Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Вирусные антитела к вирусу гриппа A (H5N2) у людей после контакта с зараженной домашней птицей, Тайвань, 2012 г.

Influenza A(H5N2) Virus Antibodies in Humans after Contact with Infected Poultry, Taiwan, 2012
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4012807/

Шесть человек на Тайване, которые контактировали с птицей, инфицированной гриппом A (H5N2), показали сероконверсию для вируса путем ингибирования гемагглютинином или тестирования микронейтрализации. Мы разработали ELISA на основе неструктурного белка 1 вируса для дифференциации естественной инфекции от перекрестной реактивности после вакцинации; Этим испытанием также показали сероконверсию.

С 1959 года высокопатогенные подтипы H5 и H7 птичьего гриппа A (HPAI) вызвали вспышки у домашней птицы, что привело к высокой смертности, а также вызвало спорадические инфекции у людей (1-3). Некоторые вирусы птичьего гриппа с низкой патогенностью (LPAI) могут мутировать, чтобы стать вирусом HPAI, приобретя основные аминокислотные остатки в участке расщепления гемагглютинина (НА) после нескольких проходов у кур (4). На Тайване птица, зараженная вирусом LPAI (H5N2), сообщалась в течение 2003-2004 и 2008-2011 годов (5-7), тогда как вирусы HPAI (H5N2) были впервые выделены в 2012 году и вызвали последующие вспышки у домашней птицы. Хотя в аминокислотах в HA-белке обнаружены> 20 различий между вирусами HPAI (H5N2) 2012 и вирусом LPAI (H5N2) 2003 года (A / chicken / Taiwan / 1209/2003), эти вирусы антигенно похожи (M. -C. Cheng, unub.) И связанных с теми, которые были распространены в Мексике в 1994 году, но не связаны с вирусами подтипа H5N1, которые появились в 2003 году, и штаммом вакцины подтипа H5N1 (A / Vietnam / 1194/2004) (5).

По состоянию на 23 декабря 2013 года вирус гриппа A (H5N2) не был изолирован от людей, но в предыдущих исследованиях были получены серологические данные для субклинических инфекций у лиц, которые имели частые контакты с инфицированными животными (3,8-11). Поэтому мы исследовали возможность заражения людей, которые были инфицированы вирусом HPAI (H5N2) во время вспышек в птицефабриках на Тайване в январе-марте 2012 года.

Для нашего исследования мы зарегистрировали 141 человека, который имел тесный контакт с домашней птицей на 5 птицефабриках, в которых вспышки гриппа A (H5N2) у цыплят в январе-марте 2012 года. Этими контактами были 15 сельскохозяйственных рабочих, 90 должностных лиц, занимающихся вопросами здоровья животных, и 36 временных сотрудников которые участвовали в отбраковке зараженных цыплят; у этих людей не наблюдалось никаких симптомов гриппоподобного заболевания в течение 1 недели после отбраковки. Все 15 работников птицеводства работали на своих птицефабриках в течение> 6 лет, и большинство официальных лиц, занимающихся охраной здоровья животных, имели опыт штамповки зараженной домашней птицы. Однако для 36 временных сотрудников предыдущие истории контактов с инфицированными цыплятами были неизвестны.

В течение 7 дней с момента начала заражения вирусом были собраны образцы мазков горла из всех контактов для обнаружения вируса, а парные образцы сыворотки были собраны на 21 день для серологического тестирования. Полные методы тестирования описаны в Техническом приложении. Участникам была предложена инактивированная вакцина против гриппа A (H5N1) на добровольной основе в день сбора первых образцов сыворотки, а истории вакцинации в течение 1 года до даты сбора образцов регистрировались с помощью устных вопросников. В общей сложности 102 (72,3%) из 141 участников были вакцинированы: 22 (15,6%) получили только грипп А (H5N1); 39 (27,7%) получили только сезонные вакцины против гриппа; 41 (29,0%) получили обе вакцины; и 39 (27,7%) не получили ни одного (Таблица 1).

* Значения нет. лиц или нет. (%) лиц. Образцы сыворотки с титрами ингибирования гемагглютинации (HI)> 80 прошли микронейтрализацию. Критерии определения сероконверсии в HI-антителах в отношении вирусов гриппа A (H5N2): 1)> 4-кратное увеличение титров антител в парных образцах сыворотки; и 2) HI титр> 80 для второго образца.

Мы обнаружили, что все образцы мазка были отрицательными для вирусов гриппа с помощью ПЦР обратной транскрипции в реальном времени. Однако результаты испытаний на ингибирование гемагглютинации (HI) и / или микронейтрализации (MN) показали, что у 7 человек были титры антител> 80 для вируса подтипа H5N2; 6 из этих людей показали сероконверсию вируса (табл. 2). Повышенные антитела против вирусов подтипа H3N2 или H5N1 были обнаружены у некоторых из 6 человек, которые показали сероконверсию (таблица 2), что свидетельствует о том, что положительные результаты для подтипа H5N2 могут быть результатом перекрестных реактивных антител от предыдущих прививок или инфекций гриппа. Все 6 человек, которые показали сероконверсию вируса гриппа A (H5N2), получили прививки от гриппа A (H5N1) и сезонного гриппа (таблица 2). Кроме того, лица, получившие обе вакцинации против гриппа, показали значительное (p = 0,001) геометрическое среднее увеличение титра в HI-антителе против вируса гриппа A (H5N2) во вторых образцах, тогда как те, кто не получал обеих прививок, не показали подобного увеличения. Это открытие указывает на то, что эти гетерологичные вакцинации могут влиять на титры антител HI против вируса гриппа A (H5N2).

* Конт., Контакт; HI, ингибирование гемагглютинации; MN, микронейтрализация; NS1, неструктурный белок 1; H1N1pdm09, пандемический грипп A (H1N1); NA, не применимо (не было вакцинации); темп., временный. Жирный слой указывает на> 4-кратное повышение титра антител с помощью тестов HI или MN и положительного ответа против NS1-антитела на тест NS1-ELISA между первым и вторым образцами парных образцов сыворотки. Положительный ответ анти-NS1-антитела методом NS1-ELISA определяли как каждый образец парной сыворотки, имеющий пробную абсорбцию второго образца на 30% выше, чем у его первого образца (отношение> 1,30).

Чтобы исследовать, были ли повышенные антитела к гриппу A (H5N2) в результате воздействия этого вируса или из-за вакцинации гетерологичными вирусами гриппа, мы определили уровни антител к неструктурному белку гриппа A (H5N2) 1 (NS1) (12-15) , Белок NS1 не легко включается в вирионы, используемые для производства инактивированной противогриппозной вакцины, поэтому ответ на белок NS1 указывает на активную инфекцию гриппа A (H5N2). Паровые образцы сыворотки анализировали с помощью пластин ELISA, покрытых 2 пептидами, NS136-48 (LRRDQKSLRGRGS, NS1-pA) и NS1204-225 (RSSNENGGPPLTPKQKREMART, NS1-pB), синтезированных на основе белковых последовательностей NS1 вируса гриппа A (H5N2) вирус (NS1-pA, A / chicken / Taiwan / 1209/2003) и вирус гриппа A (H3N2) (NS1-pB, A / Тайвань / 4055/2009), соответственно. NS1-pA штамма вспышки гриппа A (H5N2) 2012 года имеет замену S48N, которая не обнаружена в штамме 2003 года.

Для контролей мы одновременно проанализировали 3 группы парных образцов сыворотки с сероконверсией (данные не показаны): 1) образцы из 7 хорьков, инфицированных различными штаммами вируса гриппа (H1N1, n = 3; H3N2, n = 1; H5N1 [A / Vietnam / 1194/2004], n = 1 и A [H1N1] pdm09, n = 2); 2) образцы из 8 человек, инфицированных вирусом гриппа A (H1N1) pdm09; и 3) образцы от 9 человек, которые получили прививки против вируса гриппа A (H5N1). Полученные ответы на антитела NS1 были нанесены на график (рисунок). Пять (71,4%) из 7 хорьков показали положительный ответ NS1 на NS1-pA и все против NS1-pB (рис., Панель A), что указывает на то, что инфекция вируса гриппа может вызвать измеримый ответ против NS1 после заражения вирусом. Для инфицированных вирусом гриппа лиц 3 (37,5%) из 8 показали ответы против NS1-pA и NS1-pB (рисунок, панель B), но для вакцинированных лиц 1 (11,1%) из 9 показали ответы против NS1-pA и нет против NS1-pB (рисунок, панель C). Эти закономерности показывают, что реакция против NS1, вызванная естественной инфекцией, сильнее, чем реакция, вызванная вакцинацией.

Ответы антител на 2 пептида неструктурного белка 1 (NS1) гриппа A (H5N2) для парных образцов сыворотки из: A) инфицированных вирусом гриппа хорьков; B) инфицированные вирусом гриппа лица; C) лица, инфицированные вирусом гриппа; D) лица на Тайване, которые контактировали с инфицированной домашней птицей в течение января-марта 2012 года, и которые показали сероконверсию при воздействии вируса гриппа A (H5N2); и E) лица на Тайване, которые контактировали с зараженной домашней птицей в течение января-марта 2012 года и не показали сероконверсии. Ответы для каждой группы были нанесены путем умножения на второй образец на NS1-pA (круги) и NS1-pB (треугольники); числа и проценты положительных ответов для каждого набора образцов указаны выше каждого графика. Пунктирные линии указывают значение отсечки для определения положительного ответа: результаты для второго образца в каждой паре на 30% выше, чем для первого образца.

Для группы из 7 контактов мы идентифицировали, у кого были повышенные антитела к вирусу гриппа A (H5N2), 2 (контакты 1 и 3) имели положительный ответ на NS1-антитело против обоих пептидов; остальные 5 не были (рис., панель D). Эти результаты свидетельствуют о том, что контакт 1, работник домашней птицы и контакт 3, сотрудник службы здоровья животных, возможно, испытывали недавние инфекции гриппа.

Чтобы лучше установить обоснованность использования NS1 для выявления инфицированных от вакцинированных лиц, мы проанализировали парные образцы сыворотки для 134 человек, которые не показали сероконверсии вируса гриппа A (H5N2). Из них 5 (3,7%) показали положительный ответ на NS1-антитело против NS1-pA и 12 (9,0%) против NS1-pB (рисунок, панель E). Этот результат предполагает, что NS1-ELISA не следует использовать отдельно для определения инфекции гриппа, но может предоставить дополнительные данные для проверки результатов серологических анализов на основе белка.

В этом исследовании мы опросили 141 человека, инфицированных птицей, зараженной вирусом гриппа A (H5N2), для оценки пролиферации вируса и использовали множественные серологические анализы (включая новый NSIS ELISA) для определения статуса сероконверсии. Мы обнаружили, что у 6 (4,3%) людей были повышенные антитела к HA, обнаруженные с помощью анализов HI и / или MN; более низкий процент (1,4%, 2/141) субклинических инфекций был заподозрен после проверки с помощью анализа антител NS1. NS1-пептид B был разработан на основе вируса гриппа A (H3N2); однако он также реагирует с антителами, вызванными вирусами разных подтипов, что предполагает, что консенсусные остатки могут играть существенную роль в формировании эпитопа белка NS1.

Наше исследование имеет ограничения. Истории пациентов об инфицировании вирусами птичьего гриппа и вакцинации против гриппа были даны перорально и, следовательно, могут быть неточными, и может произойти несоответствие между циркулирующими вирусами и антигенами, используемыми в исследовании. Кроме того, недавняя сезонная инфекция гриппа может мешать определению субклинической инфекции вирусом гриппа A (H5N2), поскольку белок NS1 замечательно сохраняется в вирусах гриппа типа A.

Кросс-реактивные антитела у людей, вызванные гетерологичными вирусами гриппа, могут осложнить серологическую идентификацию подтипа гриппа на основе HA. Метод NS1-ELISA, который мы описываем, может помочь легче определить тип и улучшить диагностику субклинической инфекции у людей. Кроме того, наши данные показывают, что профессиональное заражение зараженной домашней птицы может представлять опасность для людей.

Расширенные материалы и методы исследования сероконверсии антител к вирусу гриппа A (H5N2) у людей после контакта с инфицированной домашней птицей, Тайвань, 2012 г.

Предлагаемая цитата для этой статьи: Wu H-S, Yang J-R, Liu M-T, Yang C-H, Cheng M-C, Chang F-Y. Антитела вируса гриппа A (H5N2) у людей после контакта с инфицированной домашней птицей, Тайвань, 2012 г. Emerg Infect Dis [Интернет]. 2014 май [дата указана]. http://dx.doi.org/10.3201/eid2005.131393

Мы благодарим Рубена Дониса и Масато Таширо за их ценные предложения и критическую оценку рукописи и многих медицинских сотрудников и коллег из региональных центров Тайваньского CDC, которые участвовали в сборе проб и проведении расследований на месте.

Это исследование получило частичную финансовую поддержку от Департамента здравоохранения, Тайвань (DOH101-DC-2013).

Доктор Ву является директором Тайваньского национального центра по гриппу и Центра исследований, диагностики и разработки вакцин на Тайваньском CDC. Его исследовательские интересы — вирусы гриппа и энтеровирусы.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *