Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Mycobacterium tuberculosis Риски загрязняющих веществ на костном мозге Аспирационный материал от пациентов с Илиаком-косточкой с активным туберкулезным спондилоартритом

Mycobacterium tuberculosis Contaminant Risk on Bone Marrow Aspiration Material from Iliac Bone Patients with Active Tuberculous Spondylitis
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4879251/

Академический редактор: Магали Кукчиарини

Была обеспокоенность по поводу распространения туберкулеза Mycobacterium в костный мозг, когда он был применен при туберкулезной инфекции позвоночника. Это исследование предназначалось для изучения вероятности использования аутологичного костного мозга как источника мезенхимальной стволовой клетки для пациентов с туберкулезным спондилоартритом. В качестве образцов использовалось девять пациентов с туберкулезным спондилитом. Во время процедуры были получены материалы для поражения позвоночника и аспираты подвздошного костного мозга для кислотного быстрого окрашивания, бактериальной культуры и ПЦР (полимеразной цепной реакции) для Mycobacterium tuberculosis в Лаборатории клинической микробиологии медицинского факультета Universitas Indonesia. Это исследование показало, что существует связь между диагностическим подтверждением туберкулезного спондилоартрита на основе теста ПЦР и бактериальной культуры на твердом материале позвоночного поражения с помощью теста ПЦР и бактериальной культуры из аспирата костного мозга. Если диагностическое подтверждение показало положительные результаты, то была более высокая вероятность того, что для аспирации костного мозга будет положительный результат, поэтому не рекомендуется использовать аутологичный костный мозг в качестве источника мезенхимальной стволовой клетки для пациентов с туберкулезным спондилоартритом если ПЦР и культуральное исследование костного мозга не показали отрицательного результата.

Вторжение бактерий Mycobacterium tuberculosis в позвоночное тело (туберкулезный спондилит) было одной из причин деформаций позвонков, которые снижали качество жизни пациента [1-3]. Общее лечение субтрота Сапарданом для случаев туберкулезного спондилоартрита с тяжелыми дефектами использовало трикортикальный аутотрансплантат кости, который был получен из подвздошной кости, чтобы заполнить дефект щели [4], хотя после лечения все еще было около 5% случаев отказа от слияния. Хирургическое вмешательство проводилось с помощью таких признаков, как паравертебральный абсцесс, неврологическая проблема, нестабильность и деформация позвоночника.

Большинство из предполагаемого числа случаев ТБ произошло в Азии (55%) и в Африке (30%), а меньшие доли были зарегистрированы в Восточно-Средиземноморском регионе (7%), Европейском регионе (4%) и Американском регионе ( 3%.). Индонезия была одной из крупных стран с туберкулезной инфекцией.

Мезенхимальная стволовая клетка была специальной клеткой, которая была получена из костного мозга, жировой ткани, пупочной крови, амниотической жидкости, плаценты, целлюлозы зубов, сухожилия, синовиальной мембраны и мышцы [5]. Костный мозг был источником мезенхимальной стволовой клетки, которая широко использовалась для реконструкции тканей для лечения костного дефекта из-за его состава остеогенных клеток-предшественников [5, 6]. Костный мозг был легко получен методом аспирации, чтобы можно было избежать травматических процедур. После аспирации костный мозг культивировался in vitro, чтобы количество клеток увеличивалось, следовательно, являлось идеальным источником для реконструкции аутологичной костной ткани [7, 8].

В нескольких исследованиях говорилось, что костная ткань, образованная после имплантации мезенхимальных стволовых клеток, возникшая из стромальных клеток костного мозга, обладает остеогенной способностью, подобной аутологичному костному трансплантату [8]. Это исследование показало, что стромальные клетки костного мозга оказались эффективными в повышении способности к заживлению костей после того, как он был посажен там, где разрушена кость [8-10].

Успех использования аутологичной мезенхимальной стволовой клетки, возникшей из костного мозга для целей слияния в дегенеративных заболеваниях, стал основой этого исследования. Однако мезенхимальная стволовая клетка требовала использования костного мозга у самих пациентов (аутологичных), тогда как лаборатория, используемая для культивирования, требует наличия прозрачного костного мозга. Проблемы, связанные с инфекцией туберкулеза Mycobacterium, распространяющейся в костный мозг, приводят к необходимости изучения использования аутологичного костного мозга в качестве источника мезенхимальной стволовой клетки.

Это исследование было направлено на доказательство существования Mycobacterium tuberculosis в костном мозге пациентов с туберкулезным спондилитом и изучение применения аутологичного костного мозга как источника мезенхимальной стволовой клетки у пациентов с туберкулезным спондилоартритом.

Это было описательно-наблюдательное исследование, которое было проведено в больнице Cipto Mangunkusumo в Джакарте с января по октябрь 2014 года. Образцы были повреждениями и материалами костного мозга у пациентов с туберкулезным спондилоартритом, которые соответствовали инклюзивным критериям, которые были пациентами с туберкулезным спондилитом, показания к операции, никогда не были в хирургии раньше в любых местах из-за подозрения на туберкулезный спондилит в возрасте от 10 до 60 лет и подписали информированное согласие. Процедура хирургии была включена в критерии из-за необходимости собирать образец для поражения и крови костного мозга. Количество образцов подсчитывалось с использованием пропорциональной разницы (80%), которая составляла 18 единичных образцов от 9 пациентов.

Определение участников исследования проводилось последовательно в амбулаторной клинике. В тот же день операции были взяты образцы исследуемого образца, такие как материал обломков, абсцесс, грануляционная ткань и устремления костного мозга.

Был собран некоторый материал от поражения позвонков, который состоит из твердого и жидкого материала. Твердый материал состоял из секвестрированной и некротической кости. Жидкий материал состоял из крови, гноя и лизиса из мягких тканей (рис. 1). Поврежденный материал (обломки, абсцесс и грануляционная ткань) был получен инвазивно во время хирургической процедуры, и образец костного мозга проводили с минимальной инвазивной процедурой с использованием троакара в области подвздошного гребня.

Три стадии процедуры аспирации костного мозга (рис. 2) были разработаны следующим образом: (1) трокар с размером 84 мм был вставлен в подвздошную кость в точке заднего верхнего подвздошного гребня (PSIS), (2) целых 10 мл крови костного мозга аспирировали троакаром, используя вакуумный маневр в стерильный шприц, и (3) внутреннюю часть шприца ополаскивали антикоагулянтами. Сбор проб проводился, когда пациент находился в общей анестезии. Образцы (поражение и кровь костного мозга) затем отправляли в клиническую лабораторию микробиологии для кислотного быстрого окрашивания, изучения культуры и ПЦР для Mycobacterium tuberculosis [11, 12]. ПЦР-амплификацию для гена IS6110 выполняли с помощью набора праймеров TB1,5′-CTCGCGAGCGTAGGCGTCGG-3 ‘и TB2,5′-CTCGTCCAGCGCCGCTTCGG-3’, которые амплифицировали фрагмент из 130-пар оснований (bp) гена-мишени.

Лаборатория была аккредитована на культуру и 1-я и 2-я линии противотуберкулезной лекарственной резистентности, проведенной Supranational Referral Laboratory (SRL) IMVS, Аделаида, Австралия. Он был аккредитован в качестве лаборатории, рекомендованной ВОЗ для сертификации в лаборатории по туберкулезу. Диагноз туберкулезного спондилита был подтвержден экзаменом по культуре на основе международного стандарта по лечению туберкулеза (МНТЦ).

Если бы кислотное быстрое окрашивание, исследование культуры или исследование ПЦР на туберкулез Mycobacterium было отрицательным, то образец не использовался бы в качестве образца, и если бы только один из них был положительным, то образец будет использоваться в качестве исследовательского образца ,

Участниками этого исследования были 5 женщин и 4 мужчины. Самым младшим участником было 21 год, а старшему было 38 лет. Большинство случаев были инфицированы в области тораколюбара. Не было признаков инфекции в подвздошной области. Как правило, у участников есть история туберкулезного легкого, которая плохо лечилась. Противотуберкулезный препарат не принимался в соответствии с рекомендованными рекомендациями.

Согласно результатам исследования на материале твердого поражения из 9 случаев туберкулезного спондилоартрита (таблица 1), имеется 9 (9) положительных результатов гистопатологии, 1 (9) положительных тестов на культуру, 2 (9) положительных ПЦР-тестов и нет твердый материал положительный в зависимости от теста на кислотное быстрое окрашивание (AFS).

По результатам жидкостного поражения из 9 случаев туберкулезного спондилоартрита нет положительных результатов по результатам исследования культуры, 3 (9) положительных тестов ПЦР и нет (9) положительного теста АФН.

Согласно образцу костного мозга из 9 костных мозговых устремлений туберкулезного спондилоарного подвздошного сустава (табл. 2), имеется 1 (9) положительный тест на культуру, 1 положительный тест на ПЦР 9 устремлений крови костного мозга и ни один после AFS.

Диагноз туберкулезного спондилоартрита в этом исследовании подтвержден гистопатологическим исследованием [13, 14]; Таким образом, можно сделать вывод, что 7 из 9 образцов (77,78%) являются неактивным спондилоартритом, в то время как 2 из 9 образцов (22,22%) являются активным спондилитом, подтвержденным положительной культурой туберкулеза Mycobacterium [13, 15].

Из исследования костного мозга видно, что между положительной ПЦР и результатом культивирования для твердого поражения с ПЦР и культурой возникает кость. Это означает, что ПЦР и / или культура твердого поражения могут быть маркером для костного мозга, или, с другой стороны, это означает, что если бы мы нашли положительный результат от ПЦР и / или культуры от твердого поражения, то это очень что мы получаем аналогичный результат от ПЦР и / или культуры от костного мозга.

Из 9 случаев туберкулезного спондилита, по данным гистопатологического исследования, есть 1 тест, который дает положительный результат из костного мозга. Это означает, что происходит миграция туберкулеза Mycobacterium от поражения к костному мозгу. Миграция может быть вызвана некоторыми состояниями, такими как общее состояние с ослабленным иммунитетом, турбулентность кровотока и неадекватный режим антибиотиков.

Ослабление иммунитета — это состояние, при котором иммунный ответ пациента снижается (слаб) из-за потребления иммунодепрессантов, радиации, недоедания и других состояний, таких как раковые инфекции [16]. В этом состоянии пациенты испытывают серьезное нарушение клеточного иммунитета и, таким образом, становятся уязвимыми к инфекциям, включая бактериальные инфекции [16, 17]. Состояние иммунодефицита случаев с положительным результатом в поражении и костном мозге, вероятно, вызвано недоеданием, так что инфекция туберкулеза Mycobacterium распространяется на другие области, особенно в костный мозг, вместо того, чтобы содержаться внутри первоначального поражения.

Применение MSC на положительный дефект кости туберкулеза показало, что туберкулез спондилит поддерживает усиленное оссификацию и новое образование костей, стимулируя метаболизм кальция при поражениях. MSCs обладают иммунорегуляторной способностью и вызывают иммуносупрессивные эффекты в ряде ситуаций. Не было доказательств реактивации туберкулеза после имплантации MSCs на дефект дефекта позвоночной кости [18].

У иммунокомпрометированных индивидуумов иммуномодулирующая активность MSC повысила безопасность в отношении повышенного риска первичной вирусной инфекции и вирусной реактивации, что является основной причиной смертности после аллогенной трансплантации [19, 20].

Существование Mycobacterium tuberculosis при кровотоке вызовет распространение бактерий системно. Сгибание внутри кровеносного сосуда анатомически может стать микроокружением, которое поддерживает и заставляет бактерии попадать в ловушку в сосуде, и, если это будет продолжаться, может вызвать бактериальную пролиферацию в крови, вызывая сепсис и в конечном итоге заразить костный мозг [21].

Существование Mycobacterium tuberculosis в органах зависит от дозы и продолжительности противотуберкулезных препаратов (ATD) [13, 16]. Все пациенты в этом исследовании получали ATD в течение как минимум 2 недель, прежде чем были включены в процедуру, что, вероятно, является причиной того, что туберкулез Mycobacterium продолжает расти и распространяться в костный мозг. Это означает, что ATD, которые были даны, еще не были эффективны при убийстве Mycobacterium tuberculosis, или сама бактерия может обладать резистентностью к ATD, вследствие чего ATD не работает эффективно.

В этом исследовании не доказано, что существует разница в эффективности культуры костного мозга от подвздошной кости, которая поступает от пациентов с туберкулезным спондилитом по сравнению с пациентами с нормальным состоянием; вместо этого это исследование доказывает существование туберкулеза Mycobacterium в костном мозге, который поступает от пациента с туберкулезным спондилитом после положительных результатов теста на культуру и ПЦР, тем самым зная, что загрязнение бактерий в костном мозге важно, прежде чем обрабатывать кость костный мозг как источник аутологичной мезенхимальной стволовой клетки, чтобы он не вызывал заражения клетки, которая будет культивироваться, а также оператора и лабораторных установок.

Обработка и расширение ячеек будет проводиться на базе надлежащей производственной практики (GMP) в подразделении комплексной службы медицинской техники для стволовых клеток, больнице Cipto Mangunkusumo. Окончательный выпуск продукта основан на следующих критериях: экспрессия поверхностного маркера (> 90% клеток CD73 + / CD90 + / CD105 +, ≤1% клеток CD45 + и ≤0.01% клеток CD3 +), отсутствие микробного загрязнения с использованием культуры и микоплазменной ПЦР , морфология формы веретена, бесцветная суспензия клеток, лишенная клеточных агрегатов, и отсутствие генетических аномалий с использованием анализа и жизнеспособности кариотипа [22, 23].

Стандартный подход к тканевой инженерии для решения проблем нарушения заживления трещин, восстановления костей и регенерации включает использование факторов роста, каркасов и мезенхимальных стволовых клеток (треугольная концепция). Однако, хотя механическая среда обсуждается и считается важным элементом регенерации кости, ее важность часто недооценивается, и ей не всегда уделяется необходимое внимание. Lucarelli et al. в их исследовании показано, что комбинация мезенхимальных стволовых клеток и богатой тромбоцитами плазмы с каркасом порождает новую кость и занимает дефект кости 3 см [24].

Эффективность распространения Mycobacterium tuberculosis в костный мозг подвздошной кости до 20 процентов на случай туберкулезного спондилита, так что использование аутологичной мезенхимальной стволовой клетки при туберкулезных случаях спондилоартрита должно быть хорошо рассмотрено и обеззаражено для подвздошной кости костный мозг.

Аллогенные стволовые клетки следует использовать у пациентов с туберкулезным спондилоартритом с более чем одним дефектом в позвоночном теле от доноров, которые прошли предварительный скрининг-тест. Необходимо провести дополнительные исследования, чтобы доказать различную эффективность результата культивирования подвздошного костного мозга, который поступал от пациентов с туберкулезным спондилитом с нормальным пациентом.

Это исследование финансировалось оперативным RSCM 2014 Hibah Penelitian.

У авторов нет финансовых конкурирующих интересов.

Туберкулезное поражение спондилита. В качестве жидкого поражения было около 50 кубических метров гноя. Твердое поражение не появляется на картинке.

Процедура аспирации подвздошного костного мозга у пациента с туберкулезным спондилитом. Это показывает, что 10 куб. См. Кровь костного мозга была собрана.

Результаты микробиологии и гистопатологии.

AFS: кислотное быстрое окрашивание; ПЦР: полимеразная цепная реакция; HP: гистопатология.

Доля твердых поражений, жидких повреждений и костного мозга приводит к положительным результатам исследования.

AFS: кислотное быстрое окрашивание; ПЦР: полимеразная цепная реакция; HP: гистопатология.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *