Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Актуальный инфликсимаб для подавления заживления ран после экспериментальной хирургии фильтрации глаукомы

Topical infliximab for the suppression of wound healing following experimental glaucoma filtration surgery
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4018311/

Целью этой работы было изучить влияние инфликсимаба на заживление ран в экспериментальной хирургии фильтрации глаукомы и сравнить антифибротические эффекты этого агента с действием митомицина-С (MMC).

Двадцать восемь мужчин новозеландских белых кроликов были случайным образом распределены по четырем группам, каждая из которых включала семь кроликов: контрольную группу, фиктивную группу, группу MMC и группу инфликсимаба. Кролики в контрольной группе не работали и не получали никакого лечения. Кролики в фиктивной группе подвергались трабекулэктомии и одну каплю солевого раствора прививали четыре раза в день в течение 14 дней. Кролики в группе лечения MMC подвергались трабекулэктомии, а губку, пропитанную 0,6 мг / мл MMC, наносят интраоперационно на хирургический сайт склеры в течение трех минут. Кролики в группе лечения инфликсимабом прошли трабекулэктомию и одну каплю 10 мг / мл инфликсимаба прививали четыре раза в день в течение 14 дней после операции. На 14-й день эксперимента операционные и контрольные глаза были энуклеированы и гистологически и иммуногистохимически проанализированы.

Средние значения фибробластов и мононуклеарных клеток (MNC) и средние интенсивности иммуноокрашивания трансформирующего фактора роста-β (TGF-β), фактора роста фибробластов-β (FGF-β) и тромбоцитарного фактора роста (PDGF) в фиктивном состоянии группа была выше, чем у контрольной группы (Р <0,01). Средние значения фибробластов и MNC, а также средние интенсивности иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF в группах MMC и инфликсимаба были статистически достоверно ниже, чем у фиктивной группы (P <0,01). Средние значения фибробластов и MNC и средняя интенсивность TGF-β, FGF-β и PDGF иммуноокрашивания групп MMC и инфликсимаба были сходными (P> 0,05).

Наше исследование предполагает, что местный инфликсимаб эффективно подавляет ответ на субконъюнктивальный раневой эффект после экспериментальной хирургии фильтрации глаукомы, уменьшая количество MNC и фибробластов и интенсивности иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF.

Глаукома — это многофакторная, прогрессирующая оптическая невропатия, характеризующаяся гибелью клеток сетчатки сетчатки, потерями поля зрения и раскопкой головы зрительного нерва. Глаукома, вторая ведущая причина предотвратимой слепоты, обычно вызвана воздействием повышенного внутриглазного давления (ВГД). Поскольку повышенный ВГД является единственным излечимым фактором риска заболевания, сокращение ВГД является основным методом управления глаукомой. Операция глаукомы указывается, если целевое давление не достигается, или если глаукоматозная оптическая невропатия прогрессирует, несмотря на максимально допустимые медицинские и лазерные терапии.1

В настоящее время трабекулэктомия по-прежнему является самой надежной и наиболее широко применяемой хирургической процедурой для снижения ВГД у подавляющего большинства пациентов с неконтролируемой глаукомой, несмотря на максимальную медикаментозную терапию. Трабекулэктомия позволяет дренировать водную юмористику из передней камеры в субконъюнктивное пространство, создавая лимфатическую фистулу с половинной склеральной толщиной. Эта процедура уменьшает ВГД с помощью фильтрующего пузыря.2-4. Неисправность операции фильтрации глаукомы (СГФ) обычно происходит из-за чрезмерного заживления ран при конъюнктиве или над склеральным клапаном, что приводит к сбою фильтрующих пузырьков. Таким образом, подавление реакции заживления ран очень важно для предотвращения обструкции установленного свища.5,6

Фибробласты являются основным типом клеток, которые играют роль в заживлении ран в области склерового лоскута после GFS. Кроме того, известно, что мононуклеарные клетки (MNC) являются основным источником фиброзных и ангиогенных цитокинов, таких как трансформирующий фактор роста (TGF), фактор роста фибробластов (FGF) и тромбоцитарный фактор роста (PDGF), которые играют авторитетная роль в инициировании заживления ран. Эти факторы роста вызывают наиболее сильное влияние на фибробласты и повышают активность фибробластов и усиливают секрецию внеклеточных матричных компонентов.5-7 Таким образом, подавление фибробластов и МНК в хирургическом районе увеличивает успех трабекулэктомии.

В настоящее время существует множество антифибротических агентов, используемых при подавлении заживления ран после GFS. Митомицин-C (MMC) и фторурацил являются наиболее часто используемыми противогрибковыми средствами для увеличения успеха трабекулэктомии. Однако у них есть серьезные побочные эффекты, такие как эндотелиальная токсичность роговицы, протекание пузыря, гипотоническая макулопатия, пузырь и эндофтальмит.8-12 Таким образом, для подавления заживления ран после GFS необходимы новые агенты, которые являются более селективными и менее токсичными.

Infliximab является химерным моноклональным IgG1-антителом мыши / человека против фактора некроза опухоли (TNF) -α. TNF-α является местным паракрином и аутокринным регулятором лейкоцитов низкой плотности и эндотелиальных клеток. Он стимулирует мононуклеарные фагоциты, а также другие типы клеток, которые продуцируют различные провоспалительные цитокины и хемокины и индуцируют миграцию полиморфных ядерных лейкоцитов. Infliximab связывается с молекулой TNF-α и уменьшает миграцию лимфоцитов и продуцирование провоспалительных цитокинов, включая интерлейкин (IL) -1, IL-6 и молекулы адгезии. Это агент, применяемый при лечении таких заболеваний, как болезнь Крона, язвенный колит, ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилит и аутоиммунные воспалительные заболевания глаз, такие как увеит, склерит и болезнь Бехчета.13-15 Также недавно сообщалось, что инфликсимаб является эффективный при лечении сосудистой неоваскуляризации и в предотвращении неоваскуляризации роговицы.16,17 В недавних исследованиях было продемонстрировано, что экспрессируемая экспрессируемая инфликсимабом экспрессия и уровни цитокинов, которые играют роль в реакции заживления ран, включая TGF-β, основной FGF, и PDGF-B.18-20

Насколько нам известно, в литературе ранее не было изучено подавление заживления ран местным инфликсимабом после СГФ. В нашем исследовании мы стремились исследовать влияние инфликсимаба на заживление ран в экспериментальной СГФ и сравнить противогрибковые эффекты этого агента с эффектами ГМК.

Исследование включало 28 мужчин новозеландских белых кроликов весом 2500-3000 г каждый. Животных содержали в надлежащих диетических условиях в специальных клетках в экспериментальном исследовательском центре в Университете Фирата, Элазыг, Турция на протяжении всего исследования. Животных помещали в индивидуальные клетки с дном, при комнатной температуре (с кондиционированием, 22 ° C-26 ° C) в 12-часовом светло-темном цикле. Все кролики были акклиматизированы, по крайней мере, за 1 неделю до начала экспериментов. Животных кормили стандартной кроличьей чау, но им давали только воду за 12 часов до операции. Исследование было одобрено Комитетом по этике по вопросам ухода за животными и их использованием в Университете Фирата. Все эксперименты и связанные с животными процедуры выполнялись с строгим соблюдением рекомендаций по уходу за животными и экспериментам Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии (ARVO), как описано в их заявлении об использовании животных в офтальмологических и визуальных исследованиях. Только один глаз кроликов в исследовательских группах подвергался стандартной подготовке к операции, анестезии и хирургической технике.

Кролики были случайным образом распределены по четырем группам, каждая из которых включала семь кроликов: контрольную группу, группу обмана, группу MMC и группу инфликсимаба. Кролики в контрольной группе не работали и не получали никакого лечения. Кролики в фиктивной группе подвергались трабекулэктомии и одну каплю солевого раствора прививали четыре раза в день в течение 14 дней. Кролики в группе лечения MMC подвергались трабекулэктомии, а губку, смоченную в 0,6 мг / мл MMC, наносят на операционную операцию склеры в течение 3 минут. Кролики в группе лечения инфликсимабом подвергались трабекулэктомии, а одну каплю 10 мг / мл инфликсимаба прививали четыре раза в день в течение 14 дней после операции.

В анестезии и анальгезии использовалась комбинация внутримышечного гидрохлорида кетамина 50 мг / кг (Ketalar; Eczacibasi Holding Co, Стамбул, Турция) и 6 мг / кг гидрохлорида ксилазина (Rompun®, Bayer AG, Leverkusen, Germany). Перед операцией в глаза, которым нужно оперировать, вводили одну каплю 0,5% пропаракаина гидрохлорида (Alcaine, Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, TX, США).

Глаза кроликов были очищены и задрапированы для операции. Хирургическая процедура проводилась с использованием операционного микроскопа (Carl Zeiss Meditec AG, Йена, Германия). Трабекулэктомия на основе лимб, описанная Кэрнсом 21, выполнялась на правых глазах всех кроликов в исследовательских группах, за исключением контроля группа. Вкратце, был размещен зеркальный колпачок, и шелковый шовный шелк с шероховатой шероховатой толщиной 8-0 был применен превосходно, чтобы вытащить и зафиксировать глазное яблоко. Перитомия была сделана на 5 мм выше лимба, образуя конъюнктивальный лоскут на основе лимба. Прямоугольный (2,5 × 2,5 мм) склеральный лоскут на основе лимба был очерчен стальным лезвием и тщательно расчленен. Затем был нанесен трефин (1,5 мм в диаметре) для входа в переднюю камеру на хирургическом лимбу, и была выполнена периферическая иридэктомия. Сайт периферической иридэктомии привел к обнаружению местонахождения пузыря при гистопатологическом исследовании. Щипцы склеры закрывали путем наложения швов с помощью 10-0 нейлона в двух точках, а конъюнктивальная рана была закрыта путем наложения швов двумя швами полиглактина 9-0.

Кролики в группе поддельных получали одну каплю солевого раствора четыре раза в день в течение 14 дней после операции. В группе MMC губку, пропитанную 0,6 мг / мл MMC, наносили на хирургический сайт склеры в течение 3 минут, после чего область нанесения тщательно поливали 10 мл сбалансированного солевого раствора. Кролики в группе лечения инфликсимабом прошли трабекулэктомию и одну каплю 10 мг / мл инфликсимаба прививали четыре раза в день в течение 14 дней после операции.

В конце 14-го послеоперационного дня глаза были энуклеированы, кроликов снова анестезировали, и глобусы были энуклеированы вместе с конъюнктивой, включая пузырь, для гистологического исследования. Одиночные (правые) глаза кроликов в контрольной группе также были подготовлены для гистологического исследования. Место операции каждого энуклеированного глаза расчленялось как блокировка, в которой содержалась конъюнктива, капсула Тенона и склера. Хирургическая область была указана по месту иридэктомии. После этой процедуры животным разрешалось жить.

Образцы тканей фиксировали в 10% формальдегиде и вставляли в парафин перед разделением срезов. Серийные срезы (толщиной 4 мкм) разрезали, обезвоживали и окрашивали гематоксилином и эозиновым пятном для исследования световой микроскопии. Образцы окрашивали трихромом Массона, и микроскопический анализ проводили с использованием объектива стандартного светового микроскопа × 400 (фотомикроскоп BX50, Olympus Corporation, Токио, Япония). С использованием конкретного микрометра, прикрепленного к микроскопу, были подсчитаны фибробласты и МНК в десяти случайно определенных срезах (площадь 50 мкм2) и были проанализированы средние числа клеток в этих зонах. Значения, полученные из подсчета ячеек десяти последовательных секций, были представлены как арифметические средства и стандартное отклонение.

Были подготовлены серийные слайды (толщиной 4 мкм), включая участок пузырька. Слайды окрашивали наборами TGF-β, FGF-β и PDGF (Bioss Inc., Woburn, MA, USA) в автоматизированном иммунореакторном устройстве (BenchMark XT; Ventana Medical Systems, Inc., Tucson, AZ, USA) в соответствии с к инструкциям производителя. Слайды, покрытые специальной подложкой, были случайно оценены под световым микроскопом (фотомикроскоп Olympus BX50). Цифровые фотографии тканей были сделаны с увеличением × 40 с помощью камеры на микроскопе. Интенсивности иммунитета TGF-β, FGF-β и PDGF определяли полуколичественно как ни один (0), слабый (1), умеренный (2), либо интенсивный (3).

Статистический анализ исследования проводился с помощью программного обеспечения IBM SPSS Statistics (v 21, IBM Corporation, Armonk, NY, USA) для определения различий между исследовательскими группами. Значения, полученные из подсчета ячеек десяти последовательных секций, были представлены как арифметические средства и стандартное отклонение. Для множественных сравнений был проведен односторонний анализ теста дисперсии для анализа чисел фибробластов и MNC среди групп. Тест Tukey post hoc использовался для бинарных сравнений между группами. Различия TGF-β, FGF-β и PDGF с иммуноокрашиванием оценивали с помощью теста Крускала-Уоллиса. Значения P менее 0,05 считались статистически значимыми.

Средние и стандартные отклонения числа фибробластов и MNC в исследуемых группах представлены в таблице 1. Средство и стандартные отклонения интенсивности иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF в исследуемых группах представлены в таблице 2.

Средние значения фибробластов и MNC и средняя интенсивность иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF группы фиктивных групп были выше, чем у контрольной группы (P <0,01). Средние значения фибробластов и MNC и среднее значение TGF-β, FGF-β и PDGF иммуноокрашивающих интенсивностей MMC и группы инфликсимаба были статистически достоверно более низкими, чем показатели фиктивной группы (P <0,01). Не было статистически значимой разницы между средними значениями MNC и фибробластов и средней интенсивностью иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF в группах MMC и инфликсимаба (P> 0,05).

Сравнительные микрофотографии, показывающие пролиферацию фибробластов и инфильтрацию MNC на месте кровотечения каждого из кроликов в исследуемых группах, показаны на рисунке 1.

Микрофотографии иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF одного субъекта из каждой исследуемой группы показаны на рисунках 2-4 соответственно.

Антиметаболиты, такие как MMC и фторурацил, значительно увеличили успех СГФ, особенно у пациентов с повышенным риском хирургического отказа из-за чрезмерного заживления ран в хирургической области. Тем не менее, существует риск слепоты при использовании антиметаболита.8-12 Кроме того, хирургическая неудача может произойти, несмотря на использование этих мощных антиметаболитов. Таким образом, существует потребность в сильных агентах, которые не имеют серьезных побочных эффектов.

Фибробласты, основные клетки, ответственные за чрезмерное заживление ран в области склерального лоскута после GFS, синтезируют коллаген, который является наиболее важным компонентом грануляционной ткани. Пролиферацию фибробластов капсулы Тенона стимулируют эпидермальный фактор роста, FGF, TGF-β, инсулиноподобный фактор роста-1, PDGF, фибронектин, трансферрин, IL-1 и IL-6. TGF-β является наиболее мощным стимулятором фибробластной активности.5-7,22,23 Кроме того, после конъюнктивальной и склеральной хирургии PDGF высвобождается из тромбоцитов, что способствует миграции клеток в раневую область и увеличивает пролиферацию фибробластов.6,7, 22-26 Таким образом, ингибирование функции фибробластов после СГФ является важным фактором процесса заживления ран и результатов СГФ.

В нашем исследовании фибробластная инфильтрация была значительно подавлена ​​в группах MMC и инфликсимаба. Однако статистически значимой разницы между группами MMC и инфликсимаба не было. Возможно, что инфликсимаб ингибирует пролиферацию и миграцию фибробластов токсическим эффектом или путем уменьшения TGF-β, FGF-β и PDGF, как видно из нашего исследования.

МНК представляют собой клетки, поступающие в область хирургической раны после полиморфных ядерных лейкоцитов. Хемотаксис MNC увеличивается с помощью фибронектина, факторов роста и системы комплемента. Макрофаги представляют собой МНК, полученные из моноцитов, и они выделяют различные факторы, которые стимулируют миграцию и пролиферацию фибробластов. Они способствуют раннему заживлению ран и играют решающую роль в ремоделировании тканей на поздних стадиях заживления ран.5,22,27,28 Макрофаги считаются основным источником фиброзных и ангиогенных цитокинов, таких как PDGF и TGF-β.29 Сообщалось, что конъюнктива пациентов, у которых СГФ не удалось, содержит больше макрофагов. MNC также выделяют ферменты, которые усиливают деградацию ткани, генерируют хемотаксические факторы, которые вербуют воспалительные клетки и взаимодействуют с лимфоцитами. Они продуцируют цитокины и вызывают накопление и пролиферацию фибробластов и эндотелиальных клеток с последующим фиброзом и ангиогенезом.5, 22, 27, 28. Таким образом, можно предположить, что уменьшение количества макрофагов сопровождается подавленной реакцией заживления раны и хирургическим успехом , В нашем исследовании инфильтрация MNC в области пузырьков была значительно подавлена ​​в группах MMC и инфликсимаба; однако различия между этими двумя группами не были статистически значимыми. Снижение количества МНК в обеих группах лечения, по-видимому, было следствием снижения уровней фактора роста.

TGF-β продуцируется макрофагами, лимфоцитами, тромбоцитами и фибробластами, и он является одним из наиболее важных профиброгенных цитокинов в процессе заживления раны конъюнктивы, вызывая пролиферацию и миграцию фибробластов человека Тенона и способствующий развитию коллагена.23,30- 34 TGF-β и PDGF оказывают самое сильное влияние на заживление ран, так как эти факторы роста увеличивают активность фибробластов.35,36 Сниженные уровни TGF-β коррелируют с задержкой процесса заживления ран при ожоговом травме и без рубцевания , а также снижение уровня PDGF наблюдалось при неизлечимых ранах у крыс с диабетом.38 С другой стороны, повышенные уровни TGF-β связаны с увеличением фиброза в нескольких органах, включая сердце, печени, почек, легких, кожи и костного мозга.39-42 TGF-β считается ингибирующим рост лейкоцитов и стимулирует выработку фибробластов.43,44 TGF-β повышает резистентность раневого сайта для натяжения в разрезах роговицы у кроликов путем увеличения количества фибробластов путем хемотаксиса, уменьшения синтеза матричной металлопротеазы и усиления синтеза ингибитора ткани металлопротеазы.42 В мышиных моделях конъюнктивального рубцевания было сообщено, что TGF-β2 применяется к мышиная конъюнктива после применения MMC значительно изменила противогрибковые эффекты MMC.31,32. Ингибирование TGF-β может быть эффективным средством предотвращения послеоперационных рубцов после трабекулэктомии. В нашем исследовании MMC и инфликсимаб аналогичным образом уменьшали плотность иммуноокрашивания TGF-β в области склерального лоскута. Хотя точные механизмы, лежащие в основе этого ответа, неизвестны, возможно, что воздействие MMC уменьшает фибробласты человека Tenon, которые являются одним из основных производителей TGF-β.

FGF-β, секретируемый макрофагами и эндотелиальными клетками, стимулирует миграцию и пролиферацию фибробластов. Сообщалось, что фибробласты капсулы Tenon, подвергнутые воздействию MMC, значительно уменьшают количество рецепторов FGF-β.40-44. В нашем исследовании MMC и инфликсимаб в равной степени уменьшали интенсивность иммуноокрашивания FGF-β в области пузырьков. Поскольку оба препарата сильно подавили пролиферацию фибробластов и уменьшили FGF-β, было бы рассмотрено использование обоих препаратов.

PDGF также играет очень важную роль в заживлении ран, стимулируя пролиферацию и миграцию фибробластов. 40-44 Исследования Denk et al сильно подтверждают гипотезу о том, что изоформы PDGF являются основными стимуляторами пролиферации фибробластов капсулы Тенона после GFS, тогда как TGF-β изоформы необходимы для трансформации фибробластов капсулы Тенона в миофибробласты.25,44 В другом исследовании Knorr et al продемонстрировали, что изоформы PDGF-AB и -BB являются мощными стимуляторами пролиферации фибробластов капсулы человека Tenon, что свидетельствует о том, что они играют важную роль в реакции заживления ран после GFS.26 PDGF обычно присутствует в следовых количествах в водной юморе и увеличивает пролиферативный ответ фибробластов на TGF-β.44. PDGF также является хемоаттрактантом для клеток трабекулярной сетки. В свою очередь, TGF-β регулирует рост ткани через белок PDGF и экспрессию рецептора в кератоцитах, хотя точный механизм, с помощью которого это происходит, неизвестен. В других соединительных тканях низкие концентрации TGF-β способствуют развитию PDGF, тогда как при высоких концентрациях TGF-β экспрессия рецептора PDGF уменьшается. 40-45. В нашем исследовании MMC и инфликсимаб одинаково уменьшали интенсивность иммуноокрашивания PDGF в склере лоскут. Это открытие совместимо с фибробласт-снижающим эффектом обоих препаратов.

MMC представляет собой антиметаболит и противоопухолевое средство, которое выделено из Streptomyces caespitosus и которое уменьшает пролиферацию фибробластов как в субконъюнктивальном пространстве, так и в капсуле Тенона. Он широко используется в трабекулэктомии для предотвращения чрезмерного послеоперационного заживления ран на хирургическом участке в случаях риска хирургического отказа из-за его антифибротических и противораковых свойств. Ямамото и др. Сообщили, что MMC ингибирует пролиферацию и подвижность культивируемых субконъюнктивных фибробластов кролика и что его ингибиторный эффект зависит от дозы и времени воздействия препарата.46 Другое экспериментальное исследование показало, что гистологическое исследование глаз с помощью трабекулэктомии, обработанной MMC, выявило гипоцеллюлярные и хорошо сформированные полости пузырьков, и что однократное интраоперационное применение MMC оказало заметное влияние на послеоперационное заживление ран после операции фильтрации у обезьян.47 Однако местно примененная MMC имеет серьезные окулярные осложнения, такие как некроз в роговице и конъюнктиве, перфорация склеры , хориоидальная отслойка, эпителиальный спад, нарушение фильтрации и эндофтальмит.10-13 Хотя MMC широко используется в GFS с высокими показателями успеха, невозможно использовать его во всех случаях, которые имеют высокий риск отказа. Кроме того, MMC является одним из десяти самых канцерогенных веществ для человека.48

Инфликсимаб является человеческим мышиным моноклональным антителом, которое может связываться как с растворимыми, так и с трансмембранными формами TNF-α с высокой аффинностью. TNF-α является местным паракрином и аутокринным регулятором для лейкоцитов и эндотелиальных клеток малой плотности. Он стимулирует мононуклеарные фагоциты, а также другие типы клеток, продуцирующих IL-1, IL-6 и хемокины, и индуцирует миграцию полиморфных ядерных лейкоцитов. TNF-α обладает синергическим эффектом с IL-6 и играет решающую роль в развитии воспаления при увеите. Кроме того, он вносит свой вклад в патогенез увеореетинита, связанный с болезнью Бехчета14,15

В настоящее время все больше доказательств того, что TNF-α играет важную роль в инициировании и увековечении фиброзного процесса.49-54 В недавнем исследовании Салливан и др. Продемонстрировали, что TNF-α индуцирует экспрессию TGF-β1 в фибробластах легких.49 Battegay et al сообщил, что TNF-α стимулирует синтез ДНК и пролиферацию культивируемых фибробластов человека и что существует сильная взаимосвязь между секрецией PDGF и стимуляции TNF-α50. Поэтому мы постулируем, что TNF-α может играть значительную роль в регуляции экспрессии цитокинов, которые сами играют важную роль в заживлении ран после GFS, таких как TGF-β, FGF и PDGF.

В последнее время инфликсимаб использовался в качестве нового иммуномодулирующего средства, особенно при увеитах, резистентных к лечению, панувеитах, связанных с болезнью Бехчета, ревматоидным артритом и болезнью Крона.55 Было показано, что Infliximab ингибирует функциональную активность TNF-α в нескольких исследованиях in vitro .56,57 Было высказано предположение, что инфликсимаб оказывает своим клиническим эффектам у пациентов с увеитом через различные механизмы, которые включают снижение уровней воспалительных медиаторов в сыворотке путем блокирования TNF-α, предотвращения миграции лимфоцитов и снижения уровня фактора роста эндотелия сосудов.58 Связывание инфликсимаба с растворимым TNF-α приводит к снижению биологической активности, тогда как его связывание с мембрано-связанным TNF-α приводит к цитотоксичности через зависимые от комплемента или антитело-зависимые механизмы, опосредованные клетками. Тем не менее, неизвестно, как инфликсимаб действует в моделях in vivo. Вторичный для подавления TNF-α, инфликсимаб снижает уровни воспалительных медиаторов в сыворотке, включая IL-1 и IL-6 и сосудистые факторы роста. Кроме того, он уменьшает миграцию лимфоцитов.59

В нашем исследовании мы наблюдали, что местно вводимый инфликсимаб 10 мг / мл после GFS значительно подавлял пролиферацию фибробластов и инфильтрацию MNC по сравнению с фиктивной группой и что он был столь же эффективным и сильным, как MMC. Было также отмечено, что интенсивности иммуноокрашивания TGF-β, FGF-β и PDGF в группе инфликсимаба были значительно ниже, чем у группы с обманом. Возможно, что инфликсимаб действует посредством ингибирования пролиферации и миграции фибробластов токсическим эффектом или путем уменьшения TGF-β, FGF-β и PDGF, как видно из нашего исследования.

Насколько нам известно, после поиска базы данных PubMed ранее не было изучено использование инфликсимаба в экспериментальной модели СГФ. Мы считаем, что инфликсимаб может снизить инфильтрацию фибробластов путем индукции апоптоза фибробластов или подавления эффектов TGF-β, FGF-β и PDGF, как видно из настоящего исследования. Подавляющее действие инфликсимаба на количество МНК может быть связано с его эффектом остановки цикла, апоптозом или ингибированием хемотаксиса МНК путем подавления эффектов вышеупомянутых цитокинов. Небольшое количество экспериментальных животных можно рассматривать как основное ограничение нашего исследования. В этом исследовании мы использовали ранее сообщенную экспериментальную дозу и скорость введения инфликсимаба.16,59 Мы не наблюдали никакой токсичности роговицы или конъюнктивы в гистологических срезах.

Принимая во внимание токсические эффекты MMC в GFS и сильные антифибробластические эффекты инфликсимаба, а также MMC на заживление раны конъюнктивы, инфликсимаб можно рассматривать как потенциальный альтернативный агент для модуляции заживления ран после GFS. Однако для оценки его использования с СГФ необходимы дальнейшие исследования in vivo и in vitro.

Эта работа финансировалась за счет неограниченного гранта от Научно-исследовательского подразделения Университета Фирата (учреждение авторов). Исследование было одобрено Комитетом по этике по вопросам ухода за животными и их использованием в Университете Фирата. Все эксперименты и связанные с животными процедуры выполнялись с строгим соблюдением рекомендаций по уходу за животными и экспериментам Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии (ARVO), как описано в их заявлении об использовании животных в офтальмологических и визуальных исследованиях.

Вклад автора

Участвовал в проведении исследования: BT, KE, MMA, TD, SK. Сбор данных, набирание и редактирование рукописи и статистический анализ: BT, KE, MMA, TD, SK. Подготовка, перевод, рассмотрение и утверждение окончательной рукописи: BT, KE, MMA, TD, SK.

раскрытие

Авторы не сообщают о конфликте интересов в этой работе.

Микрофотографии участка пузыря одного кролика из каждой из ложных и лечебных групп.

Примечания: группы управления (A), фиктивные (B), митомицин-C (C) и инфликсимаб (D). Стрелки указывают фибробласты, а стрелки указывают на мононуклеарные клетки. (B) показывает многочисленные фибробласты и мононуклеарные клетки. (C и D) показывают значительное уменьшение числа фибробластов и мононуклеарных клеток. Трихрома Массона использовали для окрашивания. Оригинальное увеличение × 400.

Иммуногистохимические микрофотографии, показывающие интенсивности трансформации фактора роста-β-иммуноокрашивания одного кролика из каждой из ложных и лечебных групп.

Примечания: группы управления (A), фиктивные (B), митомицин-C (C) и инфликсимаб (D). Плотное окрашивание можно увидеть в (B). (C и D) показывают снижение трансформирующего фактора роста-β-иммуноокрашивания.

Иммуногистохимические микрофотографии, показывающие интенсивность иммуноокрашивания фибробластов-β-иммунитета одного кролика от каждой из фиктивных и лечебных групп.

Примечания: группы управления (A), фиктивные (B), митомицин-C (C) и инфликсимаб (D). Плотное окрашивание можно увидеть в (B). (C и D) показывают снижение иммунного окрашивания фибробластов-β.

Иммуногистохимические микрофотографии, показывающие интенсивности тромбоцитарного фактора роста, иммуноокрашивающего одного кролика от каждой из фиктивных и лечебных групп.

Примечания: группы управления (A), фиктивные (B), митомицин-C (C) и инфликсимаб (D). Плотное окрашивание можно увидеть в (B). (C и D) показывают снижение иммуноокрашивания фактора роста, полученного из тромбоцитов.

Числа МНК и фибробластов в исследовательских группах

Заметки:

Контрольная группа по сравнению с фиктивной группой (P <0,01);

групп лечения по сравнению с фиктивной группой (P <0,01).

Сокращения: MMC, митомицин-C; МНК, мононуклеарные клетки; SD, стандартное отклонение.

TGF-β, FGF-β и PDGF-иммуноокрашивание в исследуемых группах

Заметки:

Контрольная группа по сравнению с фиктивной группой (P <0,01);

групп лечения по сравнению с фиктивной группой (P <0,01).

Сокращения: FGF-β, фактор роста фибробластов бета; PDGF, фактор роста тромбоцитов; SD, стандартное отклонение; TGF-β, трансформирующий фактор роста бета; MMC, митомицин-C.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *