Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Эктопическое выражение BRCA1 связано с генезисом, прогрессией и прогнозом рака молочной железы у молодых пациентов

The ectopic expression of BRCA1 is associated with genesis, progression, and prognosis of breast cancer in young patients
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3541118/

Исследование состоит в изучении гистопатологических особенностей и экспрессии молекулярных маркеров молодых женщин с раком молочной железы.

Были проанализированы патологические данные 367 случаев женщин-больных раком молочной железы, которые были проанализированы с упором на анализ тенденций развития молодых молочных желез и клинических и патологических особенностей.

По сравнению с пожилыми пациентами с раком молочной железы у молодых женщин с раком молочной железы были большие размеры опухолей, более высокие гистологические оценки и показатели метастазов в лимфатические узлы. Большинство пациентов были на стадии ПТНМ III, с клиническими и патологическими особенностями сильной инвазивности. Положительная экспрессия белка BRCA1 в молодой группе была выше, чем у старой группы. Экспрессия BRCA1 была положительно коррелирована с метастазированием стадии PTNM и подмышечным лимфатическим узлом (P <0,05).

Эктопическое выражение BRCA1 связано с генезисом, прогрессированием и прогнозом молодых пациентов с раком молочной железы.

Виртуальный слайд (ы) для этой статьи можно найти здесь:
http://www.diagnosticpathology.diagnomx.eu/vs/1628000054838044

Рак молочной железы стал одним из распространенных заболеваний, которые серьезно угрожают здоровью женщин. С 1982 по 2001 год заболеваемость раком молочной железы женщин увеличивалась в районе Пекина, со среднегодовым приростом на 4,6% до 4,9%
[1]. Возраст начала рака молочной железы в Китае на 8-10 лет моложе, чем в Европе и США
[2]. Женщины моложе 35 лет с меньшей вероятностью получат рак молочной железы в соответствии с клиническими записями. Тем не менее, заболеваемость имеет тенденцию к увеличению с увеличением общих больных раком молочной железы в последние годы
[2].

Ген восприимчивости к раку молочной железы (BRCA1), ген супрессора опухоли, кодировал фактор, ингибирующий рост клеток. Фактор также участвует в контроле клеточного цикла, регуляции транскрипции генов, восстановлении повреждения ДНК, апоптозе и других важных клеточных процессах. BRCA1 играет важную роль в поддержании стабильности гена
[3], при этом его мутация связана с 35% -40% семейных раковых заболеваний молочной железы и рака яичников. WWOX (домен WW, содержащий оксидоредуктазу) представляет собой новый ген, идентифицированный Bednarek et al. используя технологию секвенирования гена дробовика в сочетании с разделением и анализом транскриптов, соответствующих интересующей области
[4]. Ген WWOX обнаруживается с утратой гетерозиготности, аномальной транскрипцией и низким уровнем экспрессии белка в различных видах опухолей. Ген WWOX считается новым геном-супрессором опухоли после обнаружения гена FHIT.

В этом исследовании экспрессия гена восприимчивости рака молочной железы BRCA1 и гена WWOX опухолевого супрессора обнаруживается с использованием иммуногистохимического метода у молодых и старых женщин-больных раком молочной железы. Состояние мутации гена экзона 2 и 20 BRCA1 было обнаружено с помощью ПЦР-амплификации и метода прямого секвенирования. Проанализирована взаимосвязь между клинико-патологическими параметрами и их клиническим значением.

Сто восемьдесят один случай пациентов (моложе 35 лет), которые подверглись хирургической резекции или биопсии и подтвержденные патологией для пациентов с раком молочной железы, были собраны с января 1998 года по декабрь 2007 года (рисунок
1). Им было от 19 до 35 лет, а средний возраст — 27 лет. Сто восемьдесят шесть случаев пожилых женщин-больных раком молочной железы (≥ 60 лет) были случайным образом отобраны из того же периода. Им было от 60 до 85 лет, а средний возраст — 73 года. Две группы патологических данных были проанализированы ретроспективно. Клинические и патологические характеристики патологических типов, размеров опухолей, гистологических классов, патологических стадий и метастазов лимфатических узлов были сопоставимы. Патологическая диагностика и гистологические оценки были определены с использованием диагностических критериев диагностики молочной железы Всемирной организации здравоохранения (2003 г.). Патологическая стадия рака молочной железы UICC определялась с использованием стандартного стадийно-опухолевого узла-метастаза (PTNM) (2006). Предварительное письменное и осознанное согласие было получено от каждого пациента, и исследование было одобрено комиссией по обзору этики Университета Шаньдун.

Анализ числа случаев рака молочной железы у женщин, включая случаи рака молочной железы и старшего возраста, диагностированных в больнице за последние 10 лет.

Антитела WWOX были приобретены у Beijing Boaosen Biotechnology Co., Ltd.. BRCA1 антитело было приобретено у Wuhan Boster Biological Engineering Co., Ltd. ER, PR и Ki67, были выражены в ядре. HER2 экспрессировали в клеточной мембране. BRCA1 экспрессировали в ядре или цитоплазме. Критерии окрашивания BRCA1 были описаны следующим образом: согласно выражению области, <5% окрашивания регистрировалось как (-); 5-20% окрашивания регистрировали как (+); 21-50% окрашивания регистрировали как (++); и> 50% окрашивания регистрировали как (+++). WWOX был экспрессирован в цитоплазме. По степени экспрессии опухолевые клетки без окрашивания регистрировали как (-); опухолевые клетки с низким окрашиванием регистрировали как (+); Среднее окрашивание регистрировалось как (+ +); и обширное окрашивание регистрировалось как (+ + +).

Геномную ДНК из ткани рака молочной железы экстрагировали с использованием набора для извлечения ДНК генами TIANamp. Две пары смысловых и антисмысловых олигонуклеотидных праймеров (Exon2F, GAAGTTGTCATTTTATAAACCTTT; Exon2R, TGTCTTTTCTTCCCTAGTATGT; Exon20F, ATATGACGTGTCTGCTCCACT; Exon20R, GGGAATCCA AATTACACAGC), используемые в амплификации ПЦР, были синтезированы Shanghai Biological Engineering Technology Co., Ltd (Шанхай, Китай).

Программное обеспечение анализа DNAStar MagAlign использовалось для сравнения последовательностей. Были обысканы локусы с одним нуклеотидным полиморфизмом (SNP). Анализ данных по всей последовательности нуклеиновой кислоты проводили в соответствии с последовательностью кДНК дикого типа BRCA1 (U14680.1) в GenBank. Перевод с нуклеотида на белок сравнивали с использованием прикладной программы Blast2 на веб-сайте Центра информации о биотехнологии США (NCBI), чтобы определить, будут ли мутационные сайты вызывать изменение аминокислоты.

Для статистического анализа использовалась прикладная программа SPSS16.0. Различия между двумя группами сравнивались с использованием теста χ2. P <0,05 считалось статистически значимым. Корреляция между двумя переменными была определена с использованием корреляционного анализа параметров Пирсона. P <0,05 был рассмотрен для двух связанных между собой переменных.

Среди исследованных пациентов в группе молодых женщин было зарегистрировано 160 случаев одиночного заболевания (88,4%) и 21 случай множественных случаев (11,6%). Было зарегистрировано 179 случаев одиночного случая и 7 случаев множественного вхождения (11,6%) в группе пожилых женщин. В соответствии со стандартным стандартом опухолевого узла-метастаза (PTNM) размеры опухолей были разделены на следующие классы: размер опухоли меньше или равный 2 см (T1), размер опухоли более 2 см, но меньше или равен 5 см (T2), размер опухоли более 5 см (T3) (таблица
1). Сравнение данных показало, что в молодом возрасте появилось больше пациентов с размером опухоли T3, чем у более старшей группы. Разница была статистически значимой (P <0,05) (таблица 1).

Сравнительный анализ клинико-патологических параметров в молодых группах и старых группах

Примечание: *, P <0,05.

Количество случаев рака молочной железы, диагностированных в нашей больнице, значительно увеличилось из года в год в период с 1998 по 2007 год, без существенных изменений в числах пациентов молодой группы пациентов, но незначительное увеличение числа случаев болезни более старой группы пациентов ( фигура
1). В обеих этих группах инвазивная протоковая карцинома является наиболее распространенным гистопатологическим типом, за которым следует карцинома протоков in situ и инвазивная дольковая карцинома. Инвазивная протоковая карцинома оценивалась по количеству образования протоков в опухолевых тканях, размерам атипии опухолевых клеток и количествам митотического ядра по сравнению с критериями гистологической классификации Elston и Eliis. Было обнаружено, что у пациентов младшей группы больше опухолей III степени, чем у старшей группы. Разница была статистически значимой (P <0,01) (таблица 1).

Положительные показатели экспрессии белка ER, PR, C-erbB2, BRCA1 и WWOX и высокая пролиферативная скорость Ki67 в молодой группе были следующими: 66,4% (71/107), 54,2% (58/107), 27,1 % (29/107), 65,4% (70/107), 86,9% (93/107) и 59,8% (64/107). Положительные показатели экспрессии белка ER, PR, C-erbB2, BRCA1 и WWOX и высокая пролиферативная скорость Ki67 в старшей группе были следующими: 72,3% (81/112), 40,2% (45/112), 17,0% (19/112), 35,7% (40/112), 86,6% (97/112) и 55,4% (62/112). Результаты теста Χ2 показали, что экспрессия белка BRCA1 имеет статистически значимые различия между двумя группами (P <0,01). Положительная скорость экспрессии белка BRCA1 в младшей группе была выше, чем в старшей группе (Таблица 2). Оба участка экспрессии этих двух групп находятся в цитоплазме. Экспрессия ER, PR, HER2 и WWOX и высокая скорость пролиферации Ki67 не имели существенных различий между двумя группами (P> 0,05). Иммуногистохимические картины экспрессии ER и PR, HER2, Ki67, BRCA1 и WWOX молодой группы и старой группы показаны на рисунке
2.

Сравнительный анализ иммуногистохимических результатов молодых и старых групп пациентов

A (молодая группа) белок-иммуногистохимическое окрашивание BRCA1 было положительным. Положительные продукты локализованы в цитоплазме (× 400). B (молодая группа). Белок-иммуногистохимическое окрашивание BRCA1 было положительным. Положительные продукты локализованы в ядре (× 400). C (старая группа). Белок-иммуногистохимическое окрашивание BRCA1 было положительным. Положительные продукты локализованы в цитоплазме (× 400). D (молодая группа) иммуногистохимическое окрашивание белка WWOX было положительным. Положительные продукты локализованы в цитоплазме (× 400). E (старая группа) иммуногистохимическое окрашивание белка WWOX было положительным. Положительные продукты локализованы в цитоплазме (× 400). F (молодая группа) ER-иммуногистохимическое окрашивание было положительным. Позитивное позиционирование продукта в ядре (× 400). G (молодая группа) положительное иммуногистохимическое окрашивание PR-белков. Положительные продукты, локализованные в ядре (× 400) H (молодняк), иммуногистохимическое окрашивание белков C-erbB2 были положительными. Положительные продукты локализованы в мембране (× 400). I (молодая группа) иммуногистохимическое окрашивание белка Ki67 было положительным. Положительные продукты локализованы в ядре (× 400).

Экспрессия BRCA1 была положительно коррелирована с стадиями PTNM (r = 0,158, P <0,05), положительно коррелировала с метастазами подмышечных лимфатических узлов (r = 0,202, P <0,01), (Таблица 3) и не имеет корреляции с экспрессией ER, PR, HER2 и WWOX, скоростью пролиферации Ki67 и гистологическим классом (P> 0,05). Экспрессия WWOX не коррелирует с различными клиническими показателями (P> 0,05) (таблица
4).

Анализ корреляции результатов BRCA1 и клинико-патологических параметров у молодых групп и старых групп

Примечание: *, P <0,05.

Анализ корреляции между результатами WWOX и клинико-патологическими параметрами в молодых группах и старых группах

Для амплификации гена BRCA1 2 и 20 экзона мы проводили ПЦР с использованием двух пар смысловых и антисмысловых олигонуклеотидных нуклеотидных праймеров. Результаты амплификации показали, что оба они показали одиночные полосы (рис.
3).

A ПЦР-продукт экзона 2 гена BRCA1 (259 пар оснований). B ПЦР-продукт экзона 20 гена BRCA1 (401 пар оснований).

Ген BRCA1 имеет 22 кодирующих экзона. Мы провели секвенирование ДНК вокруг генных мутационных горячих точек: экзона 2 и экзона 20 в гене BRCA 1. Экзон 2 составляет 259 пар оснований, а экзон 20 составляет 401 б.п., что составляет 11,8% от общей длины последовательности в экзоне (660/5600). Сравнение последовательностей методом поиска сайтов DNAStar и однонуклеотидного полиморфизма (SNP) не показало изменения последовательности. Частичные результаты секвенирования ДНК экзона 2 и экзона 20 гена BRCA1 пациента 6 показаны на рисунке
4.

A Частичные результаты секвенирования ДНК экзона 2 гена BRCA1 пациента 6. B Частичные результаты секвенирования ДНК экзона 20 гена BRCA1 пациента 6.

Сури-Swarm
[5] сообщили, что женщины моложе 50 лет, страдающие в 4,3 раза выше возможности получения двустороннего первичного рака молочной железы (BPBC), чем женщины старше 50 лет. Премия сообщила, что женщины, не достигшие 40-летнего возраста, находятся в населении с высоким риском заражения BPBC
[6]. Среди пациентов, изученных в этой статье, больные ткани чаще встречаются в левой груди, чем правые груди пациентов в младшей группе. У двух (1,9%) пациентов появляются опухоли как на левой, так и на правой грудях в молодой группе, в то время как у пациентов с левой и правой грудью в старшей группе нет опухолей. Большинство пациентов имеют свои положения о падении во внешнем верхнем квадранте, за которым следуют внутренний верхний квадрант и сосок. Тройно-отрицательный рак молочной железы (TNBC) представляет собой основной фенотип базальноподобного молекулярного подтипа рака молочной железы, характеризующийся более высоким уровнем заболеваемости у молодых женщин и очень слабым прогнозом. Svoboda
[7] обнаружили, что экспрессия miR-34b отрицательно коррелирует с общей выживаемостью пациентов с TNBC.

Хуттер
[8] обнаружили, что число метастазов в лимфатических узлах является одним из решающих факторов, влияющих на прогноз рака молочной железы. Пациенты без метастаза в лимфатические узлы имеют более благоприятный прогноз, чем у пациентов с метастазами в лимфатические узлы. Чем больше число метастатических лимфатических узлов, тем хуже прогноз. Xu
[9] обнаружили, что claudin-6 является важным фактором, влияющим на лимфатический метастаз, тогда как повышенная регуляция HDAC1 связана с прогрессированием опухоли и инвазивностью в IDC груди. Согласно Liu et al.
[10], 3-летняя и 5-летняя выживаемость молодых пациентов с раком молочной железы с метастазами в лимфатические узлы составила 61,11%, 25% и 3-летняя и 5-летняя выживаемость молодых пациентов с раком молочной железы без метастазов в лимфатические узлы составил 100% и 83,33% соответственно. Сообщается, что молодые пациенты с раком молочной железы имеют более высокие показатели метастазов в лимфатических узлах. Большие повреждения расположены во внутренних областях молочной железы, а пациенты имеют позднюю клиническую стадию, более высокую скорость проникновения опухоли, сильную инвазию опухоли, легкий перенос и плохой прогноз
[11,12]. Согласно нашим исследованиям, у младшей группы больше случаев с диаметром опухоли более 5 см, чем у более старой группы (Р <0,05). У молодой группы больше опухолей гистологического класса III, чем у старшей группы (P <0,01), что согласуется с данными, полученными от Jimor [13] и Чэнь [14]. Поскольку патологическая стадия - это оценка, сделанная после визуального осмотра послеоперационных патологических образцов, и может более точно отражать тяжесть и степень рака молочной железы, она более точна, чем клиническая постановка.

В этом исследовании, согласно этапу PTNM, у молодой группы меньше пациентов на фазах 0 — I и II фазы, чем у более старшей группы, а число пациентов на фазе III было значительно больше, чем у пожилой группы. Две группы имеют значительную статистическую разницу (P <0,01). У младшей группы были более высокие показатели метастазов в подмышечных лимфатических узлах, и доля положительного лимфатического узла была значительно выше, чем у более старшей группы (P <0,01), что согласуется с предыдущими сообщениями. В этом исследовании мы обнаружили, что у молодых женщин с раком молочной железы больше опухолевая масса, более высокий уровень гистологического и метастазирования лимфатических узлов, чем у пожилой группы. Большинство пациентов попадают в стадию ПТНМ III.

В качестве гена-супрессора опухоли ген восприимчивости к раку молочной железы l (BRCA 1) не только ингибирует рост клеток, но также участвует в регуляции клеточного цикла, транскрипции генов, восстановлении повреждения ДНК и апоптозе и некоторых других важных клеточных действиях. Он играет важную роль в сохранении генетической стабильности. Было обнаружено, что белок BRCA1 выходит в ядро ​​нормальной эпителиальной клетки молочной железы и цитоплазму опухолевых клеток
[15]. Chen et al.
[16] обнаружили, что дислокация цитоплазматического белка BRCA1 в клетках рака молочной железы связана с возникновением и метастазами рака молочной железы, но молекулярный механизм неясен. марихуана
[17] и Лю
[18] обнаружили, что белок BRCA1 высоко экспрессируется при раке молочной железы, что указывает на то, что аномальная экспрессия BRCA1 имеет некоторые корреляции с возникновением и ростом рака молочной железы. Лю
[18] также обнаружили экспрессию белка BRCA1, и возраст пациента был отрицательно коррелирован. У младших пациентов была более высокая скорость экспрессии белка BRCA1. В нашем исследовании белок BRCA1 экспрессируется в цитоплазме клеток рака молочной железы как молодой группы, так и пожилой группы. У молодой группы более высокая положительная экспрессия, чем у возрастной группы (<0,01). Экспрессия белка BRCA1 положительно коррелирует с метастазами стадии PTNM и подмышечных лимфатических узлов, что согласуется с результатами, полученными Chen [16] и Лю [18]. У младшей группы более высокая степень злокачественности и плохой прогноз. Эктопическая экспрессия BRCA1 при раке молочной железы тесно связана с развитием, развитием и прогнозом молодых пациентов с раком молочной железы.

Tomasz
[19] обнаружили, что метилирование гена BRCA1 в ДНК PB коррелирует с повышенным риском рака молочной железы, что указывает на то, что аберрантное метилирование генов в ПБ и предрасположенность к болезни связаны. Lv
[20] наблюдали, что мутации гена EGFR были редкостью в карциномах молочной железы, но амплификация гена EGFR была обнаружена примерно в одной трети случаев в этой популяции. В их исследовании были обнаружены редкие мутации в гене EGFR у пациентов с раком молочной железы, что указывает на то, что мутации гена EGFR нечасто встречаются в этой когорте рака молочной железы. Мы провели секвенирование ДНК на горячих точках мутаций гена, экзоне 2 и экзоне 20 в гене BRCA 1. Свежие образцы 10 случаев неродственной молодой инвазивной протоковой карциномы сравнивали с помощью секвенирования ДНК для поиска сайтов с единственным нуклеотидным полиморфизмом (SNP), результаты не выявили изменения последовательности.

Белок WWOX содержит 414 аминокислот. В его аминотерминале есть два WW-домена. Функциональные домены WW связаны с взаимодействием между белками
[21]. Для генов-супрессоров опухолей необходимы протеиновые взаимодействия, чтобы ингибировать рост опухоли через пути передачи сигнала. Удаление и мутация WWOX могут ингибировать апоптоз и способствовать возникновению и развитию опухоли
[22]. В этом исследовании экспрессия белка WWOX молодой группы и старой группы составляла 86,9% и 86,6% соответственно. Разница не была статистически значимой (P> 0,05), эксперименты также не показали корреляции (P> 0,05) между WWOX и возрастом и другими клиническими показателями.

Сам возраст пациента не является основным фактором, влияющим на прогноз рака молочной железы. У молодых пациентов с плохим прогнозом это в основном связано с их неблагоприятными патологическими параметрами и инвазивными биологическими характеристиками. Поэтому клинически комплексный анализ должен проводиться по возрастным и опухолевым клинико-патологическим и биологическим показателям.

Эктопическое выражение BRCA1 связано с генезисом, прогрессированием и прогнозом молодых пациентов с раком молочной железы.

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Все авторы прочитали и утвердили окончательную рукопись.

Мы благодарим Школу медицины, Шаньдунский университет, Цзинань, 250012, Р. Р. Китай за их поддержку.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *