B-D, таблица 1). Аналогично, qPCR для обнаружения экзонов 5-6 показал, что мыши GRβgeo / + имели ~ 50% уменьшенные уровни GR мРНК полной длины в жировой ткани, мышцах, печени и надпочечнике (таблица 1). Интересно, что уменьшение, измеренное в надпочечниковой железе, было значительно больше, чем в жировой ткани и печени (P <0,05, повторный односторонний ANOVA), возможно, отражающий эффекты развития. Анализ вестерн-блоттинга показал сходное снижение белка GR 95GDa у мышей GRβgeo / + (фиг.3). Иммунореактивный белок в 191 кДа, соответствующий предсказанной массе слитого белка GR-βgeo, был обнаружен в GRβgeo / +, но не в тканях мышей GR + / + (фиг.3).

HF диеты стимулируют ось HPA (35) и вызывают гипертонию (36, 37). Хорошо известно, что манипуляции с GR влияют на ось HPA (15). Чтобы установить, что активность оси HPA увеличивается у мышей GRβgeo / +, и для определения того, изменяют ли пониженные уровни ГР метаболическую адаптацию к ВЧ-диете, мышей GRβgeo / + отнимали от груди на определенную диету HF или LF и поддерживали на диетах в течение 22 недель , Хотя на LF-диете мышей GRβgeo / + повышали уровни кортикостерона в плазме (базальные и пиковые) по сравнению с мышами GR + / + (рис.4), что согласуется с прогнозируемым увеличением активности базальной HPA-оси при дефиците ГР (15), они сопротивлялись индуцированное HF увеличение базального (утреннего) уровня кортикостерона в плазме (рис.4). Таким образом, хотя HF-диета увеличивала уровни базального кортикостерона у мышей GR + / + в 2 раза, она не оказывала существенного влияния на уровни базального кортикостерона у мышей GRβgeo / +, в результате чего не было различий между мышами двух генотипов, которые кормили диету HF (Фиг.4). Пиковые уровни циркулирующих кортикостеронов оставались выше у мышей GRβgeo / + по сравнению с их однопометниками GR + / + и не подвергались воздействию диеты (фиг.4B). Не было существенной разницы между генотипами в базальных (утренних) уровнях АКТГ плазмы ни в LF-питании (данные не показаны), ни у HF-мышей (GR + / + против GRβgeo / +: 38 ± 8 и 19 ± 7 пг / мл , соответственно), что согласуется с аналогичными базальными уровнями кортикостерона в плазме во втором. Точно так же не было значительных эффектов ни генотипа, ни диеты на уровни мРНК гипофиза POMC, хотя была тенденция к тому, чтобы диета HF увеличивала уровни мРНК POMC только у мышей GR + / + (LF- против HF-сыворотки GR + / + мышей: 0,7 ± 0,1 и 1,3 ± 0,3, n = 2 и 5 соответственно, P = 0,3, LF- против HF-питаемых мышей GRβgeo / +: 0,9 ± 0,2 и 0,9 ± 0,2 соответственно, n = 5 / группа) , Поразительно, и, подобно базальным уровням кортикостерона в плазме, вес надпочечников был значительно выше у мышей линии GRβgeo / +, получавших LF, по сравнению с их одноразовыми группами GR + / +, но в отличие от мышей GR + / +, в которых вес надпочечников был увеличен с помощью HF диета, диета HF не влияла на вес надпочечников у мышей GRβgeo / + (фиг.4C). Морфология надпочечников также различалась между генотипами, и это было особенно заметно на диете LF (рис.5). Морфология предполагает стимуляцию клеток, продуцирующих кортикостерон- и альдостерон мышей GRβgeo / + в zona fasciculata и glomerulosa, соответственно. В надпочечниках от мышей GRβgeo / + столбцы эндокринных клеток в zona fasciculata длиннее, чем у мышей GR + / +, причем отдельные клетки имеют гомогенную эозинофильную цитоплазму (фиг.5A-D). Зона-гломерулоза Грβгео / + надпочечников проявляется более гуще, чем у мышей с GR + / +, с большим количеством гломерулов и с гипертрофированным эпителием (рис.5C, D). Этот фенотип надпочечников также проявлялся у мышей, которым вводили HF-диету (рис.5Е, F), но морфологические различия между группами LF и HF были более выраженными у мышей GR + / +, чем у мышей GRβgeo / + (рис.5). Измерения размера надпочечников в разных зонах (glomerulosa, fascilulata и reticularis) не различались между генотипами (данные не показаны), что указывает на то, что большие надпочечники у мышей GRβgeo / + отражают гиперплазию, а не гипертрофию клеток.

Несмотря на то, что полиморфизмы GR у людей связаны с изменениями массы тела и / или состава (см. Ссылку 14), не было различий в массе тела (фиг.6A) или потреблении пищи (данные не показаны) между мышами GRβgeo / + и их GR + / + однопометники, на диете LF или HF. Также не было различий между генотипами на диете в массах жировой ткани (эпидидимальной, паховой и брыжеечной) и мышц (экстензорный дикторум longus) или в уровнях инсулина, NEFA и триглицеридов в плазме (таблица 2). Однако, в то время как диета HF вызывала ожидаемое увеличение уровней триглицеридов в печени в обоих генотипах, уровни были выше в HF-сыворотке GRβgeo / +, чем у мышей GR + / + (таблица 2). Оба генотипа, которым кормили диету LF, показали сходные ответы в ГТТ с идентичным нарушением ответа у мышей, которым была назначена диета HF (рис. 6B).

У мышей, получавших LF, систолическое артериальное давление было значительно повышено (8 мм рт. Ст.) У мышей GRβgeo / + по сравнению с их однопометниками GR + / + (рис.7). Кроме того, артериальное давление было увеличено в обоих генотипах с помощью HF-диеты, хотя интересно, что величина увеличения была ниже у мышей GRβgeo / + (8 мм рт.ст.), чем у мышей GR + / + (14 мм рт.ст.), что не приводило к различию в артериальном давлении между генотипами у мышей, которых кормили ВЧ-диету (рис.7).

Повышенное систолическое артериальное давление у мышей GRβgeo / + было связано с 2-кратным увеличением активности ренина в плазме, которое не зависело от диеты в обоих генотипах, оставаясь выше у мышей GRβgeo / + (фиг.8А). Аналогично, уровни альдостерона в плазме были увеличены у мышей GRβgeo / +, независимо от диеты (фиг.8В). Уровни плазменного ангиотензиногена были сопоставимы между мышами GRβgeo / + и GR + / +, питающимися диетой LF, но были значительно увеличены (в 3 раза) с помощью HF-диеты только у мышей GRβgeo / + (фиг.8C). Уровни мРНК печеночных ангиотензиногенов отражали картину плазменного ангиотензиногена (рис.8Е). Повышенная экспрессия адипозной ткани ангиотензиногена, хотя и значительно ниже, чем экспрессия печени, была постулирована для того, чтобы способствовать или даже лежать гипертензию при диетическом ожирении (38). Однако, хотя мы наблюдали более высокую экспрессию мРНК ангиотензиногена в эпидидимальной жировой ткани мышей линии GRβgeo / +, обработанных LF, по сравнению с мышами GR + / +, уровни были ниже у мышей, получавших HF, и не отличались между генотипами (фиг.8E). Ни уровни мРНК почечных, ни надпочечников ренина не различались между генотипами на диете LF и не изменялись ли они с помощью диеты HF (таблица 3). Аналогичным образом уровни почечных 11β-HSD2 и МР мРНК, как критические детерминанты артериального давления (39), были идентичны между генотипами, и они не отличались диетой (таблица 3). Таким образом, активация RAAS у мышей GRβgeo / +, вероятно, лежит в основе их гипертонии, но не учитывает изменения артериального давления после диеты HF. Активация RAAS у мышей GRβgeo / + не сопровождалась грубой аномальной функцией почек, поскольку морфология почек была сходной в обоих генотипах (данные не показаны).

Хотя полиморфизмы GR связаны с гипертонией и различиями в индексе массы тела и составе тела у людей, в немногих исследованиях на животных были рассмотрены эффекты измененной плотности GR на массу тела и состав, и ни один из них не исследовал влияние на метаболическую адаптацию к ВЧ-диете. Здесь мы обнаружили, что снижение плотности ткани GR не влияет на массу тела, распределение жировой ткани или гомеостаз глюкозы, в основном, на диету чау (неопубликованные наблюдения) или диету LF или после диеты HF. Однако, как и большинство людей, гетерозиготных по мутациям в гене GR, мыши GRβgeo / + имеют активированную ось HPA и, как мы показали, повысили кровяное давление. Интересно отметить, что мыши GRβgeo / + не смогли продемонстрировать полную степень адаптации HPA и артериального давления к диете HF, наблюдаемой у контрольных мышей, что указывает на то, что плотность ткани GR ограничивает адаптивный ответ на хронический диетический стресс.

Как и ожидалось, мыши GRβgeo / + демонстрируют гиперактивную ось HPA с повышенным плазменным кортикостероном и более крупными надпочечниками. Последнее связано с гиперплазией, а не с гипертрофией клеток, поскольку размер клеток надпочечников не был различным у мышей GRβgeo / + в любой из зон. Это согласуется с предыдущими данными, показывающими повышение уровня кортикостерона в плазме у мышей с пониженной плотностью ГР (11, 18), хотя измерения в этих предыдущих исследованиях, вероятно, были уровнями стресса. Однако он отличается от предыдущего исследования на мышах, гетерозиготных по нулевому аллелю GR (GRnull / +), в которых уровни нерегулируемого уровня кортикостерона в плазме, как утром, так и вечером, были такими же, как у контрольных мышей, хотя у мышей действительно наблюдалось увеличение (40), аналогично мышам GRβgeo / + (наши неопубликованные данные). Расхождение в уровнях нестабилизированной плазмы кортикостерона между двумя моделями может быть связано с различиями в окружающей среде или деформации: здесь, с обратной связью до C57BL / 6J в течение пяти поколений, тогда как Ridder et al. (40) исследовали F1-потомство креста C57BL / 6J X FVB / N. Мы (41) отметили более высокие уровни основного кортикостерона в плазме у мышей FVB / N.

Мыши GRβgeo / + имеют полностью нормальный вес тела, региональный ожирение и скудную массу. Гомостаз глюкозы (измеренный глюкозой в плазме натощак) и уровни инсулина, а также толерантность к глюкозе также были полностью нормальными у мышей GRβgeo / +. Этот метаболический фенотип контрастирует с ожирением, наблюдаемым у трансгенных мышей, получавших чау, с глобально уменьшенной плотностью GR из-за антисмысловой экспрессии ГР-РНК (18, 19). Эти мыши, аналогичные мышам GRβgeo / +, также показывают активированную ось HPA (18). Причина несоответствия между этими двумя моделями, каждая с уменьшенным ГР и повышенным кортикостероном, неясна, но может относиться к неизвестным эффектам трансгена GR у антисмысловых мышей, экспрессирующих GR, в которых нокдаун ГР достигается посредством использования промотор гена нейрофиламента, который может дифференцироваться в центральной нервной системе. Мыши с условной делецией гена GR в нейронах имеют очень высокие уровни кортикостерона в плазме из-за отсутствия отрицательной обратной связи в гипоталамусе (42). Однако у этих мышей есть нормальные уровни периферической ГР, замедление роста и пропорциональное увеличение массы тела перед отъемом, но меньше после (20). У мышей GRβgeo / + уменьшенная периферическая плотность GR может компенсировать повышенный уровень кортикостерона в плазме, нормализуя распределение жира в организме. Отсутствие эффекта генотипа на гомеостаз глюкозы не вызывает удивления, поскольку селективная делеция гена GR в гепатоцитах показала, что ГР имеет важное значение для гомеостаза глюкозы только после длительного голодания или в диабетическом состоянии (21). Более того, антисмысловые мыши GR также показывают нормальный гомеостаз глюкозы (19).

Как и большинство людей, гетерозиготных для инактивации мутаций в гене GR (43), мыши GRβgeo / + являются гипертензивными. У мышей GRβgeo / + гипертония возникает в результате повышенной активности ренин-ангиотензин-альдостероновой системы. Уровни альдостерона плазмы были увеличены у мышей GRβgeo / +, как и активность ренина в плазме. Последнее, однако, не было связано с повышенной экспрессией ренин-мРНК в почках или надпочечнике. Ранее сообщалось о том же расхождении между уровнями ренина плазмы и мРНК и предполагалось, что это связано с более быстрой секрецией и оборотом вновь синтезированного ренина по сравнению с длительным периодом полураспада ренин-мРНК (44). В качестве альтернативы, клиренс GRβgeo / + может быть увеличен зазор ренина. Несмотря на снижение плотности GR и повышенные уровни кортикостероидов в плазме у мышей GRβgeo / +, в выражении MR или 11β-HSD2 не было никаких компенсаторных изменений, которые защищают MR от незаконного занятия глюкокортикоидами (39). Аналогично, уровни MR в головном мозге являются нормальными у мышей с специфической для переднего мозга делецией GR (45), предполагая, что MR-плотность не изменяется для компенсации уменьшенной экспрессии GR. Увеличение уровня альдостерона в плазме у мышей GRβgeo / + соответствовало гистопатологии надпочечников, что свидетельствует о высокой синтетической активности продуцирующих альдостерон клеток. Это было предсказано из фенотипа мышей GRhypo / hypo, которые имеют повышенные уровни альдостеронсинтазы в zona glomerulosa (11) и, вероятно, являются следствием повышенных уровней АКТГ в плазме у этих мышей. Действительно, мыши Pomc — / -, у которых отсутствует циркулирующий АКТГ, имеют небольшие надпочечники и резко уменьшают уровни альдостерона в плазме (46).

ВЧ-диеты хронически усиливают ось HPA у грызунов, увеличивая уровни базального кортикостерона и вызывая увеличение надпочечников (35, 47), хотя эффективность отрицательной обратной связи не зависит от диеты HF (35). В соответствии с этим у мышей GR + / + диета HF от отъема увеличивала размер надпочечников и увеличивала уровень кортикостерона в утробе плазмы. Напротив, у мышей GRβgeo / + диета HF не влияла ни на один из этих параметров. Таким образом, различия между генотипами в этих параметрах были устранены диетой. Вечерний (нестепенный) уровень кортикостерона в плазме не влиял на рацион ВЧ и оставался выше у мышей GRβgeo / +. Эти результаты свидетельствуют о том, что отклик оси HPA на диету HF ограничен плотностью ткани GR, этот адаптивный ответ отменяется путем 50-процентного снижения уровней GR.

Неожиданно, учитывая роль глюкокортикоидов в энергетическом гомеостазе (2), мышей GRβgeo / + показали полностью нормальное увеличение массы тела, изменение гомеостаза глюкозы и чувствительность к инсулину на СН-диете и не отличались от контролей GR + / +. Точно так же мыши из обоих генотипов, которые кормили диету HF, удвоили их накопление триглицеридов в печени по сравнению с мышами на контрольной диете, хотя уровни триглицеридов в печени были значительно выше у мышей GRβgeo / +, получавших HF, чем у мышей с GR + / +. Хотя плазменные NEFA не различались между LF- и HF-кормящими мышами, они измерялись через 24 часа, когда высвобождение NEFA из жировой ткани является основным источником энергии и является максимальным. Глюкокортикоиды увеличивают печеночный липогенез и секрецию (484950). Кроме того, последствия измененного статуса глюкокортикоидов при метаболизме триглицеридов в печени зависят от состава диеты (51), но только тогда, когда диета кормится ad libitum (52). Таким образом, если липидный поток является низким, когда животные содержатся на диете LF или с ограниченной диете HF, то глюкокортикоиды минимально влияют на хранение и секрецию триглицеридов в печени (52). Является ли увеличение уровней триглицеридов в печени у мышей GRβgeo / + следствием повышенного пикового уровня кортикостерона у этих мышей (утренние уровни не различались после диеты HF) или прямое последствие уменьшенной плотности печеночной GR еще предстоит определить. Уровни 11β-HSD1 вряд ли способствуют повышению уровня триглицеридов в печени, поскольку уровни мРНК жировой ткани или печени были неизмененными (неопубликованные наблюдения).

Кровяное давление было увеличено с помощью HF-диеты в обоих генотипах, что соответствует предыдущим данным (36, 37, 53). Однако величина HF-индуцированного увеличения артериального давления была меньше у мышей GRβgeo / +, так что артериальное давление у мышей GRβgeo / +, которым вводили HF, не отличалось от мыши у мышей с GRF / +, получавших HF. Механизм, лежащий в основе повышения артериального давления с помощью ВЧ-диеты, остается неясным, но может различаться между генотипами. У мышей GRβgeo / + может быть активирована дальнейшая активация RAAS. Уровни плазменного ангиотензиногена были увеличены с помощью HF-диеты у мышей GRβgeo / +, вероятно, в результате повышенной экспрессии печеночной ангиотензиногена, но не были затронуты у мышей с GR + / +, в которых повышение кровяного давления, вызванное диетой, было больше. Диета HF не влияла на уровень альдостерона в плазме или активность ренина плазмы в обоих генотипах. Таким образом, исключается активация системного РААС с помощью HF-диеты у мышей GR + / +. Повышенные уровни глюкокортикоидов в плазме приводят к гипертонии у людей и грызунов (1, 54). Однако основные механизмы остаются спорными, но могут включать изменения в симпатической нервной системе. В связи с этим следует отметить, что катехоламины надпочечников, вовлеченные в гипертонию, вызванную HF-диетой (53), снижаются у мышей GR +/- (11, 34). В будущей работе будет интересно определить, изменяется ли активность симпатической нервной системы у мышей GRβgeo / +.

У людей полиморфизмы в гене GR, связанные с гиперчувствительностью или гипочувствительностью к глюкокортикоидам при испытании на подавление дексаметазона, были изменчиво связаны с различиями в индексе массы тела, отношении талии и тазобедренного сустава, измененном составе тела и метаболических параметрах (обзор в 14) а также различия в артериальном давлении (5556575859). Однако исследования ассоциации (14) противоречивы и могут зависеть от возраста, пола и этнического происхождения. Представленные здесь данные дают представление об этой неоднородности. В нашей модели устойчивости к глюкокортикоиду, обусловленной уменьшением плотности GR на ~ 50%, наблюдаемые физиологические различия между генотипами зависят от окружающей среды. Таким образом, некоторые из различий между генотипами отменены или уменьшены после диеты HF. Если то же самое относится к людям, то (например) ожирение или другой хронический стресс могут маскировать различия в артериальном давлении между популяциями с различными полиморфизмами ГР.

Глюкокортикоиды являются частью важных механизмов гомеостатического контроля, которые имеют решающее значение для адаптации к экологическим проблемам. Таким образом, они сохраняют стабильность с течением времени (аллостаз, рассмотренный в 60, 61). Мыши GRβgeo / + не показывают нормальных адаптаций к СН-диете; они имеют ослабленный ответ артериального давления и не показывают изменений в размере надпочечников и активности оси HPA, наблюдаемых у мышей WT. Следовательно, уровни базального кортикостерона нормализуются между генотипами после ВЧ-диеты. Более того, мыши GRβgeo / + накапливали больше триглицеридов в печени, возможно, из-за недостаточной адаптации к чрезмерному потреблению жиров и энергии в диете и необходимости защиты жизненно важных органов. Продолжающееся чрезмерное накопление липидов в печени может, в свою очередь, приводить к резистентности к инсулину и метаболическим заболеваниям. Плотность GR, вероятно, будет ограничена в других системах при адаптации к стрессовым факторам окружающей среды. Мыши, гетерозиготные для инактивации мутаций в GR, демонстрируют пониженное поведение копов в мышечном корреляте депрессии с нарушенными показателями нейронной пластичности (40), тогда как избыточная экспрессия GR приводит к устойчивости к стрессу и надежной защите от эндотоксинов. Эти адаптивные или «ремоделирующие» эффекты глюкокортикоидов во взрослом ответе на диету HF напоминают пренатальные «программные» эффекты глюкокортикоидов (см. Ссылку 62), где воздействие позднего плода на глюкокортикоиды постоянно программирует тканевые системы на протяжении всей жизни, включая артериальное давление, гомеостаз глюкозы / липидов и плотность самой ткани GR. Это будет представлять большой интерес для определения того, влияет ли плотность GR на эффекты пренатального программирования глюкокортикоидов таким же образом, что он изменяет постнатальное артериальное давление и адаптацию HPA к хронической диете HF.

Мы благодарим Марка Дэниелсена (Школа медицины Джорджтаунского университета, Вашингтон, округ Колумбия, США) за любезное предоставление плазмиды SV2wrec, кодирующей мышь кДНК мыши и Дэвида Пирса (Калифорнийский университет, Сан-Франциско, Департамент медицины, Сан-Франциско, Калифорния, США) для обеспечивая плазмиду Luc pPNMT-998 / -466. Мы благодарим объект биомедицинских исследований, Эдинбургский университет, учреждение по оказанию помощи в области ухода за животными и членов эндокринологической группы за полезные обсуждения и консультации. Эта работа была поддержана Студенческим домом Wellcome Trust PhD (до ZM), грантом проекта Британского фонда сердца (для KEC, CJK, NMM и JRS), грантом программы Wellcome Trust Program (для JRS и KEC), грантом проекта Wellcome Trust (к MCH и JRS), а также грант программы Совета по медицинским исследованиям (CJK). N.M.M. поддерживается при поддержке Wellcome Trust Career Development Fellowship.

Слитый белок GR-βgeo транскрипционно неактивен. A) Схематический вид функциональных областей GR (сверху), экзоновой структуры кДНК GR (средний) и предсказанной структуры GR-βgeo химерной мРНК (снизу). N-терминальный домен (NTD) GR кодируется экзоном 2 (экзон 1 является некодирующим), ДНК-связывающий домен (DBD) экзонами 3-4 и лигандсвязывающий домен (LBD) экзонами 5-9. Кассета βgeo заменяет экзоны 4-9. B, C) клетки HEK293 временно трансфицировали WT мышиным GR, GR-βgeo или «пустым» вектором вместе с репортерами LTR-люциферазы MMTV (B) или PMNT-998 / -466-люциферазы (C), а затем инкубировали без ( белые полосы) или с (черные полосы) 1 мкМ дексаметазона. Данные представляют собой ± 3 независимых эксперимента, каждый из которых выполняется в трех экземплярах. Значения выражаются относительно вектора, произвольно установленного на 1. *** P <0,001 против необработанных мышей. Обратите внимание на масштаб журнала для активности промоутера. A.U., произвольные единицы.

Мыши GRβgeo / + уменьшали уровни мРНК GR в головном мозге с нормальным распределением экспрессии GR-βgeo. A) Представитель X-gal окрашенного участка GRβgeo / + мозга, демонстрирующего сильное окрашивание в образце, идентичном распределению мРНК GR в подполях CA1 / 2, зубчатой ​​извилине (DG) и паравентрикулярном ядре гипоталамуса (PVN), с более слабым окрашиванием в коры и таламуса. B, C) Репрезентативные авторадиограммы, демонстрирующие гибридизацию ГР мРНК in situ в мозговых срезах мозга мышей GR + / + (B) и мышей GRβgeo / + (C). D) Количественная оценка уровней мРНК GR [оптическая плотность (OD)] в PVN GR + / + (белые полосы) и мыши GRβgeo / + (черные полосы) (n = 6 / группа; * P <0,05).

Мыши GRβgeo / + имеют половину нормальных уровней мРНК GR в мозге и периферических тканях

Уровни мРНК GR в головном мозге измеряли гибридизацией мРНК in situ с использованием зонда cRNA, комплементарного экзонам 5-9 GR, отсутствующего в мРНК, кодирующей слитый белок GR-βgeo. Уровни полноразмерной МР-мРНК GR в периферических тканях измеряли с помощью qPCR с использованием набора праймер-зондов, охватывающего экзоны 5-6. Для сравнения между генотипами (n = 6 / group) проводили t-критерий Стьюдента. Значение было установлено при P <0,05. AU, произвольные единицы; CA, cornu ammonis; DG, зубчатая извилина; PVN, паравентрикулярное ядро ​​гипоталамуса; EDL, экстензор Longus digitalis.

Мыши GRβgeo / + уменьшили функциональные уровни белка GR. Представитель Вестерн-блот-анализа показал снижение нормального GR (95 кДа) в эпидидимальном жире мышей GRβgeo / + (+/-) по сравнению с мышами GR + / + (+ / +) (вверху). Слитый белок GR-βgeo (191 кДа) проявлялся только у мышей GRβgeo / +. Тубулин (средний) и окрашивание красным красным цветом (снизу) демонстрируют эквивалентную загрузку белка.

Гиперактивность HPA у мышей GRβgeo / +. A, B) Уровни плазменного кортикостерона (корте) в LF-подаваемых GR + / + (белые полосы), HF-питаемые GR + / + (штриховые бары), LF-питаемые GRβgeo / + (черные полосы) и HF-питаемые GRβgeo / + мышей (серые полосы) утром (A) и вечером (B). C) Левые надпочечниковые массы в LF или HF-питаемых мышах GR + / + и GRβgeo / + (n = 8-9 / группа). *, † P <0,05; ** P <0,01; ††† P <0,001. ‡ P <0,01 против HF-сывороточных мышей GR + / +.

Мыши GRβgeo / + имеют большие надпочечники. Репрезентативные изображения окрашенных гематоксилином и эозином участков надпочечников от LF-сывороточных мышей GR + / + (A, C); LF-питаемые мыши GRβgeo / + (B, D); HF-питаемые мыши GR + / + (E); и HF-сыворотки GRβgeo / + (F). ZF, zona fasciculate; ZG, zona glomerulosa; MED, медуллу. n = 8-9 / группа. Шкала шкалы = 25 мкм.

Неизменный состав тела и гомеостаз глюкозы у мышей GRβgeo / + после ВЧ-диеты. Вес тела (A) и уровни глюкозы в плазме (B) после GTT у LF-кормящих мышей GR + / + (открытые квадраты, пунктирная линия); HF-питаемые мыши GR + / + (открытые круги, пунктирная линия); LF-сыворотки GRβgeo / + (черные квадраты, сплошная линия) и HF-питаемые мыши GRβgeo / + (черные круги, сплошная линия) (n = 6 / группа). *** P <0,001.

Подобный региональный ожирение, скудная масса, уровень плазменного инсулина и липидов у мышей GRβgeo / + и GR + / +

Плазменный NEFA, уровень триглицеридов в плазме (TG) и уровень инсулина в плазме измеряли через 24 часа.

П < 0.05; 

П < 0.01; 

P <0,001 против диеты LF. Значения курсивом показывают значительную разницу между генотипами. n = 8 / группа.

Мыши GRβgeo / + имеют повышенное кровяное давление. Систолическое артериальное давление (SBP) у LF-сывороточных мышей GR + / + (белые полоски), мыши GRF / +, обработанные HF (штриховые стержни), LF-питаемые мыши GRβgeo / + (черные полосы) и HF-питаемые GRβgeo / + мышей (серые полосы). * P <0,05; **, †† P <0,01.

Активация RAAS у мышей GRβgeo / +. Активность плазмы ренина (А), концентрация альдостерона в плазме (В), концентрация ангиотензиногена в плазме (С), уровни мРНК эпидидимального жира (АГТ) (D) и уровни мРНК печеночной АГТ (Е) у LF-сывороточных мышей GR + / + белые батончики), HF-питаемые мыши GR + / + (штриховые стержни), мыши, обработанные LF GRβgeo / + (черные полосы), и HF-питаемые мыши GRβgeo / + (серые полоски). Для плазменных измерений n = 5 / группа. Для уровней мРНК n = 8-9 / группа. *, † P <0,05; **, †† P <0,01; ***, ††† P <0,001.

Аналогичное выражение мРНК, кодирующих ренин, 11β-HSD2 и MR у мышей GRβgeo / + и GR + / +

Уровни специфических мРНК измеряли с помощью qPCR и выражались в произвольных единицах. Не было значительных эффектов ни генотипа, ни диеты на уровни какой-либо из измеренных мРНК (n = 6 / группа).

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *