Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Хирургия, связанная с тромбозом, критически влияет на объем инфаркта головного мозга у мышей после переходной окклюзии центральной мозговой артерии

Surgery-Related Thrombosis Critically Affects the Brain Infarct Volume in Mice Following Transient Middle Cerebral Artery Occlusion
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3782513/

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Задуманные и разработанные эксперименты: GYY YTW XJL. Выполнили эксперименты: XJL. Проанализированы данные: PM JXW YJG FLY. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: YHT XSH. Написал рукопись: XJL PM.

Модель временной окклюзии средней мозговой артерии (tMCAO) широко используется для имитации человеческого ишемического инсульта с целью изучения ишемии / реперфузионной черепно-мозговой травмы у грызунов. В модели tMCAO технология внутрипросветного шва широко используется для достижения ишемии и реперфузии. Однако изменение объема инфаркта в этой модели часто требует большого размера выборки, что препятствует прогрессу доклинических исследований. Наше предыдущее исследование показало, что объем инфаркта был связан с успехом реперфузии, хотя причина оставалась неясной. Цель настоящего исследования — изучить взаимосвязь между формированием фокального тромба и воспроизводимостью модели по отношению к объему инфаркта. Мы выдвигаем гипотезу, что тромбоз, вызванный швом, вызывает изменчивость объема инфаркта из-за недостаточной реперфузии после выхода шва. Семьдесят два взрослых самца CD-1 мыши прошли 90 минут tMCAO с внутрибрюшинным введением гепарина или без него. Динамическая синхронизация синхротронного излучения (SRA) и контрастная визуализация лазерного пятна (LSCI) выполнялись до и после tMCAO для наблюдения за морфологией сосудов головного мозга и для измерения церебрального кровотока in vivo. Инфарктный объем и неврологический балл были исследованы для оценки тяжести ишемического повреждения головного мозга. Мы обнаружили, что частота успешной реперфузии была значительно выше у мышей, обработанных гепарином, по сравнению с мышами без гепарина по результатам SRA и LSCI через 1 и 3 часа после отмены шва (p <0,05). Патологические особенности и SRA показали, что тромб, образовавшийся во внутренней сонной артерии, средней мозговой артерии или передней мозговой артерии, блокировал реперфузию после tMCAO. LSCI показал, что кортикальная коллатеральная циркуляция может быть нарушена тромбами. Наши результаты показали, что шовный тромбоз является критическим элементом, который влияет на успех реперфузии. Соответствующее управление гепарином обеспечивает полезный подход для улучшения воспроизводимости модели реперфузии у мышей.

Воспроизводимая модель мозговой ишемии / реперфузии имеет решающее значение для развития ишемической терапии у грызунов. Ранняя реперфузия является непременным условием для восстановления ишемической ткани и выживаемости животных. Однако внезапная гиперперфузия тканей после ишемии является вредной, что приводит к ускоренному и дополнительному повреждению ткани, что называется «реперфузионным повреждением» [1-4]. Важно разработать воспроизводимую модель церебральной ишемии / реперфузии у грызунов для лучшего изучения механизмов ишемического инсульта и разработки возможных методов лечения. Постшемическая реперфузия часто возникает при ишемическом инсульте человека, когда окклюзия вызывается эмболией. Чтобы подражать этой клинической ситуации, у крыс и мышей была развита модель проксимальной интервенции средней мозговой артерии (tMCAO) для внутрипросветных швов [5,6]. Эта модель tMCAO, широко принятая для реперфузионного исследования, позволяет реперфузию после выхода шва.

Несмотря на преимущества шовной модели tMCAO, воспроизводимость этой модели остается неудовлетворительной. Существует несколько осложнений, связанных с этой моделью, включая неадекватную окклюзию MCA [7,8], субарахноидальное кровоизлияние (SAH) [8,9] и высокую вариацию задних коммуникационных артерий (PcomAs) [10,11]. Кроме того, диаметр покрытого кремнием шовного материала должен быть немного больше, чем внутренний диаметр сосуда, чтобы предотвратить протекание шовного материала [7,8]. Вставка шва или удаление из ICA может вызвать возмущение эндотелиальных клеток и разрушение стенки сосуда, что также влияет на воспроизводимость модели MCAO шовного материала [9,12,13].

Открытие коллатеральной артерии после ишемического инсульта может ослаблять повреждение и смерть нейронов как в клинических, так и в доклинических исследованиях [14]. Шовная модель MCAO широко использовалась для изучения изменений залогового оборота. Ван и др. Обнаружили, что некоторые коллатеральные артерии могут открываться в течение 90-150 минут после постоянного MCAO, и некоторые побочные артерии могут постоянно открываться в ответ на ишемию [15]. Однако, как долго будет происходить коллатеральная циркуляция, открытая после реперфузии, и насколько неудачная реперфузия влияет на открытие побочного кровообращения, в значительной степени неизвестна.

Микроангиография с синхротронным излучением (SRA) обеспечивает уникальный инструмент для мониторинга гемодинамических изменений и микрососудистой морфологии [16]. Недавние события в SRA показали, что он может быть использован для высокоразрешающей визуализации церебральной сосудистой сети [11,17,18]. Контрастное изображение с лазерной спекл-линкой (LSCI) использовалось для контроля кровотока и кортикальных коллатеральных артерий после ишемического инсульта [15,19]. В этом исследовании мы используем эти уникальные методы визуализации с высоким разрешением для исследования того, вызывает ли вложение швов образование тромбов, влияет на успех реперфузии и коллатерального кровообращения в период реперфузии в модели tMCAO.

Хирургические процедуры и экспериментальные протоколы животных были рассмотрены и одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных (IACUC) и Комитетом по биоэтике Школы биомедицинской инженерии, Шанхайским университетом Цзяотун, Шанхай, Китай. Семьдесят два взрослых самца CD-1 мыши весом 30-35 граммов (Sippr-BK, Shanghai, China) были использованы в исследовании. Мышей случайным образом разделяли на группу, обработанную гепарином, и группу, обработанную физиологическим раствором. Хирургическая процедура tMCAO была описана ранее [20]. Вкратце, мышей анестезировали с помощью кетамина (100 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг) внутрибрюшинно. Мыши помещали на спираль на греющей подушке (RWD Life Science, Shenzhen, China), которая поддерживает температуру тела при 37,0 ± 0,5 ° C. Были выделены левая общая сонная артерия (CCA), внешняя сонная артерия (ECA) и внутренняя сонная артерия (ICA). Штук 6-0 (Dermalon, 1741-11, Covidien, OH), покрытый силиконом, вводили в культуру ECA и продвигались от ICA до открытия MCA до тех пор, пока не ощущалось небольшое сопротивление. В этот момент кончик шва находился в передней мозговой артерии (ACA). Все процедуры выполнялись под операционным микроскопом (Leica, Wetzlar, Germany). Успех окклюзии был охарактеризован как уменьшение мозгового кровотока (CBF) до 10% от исходного уровня [11,21], что было подтверждено лазерной доплеровской флоуметрией (Moor Instruments, Девон, Англия). Мышам вводили 0,1 мл (200 ед. / Мл) гепарина или физиологический раствор внутрибрюшинно через 80 минут после окклюзии. Шов был удален через 10 минут после инъекции гепарина.

SRA проводили на линии луча рентгеновского изображения BL13W в Шанхае в синхротронной радиационной установке (SSRF). Параметры изображения SRA были описаны ранее [11]. Рентген (33,2 кэВ) для изображения имеет длину поперечной когерентности около 31 мкм и поле зрения до 45 мм (высота) × 4,5 мм (ширина). Для записи последовательностей изображений во время эксперимента использовалась рентгеновская ПЗС-камера PCO (размер пикселя 13 мкм × 13 мкм, PCO-TECH Inc., Германия).

Мышей помещали вертикально по пути луча. Контрастный агент Ipamiro (80 мкл, 175 мг / мл, Ipamiro, Шанхай, Китай) вводили в CCA со скоростью 33,3 мкл / секунду. Динамические изображения были получены со скоростью 7 изображений в секунду. Исходные изображения, сделанные до инъекции контрастного агента, использовались для коррекции плоских полей исходных изображений, полученных после инъекции контрастного агента программным обеспечением MatLab (Mathworks Ltd., Natick, Mass). Каждый слой изображения был, наконец, сшит вместе, чтобы создать полномасштабное ангиографическое изображение с помощью программного обеспечения Photoshop (Adobe, San Jose, CA).

Для изучения субкортикальной сосудистой морфологии и Цирка Уиллиса мышей отображали с использованием SRA до MCAO и через 20 минут после MCAO и через 0, 1 или 3 часа после выхода шва.

LSCI был выполнен с использованием системы лазерной контрастной визуализации с высоким разрешением (система LSCI-2, Dolphin BioTech Ltd., Шанхай, Китай). Процедура визуализации была описана ранее [22]. После обезболивания животного на кожу головы был сделан срединный разрез, и перикраний был удален, чтобы обнажить поверхность черепа. Необработанные изображения спекл (696 × 512 пикселей, 40 мкм / пиксель) были получены при 23 кадрах в секунду (время экспозиции T = 5 мс) при лазерной подсветке 780 нм. В каждом испытании было записано 200 последовательных кадров спекл-изображений. Обработка изображений выполнялась автономно с использованием программного обеспечения MatLab. Чтобы уменьшить шум, мы сначала выровняли исходные изображения LSCI с помощью зарегистрированного метода анализа контрастности лазерного пятна (rLASCA) [23]. Затем зарегистрированные спектральные изображения обрабатывались методом оценки случайных процессов [22] для получения контрастного изображения с улучшенным отношением сигнал / шум (SNR). Относительная скорость кровотока v рассчитывалась по значениям контраста в соответствии с теорией LSCI [24]. Наконец, нормализованное изображение кровотока было получено с использованием формулы 1.

V¯ = VVmax × 100%. 1

v — относительная скорость кровотока, vmax — максимальное значение в изображении относительной скорости кровотока, V¯ — нормализованная скорость кровотока.

Мышей отображали с использованием LSCI для обнаружения коллатеральной циркуляции до и через 10, 30 минут после введения шва и через 10, 60 и 120 минут после удаления шва как у обработанных гепарином, так и без гепарина. SRA и LSCI выполняли на отдельных мышах.

После измерения LSCI и SRA мышей анестезировали, затем перфузировали нормальным физиологическим раствором, а затем транскриптальдегидом с 4% параформальдегидом. Мозг удаляли и погружали в 4% параформальдегида в течение еще 24 часов. Фотографии всего мозга были сделаны с помощью микроскопа (Leica, Wetzlar, Germany) для визуального изучения существования тромба в мозговых артериях. Затем мозг обезвоживался через градуированную спиртовую систему, а затем вводили в парафин для патологического исследования. Парафиновые секции были подготовлены для дальнейшего гистологического окрашивания. Схема раздела показана на рисунке 1B, как описано ранее [25]. Окрашивание гематоксилин-эозина (HE) использовалось для обнаружения существования тромба.

(A) Стереомикроскопическая визуализация головного мозга проводилась через 1 — 3 часа после реперфузии. В цирке Уиллиса не было обнаружено свертывания крови у успешно перевернутых мышей (a, c), в то время как свертывание крови было четко обнаружено на территории MCA, ACA и ICA у мышей без гепарина с неудачной реперфузией (b, d). Стрелки указывают тромб в MCA, ACA и ICA. (B) Принципиальная схема парафинового участка с указанием местоположения ACA, MCA и ICA. (C) О-окрашивание показывает поперечные сечения ICA (a), MCA (b) и ACA (c) у успешно перевернутых мышей без тромба в просвете после реперфузии. Напротив, поперечные сечения ICA (d), MCA (e) и ACA (f) у мышей с неудачной реперфузией имеют смешанный тромб в просвете после удаления шва. Бар = 100 мкм. ACA: передняя мозговая артерия, ICA: внутренняя сонная артерия, MCA: средняя мозговая артерия.

После 24 часов tMCAO неврологическая оценка была проверена слепо. Неврологический балл оценивался по шкале от 0 до 14 (нормальный показатель 0, максимальный показатель дефицита 14) [26]. Один балл был назначен на неспособность выполнить тест или отсутствие протестированного рефлекса.

Мышей умерщвляли после передозировки инъекции кетамина после обследования неврологического показателя. Мозги удаляли и разрезали на 2 мм поперечные сечения с использованием мышиной матрицы мозга (RWD Life Science, Шэньчжэнь, Китай). Сегменты головного мозга инкубировали в 2% -ном растворе ТТК (Sigma, Santa Clara, CA) при 37 ° C в течение 20 минут. Мозговые срезы были сфотографированы, а объем инфаркта был рассчитан путем суммирования контралатерального полушария за вычетом нормальной площади толщины ипсилатерального полушария, как описано ранее [6].

Данные были представлены как среднее ± SD. Объем инфаркта между группами сравнивался с непарным t-критерием Стьюдента. Скорость успешной реперфузии сравнивали по критерию хи-квадрат. Значение вероятности менее 5% считалось статистически значимым.

Наблюдалась четкая морфология мозговых сосудов, включая ACA, MCA, заднюю мозговую артерию (PCA), птеригопалатинную артерию (PPA) и ICA в мозге мыши до tMCAO с MCA и ACA без перфузии после MCAO (рисунок 2A). MCA и ACA были обнаружены у обработанных гепарином мышей в течение 60 минут после реперфузии (рис. 2А, D). Напротив, MCA и ACA не могли быть обнаружены у мышей без гепарина после реперфузии.

(A) Морфология мозговых сосудов, отображаемая SRA. (а) морфологию головного мозга была получена до окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) у взрослых мышей. CCA, ICA, PPA, PCA, MCA и ACA, а также их ветви могут быть четко определены. (b) SRA после того, как MCAO показало, что CCA, ICA, PPA и PCA могут быть обнаружены, в то время как MCA отсутствует, что указывает на то, что MCA был закрыт. (c) SRA проводили через 1 час после реперфузии у обработанных гепарином мышей, которые показали, что CCA, ICA, PPA, PCA и MCA были хорошо заполнены контрастным средством Ipamiro. (d) SRA проводили через 1 час после реперфузии у мышей без гепарина, которые показали, что CCA, ICA, PPA и PCA могут быть обнаружены, в то время как MCA все еще не обнаруживается. (B) CBF измеряли LSCI. (a) LSCI регистрировали у нормальных мышей, показывающих, что CBF ипсилатерального полушария является нормальным, аналогичным таковому контралатерального. (b) LSCI был зарегистрирован после того, как MCAO показало, что CBF ипсилатерального полушария уменьшился до 10% от базовой линии. (c) LSCI регистрировали через 1 час после реперфузии у обработанных гепарином мышей, показывая, что CBF восстанавливается до исходного уровня. (d) LSCI регистрировали через 1 час после реперфузии у мышей без гепарина, показывая, что CBF все еще остается низким. Стрелки показывают, что MCA хорошо заполнен кровью. Arrowheads указывают местоположение MCA, которое не было обнаружено. Broken Circle обозначил территорию MCA в коре ипсилатерального полушария. Бар = 1 мм. Цветная полоса: нормализованная относительная скорость CBF (0% ~ 100%). ACA: передняя церебральная артерия, CBF: мозговой кровоток, CCA: общая сонная артерия, ICA: внутренняя сонная артерия, LSCI: контрастная визуализация лазерного пятна, PCA: задняя церебральная артерия, PPA: крыловидная артерия, SRA: микроангиография синхротронного излучения.

Чтобы исследовать побочное кровоснабжение, мы измерили CBF с использованием LSCI после tMCAO. Нормальный CBF наблюдался в обоих полушариях мозга до MCAO, тогда как CBF на территории ипсилатеральной MCA быстро уменьшался после MCAO (рисунок 2B). Было отмечено, что CBF на ипсилатеральной территории MCA был еще ниже через 60 минут после реперфузии, чем в точке окклюзии у мышей без гепарина, тогда как CBF был выделен через 60 минут после реперфузии у обработанных гепарином мышей (фиг. 2B).

Мы проводили окрашивание HE для обнаружения образования тромбов в ACA, MCA или ICA после реперфузии. Мы продемонстрировали, что тромбоз наблюдался на нескольких участках у мышей с неудачной реперфузией в группе, свободной от гепарина, тогда как у обработанных гепарином мышей не наблюдалось тромбов (рис. 1А). Различные степени смешанного тромба наблюдались в ICA, MCA и ACA в группе, свободной от гепарина (рис. 1C). Вазоспазм не наблюдался во время процедуры SRA или в результатах гистологии, что свидетельствует о том, что неудачная реперфузия была в основном из-за тромбоза, но не переходных элементов, таких как индуцированный контрастом агент вазоспазма.

Результаты SRA и LSCI также продемонстрировали, что у 13 мышей не было реперфузии в группе без гепарина после 0, 1 или 3 часов реперфузии (рисунок 3). MCA у двух без гепарин мышей частично закупоривали сразу после реперфузии. Напротив, успешная реперфузия была обнаружена у обработанных гепарином мышей одновременно с реперфузией. Этот результат показал, что образование тромбов, индуцированное швом, может быть критическим элементом, ведущим к неудачной реперфузии после tMCAO.

SRA после 90 минут MCAO и 0 (a), 1 (b) и 3 часа (c) после реперфузии у обработанных гепарином мышей показывает, что CCA, ICA, PPA, PCA, MCA и ACA могут быть четко обнаружены. Напротив, SRA после 90 минут MCAO и в 0 (d), 1 (e) и 3 часа (f) после удаления шва у мышей без гепарина показывает, что CCA, ICA, PPA и PCA могут быть четко обнаружены, MCA и ACA могут быть частично обнаружены (d) или необнаружены (e, f). Стрелки показывают, что MCA хорошо заполнен контрастным агентом Ipamiro. Черные стрелки указывают местоположение MCA, которое невозможно обнаружить. Белая стрелка указывает местоположение MCA, которое было частично обнаружено. Бар = 1 мм. ACA: передняя мозговая артерия, CCA: общая сонная артерия, ICA: внутренняя сонная артерия, MCAO: окклюзия средней церебральной артерии, PPA: артерия крыловидной артерии, PCA: задняя мозговая артерия, SRA: микроангиография синхротронного излучения.

Эксперименты SRA и LSCI показали, что успешность реперфузии составляла от 50% до 75% в течение 3 часов после реперфузии у мышей без гепарина (таблица 1). Напротив, показатель успешности реперфузии составлял 100% в каждый момент времени реперфузии у обработанных гепарином мышей. Успех реперфузии был значительно различен между обработанными гепарином и без гепарином мышами через 1 или 3 часа после реперфузии (р <0,05). Не было существенной разницы в измерении CBF между двумя группами сразу после реперфузии (p> 0,05), что свидетельствует о постепенном росте тромба с течением времени.

p <0,05, что представляет собой значительную разницу между группой, обработанной гепарином, и группой, не содержащей гепарин.

LSCI использовался для наблюдения за временем открытия залоговых артерий после MCAO и после выхода шва. LSCI показала, что залоговые артерии открываются после MCAO (рисунок 4). Закрепляющие артерии больше не наблюдались после 10 минут успешной реперфузии (рис. 4B). Некоторые коллатеральные артерии все еще открываются у мышей без гепарина после удаления шва из-за неудачной реперфузии (рис. 4C). Было отмечено, что коллатеральная циркуляция снова открылась после 120 минут реперфузии как у мышей с успешной и неудачной реперфузией (рис. 4).

Кортикальная коллатеральная циркуляция открывалась после tMCAO у успешно реперфузированных без гепарин мышей (A) и обработанных гепарином мышей (B). LSCI до MCAO (a-b) показал явную корковую морфологию сосудов. Обеспеченные артерии открываются через 10 (c) и 30 минут (d) после реперфузии. Зачатки артерий отсутствовали при 10 (e) и 60 минут (f) после реперфузии. Примечательно, что залоговые артерии открывались снова через 120 минут после реперфузии (г). (C) Побочное кровообращение после tMCAO у мышей без гепарина с неудачной реперфузией. LSCI до MCAO (a-b) показал явную корковую морфологию сосудов. Залоговые артерии открываются через 10 (c) и 30 минут (d) после снятия шва. Закрепляющие артерии все еще были открыты при 10 (e), 60 (f) и 120 минут (г) после удаления шва. «Сломанный круг» указывает выбранные области изображений b-g. Стрелки указывают на залоговую артерию. Бар = 1 мм. A: передний, L: левый, LSCI: контрастное изображение лазерной спекл, tMCAO: переходная окклюзия средней мозговой артерии.

TTC-окрашивание и измерение объема инфаркта показали, что объем инфаркта был значительно выше у мышей без гепарина с неудачной реперфузией, чем у успешно перевернутых без гепарин мышей и обработанных гепарином мышей (рис. 5, р <0,01). Не было существенной разницы в объеме инфаркта между успешно реперфузированными без гепарина или обработанными гепарином мышами (p> 0,05). Было отмечено, что объем инфаркта был менее переменным у обработанных гепарином мышей, чем у мышей без гепарина.

(A) окрашивание TTC показало интервал инфаркта через 24 часа после реперфузии у успешно перевернутых мышей (a) и мышей с неудачной реперфузией (b). (B) Количественные данные об объеме инфаркта у мышей, обработанных гепарином, без гепарин-мышей с неудачной реперфузией и успешно перевернутых без гепарин мышей, что указывает на то, что объем инфаркта у без гепарина мышей с неудачной реперфузией (n = 4) был значительно больше, чем лечение гепарином (n = 6), и успешно реперфузированные без гепарина мыши (n = 4). Данные были средними ± SD, *** p <0,001, Bar = 2 мм.

Неврологический балл был значительно выше у мышей без гепарина с неудачной реперфузией, чем у успешно перевернутых без гепарин мышей и обработанных гепарином мышей (рис. 6, р <0,01). Не было существенной разницы в неврологическом показателе между успешно перепрофилированными гепарином или обработанными гепарином мышами. Инъекция гепарина не уменьшала неврологический показатель, но улучшала воспроизводимость неврологических показателей после tMCAO.

Количественные данные показали, что неврологическая оценка у мышей без гепарина с неудачной реперфузией (n = 4) была значительно выше, чем лечение гепарином (n = 6), и успешно перевернутые без гепарина мыши (n = 4). Данные были средними ± SD, *** p <0,001.

Внутрипросветный шов, индуцированный tMCAO модель широко используется в фокальных мозговых ишемических исследований. Однако по-прежнему существуют несколько связанных с моделью осложнений: 1) вставка нити может привести к неадекватному MCAO, который был связан с формой и диаметром шовного материала [7,8]; 2) SAH может возникнуть и осложнить патофизиологическую значимость модели [8,9]; 3) высокая смертность и вариабельность объема инфаркта могут возникать в связи с высокой вариацией PcomAs [10,11]; и 4) гипертермия во время и после ишемии может усложнить интерпретацию результатов [12,27].

Наши результаты показали, что образование тромбов может влиять на объем инфаркта и нейроповеденческие исходы, что влияет на воспроизводимость модели MCAO временного шва на грызунах. Все смешанные тромбы, обнаруженные в этом исследовании, были красным тромбом, что можно объяснить возмущениями эндотелиальных клеток во время операции, начатой ​​с введения шва до его выхода из ICA [9,12,13]. В этом исследовании мы представили прямое доказательство того, что реперфузия не удалась после удаления шва у некоторых без гепарин мышей, что было подтверждено как окклюзия тромба окрашиванием SRA и HE. Мы также обнаружили, что Цирк Уиллис можно частично закупорить у мышей без гепарина, что повлияло на воспроизводимость модели. Вазоспазм не наблюдался при динамической визуализации и гистологическом окрашивании, предположил, что неудачная реперфузия была вызвана главным образом новообразованным тромбом. Мы обнаружили, что форма MCA, ACA и ICA была изменена после образования тромбов, но не у успешно перевернутых мышей. Это может быть связано с неравномерным дегидратацией тромбов во время подготовки парафина.

Кавамура и др. Сообщали, что тромб, образованный в ICA, только тогда, когда MCA и PPA были постоянно закрыты. Они предположили, что образование тромбов не происходит, когда PPA хранится в патенте [28]. Однако мы обнаружили, что тромб произошел, даже когда PPA не лигировали. Этот результат предполагал, что образование тромба не ограничивалось ситуациями, связанными с лигированием PPA.

Ишемическая коллатеральная циркуляция может поддерживать выживание мозговой ткани в течение нескольких часов после окклюзии крупных артерий в мозг [14]. Поэтому все больше и больше исследований проводилось для понимания коллатеральной циркуляции после ишемического инсульта как в клинической, так и в доклинической обстановке [14,15,19,29,30]. Из-за вариации коллатерального кровообращения у грызунов, воспроизводимость и надежность модели были чрезвычайно важны для разработки новых методов лечения для обеспечения побочного потока [31]. В этом исследовании мы обнаружили, что тромбоз может нарушить коллатеральное кровообращение. Инъекция гепарина перед удалением шва успешно устраняет образование тромбов, не нарушая коллатерального кровообращения.

Мы использовали инъекцию гепарина для предотвращения тромбоза и продемонстрировали, что отказ от реперфузии был вызван тромбозом. Однако гепарин мог значительно снизить объем инфаркта при инъекции до операции MCAO [32]. В дополнение к тромбозу ингибирование тромбоцитов после tMCAO может предотвратить дисфункцию эндотелиальных клеток и повреждение мозгового кровеносного сосуда [33,34]. Мы вводили гепарин за 10 минут до удаления шва, чтобы минимизировать влияние гепарина на объем инфаркта. TTC-окрашивание и неврологический тест показали, что такое лечение гепарином не уменьшает объем инфаркта головного мозга или неврологическую оценку. Эти результаты показали, что инъекция гепарина может предотвратить тромбоз в ICA, MCA и ACA после отмены шва. Поэтому мы предлагаем, чтобы инъекционный гепарин в модели tMCAO можно было использовать в качестве дополнительного метода для улучшения модели ишемии шва.

Мы использовали гибкий силиконовый шов, потому что SAH чаще встречается при использовании жестких швов [35]. Даже незначительные различия в диаметре и качестве шовного материала могут существенно повлиять на объем поражения [9]. SAH не обнаруживается ни в гепарин-обработанной, ни в гепариновой группе, что указывает на то, что при наших экспериментальных условиях лечение гепарином не увеличивало заболеваемость САГ. Кроме того, частота смерти животных была равна нулю.

Магнитно-резонансная томография (МРТ) широко используется для измерения CBF и магнитно-резонансной ангиографии высокого разрешения (MRA) для измерения проходимости сосудов во всем процессе в продольном направлении [1,2,36-38]. Однако разрешение MRA ниже, чем SRA, когда используется для обнаружения сосудистой морфологии, особенно у грызунов. LSCI полезен при оценке кортикальной CBF во время и после церебральной ишемии [39]. Однако LSCI не может наблюдать сосуды в подкоре или Цирке Уиллисе из-за его ограничения в глубине обнаружения. SRA может обнаруживать морфологические изменения сосудистой сети мозга как в коре, цирке Уиллисе, так и в подкоре. SRA может использоваться для обнаружения артерий диаметром менее 100 мкм в соответствии с нашим предыдущим исследованием [40]. Напротив, другие технологии, включая MRA, не могут обнаружить морфологические изменения в этих сосудах из-за ограничения в разрешении [11,17,18,41]. К сожалению, животные не могли выжить в течение длительного периода после SRA при нынешних условиях в основном из-за радиационного поражения. Мы считаем, что SRA может использоваться для визуализации всего процесса CBF в продольном направлении, когда доза облучения предпочтительно контролируется в будущем. Мы использовали как SRA, так и LSCI для обнаружения изменений CBF и сосудистой морфологии, включая ветви MCA. Мы продемонстрировали, что образование тромбов после отмены шва вызывает низкую реперфузию в коре, что свидетельствует о том, что тромбоз является жизненно важным элементом, который вызывает отказ реперфузии после tMCAO.

авторы благодарят д-ра — это мост TI ξ Австрия, ho Nagrand X IE, GU No. duo сервис BL13w в SS RF.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *