Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Производительность SD Bioline TB Ag MPT64 Быстрое испытание на быстрое подтверждение изолятов Mycobacterium bovis у животных

Performance of the SD Bioline TB Ag MPT64 Rapid test for quick confirmation of Mycobacterium bovis isolates from animals
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4367147/

Mycobacterium (M.) bovis, бактерия в комплексе M. tuberculosis, является возбудителем туберкулеза крупного рогатого скота, заразной болезнью животных. Микобактериальная культура является золотым стандартом для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, но этот метод является трудоемким и трудоемким. В настоящем исследовании эффективность теста SD Bioline TB Ag MPT4 Rapid, иммунохроматографического анализа, оценивали с использованием эталонных бактериальных штаммов и изолятов полевых клеток M. bovis, собранных у животных. Тест SD MPT64 Rapid дал положительные результаты для 95,5% (63/66) изолятов M. bovis у крупного рогатого скота и 97,9% (46/47) изолятов от оленей. Кроме того, тест имел чувствительность 96,5% (95% ДИ, 91,2-99,0), специфичность 100% (95% ДИ, 96,7-100,0), положительное прогностическое значение 100% (95% ДИ, 96,7-100,0) и отрицательное прогностическое значение 92,9% (95% ДИ, 82,7-98,0) для изолятов M. bovis. В заключение, тест SD MPT64 Rapid прост в использовании и может быть полезен для быстрого подтверждения наличия M. bovis у животных.

Туберкулез крупного рогатого скота представляет собой инфекционное заболевание животных, вызванное Mycobacterium (M.) bovis, которое является частью комплекса M. tuberculosis [2,21]. Туберкулез крупного рогатого скота отвечает за основные экономические потери в экономике и является проблемой общественного здравоохранения [7,18]. В большинстве стран контроль и ликвидация туберкулеза крупного рогатого скота включают в себя испытания и убоя [17].

Внутрикожный туберкулиновый кожный тест широко используется для идентификации инфицированных животных и способствовал борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота [8]. В Корее заболеваемость туберкулезом крупного рогатого скота в 1940-х годах составляла примерно 15%; в 2005 году он был сокращен до 0,15% в рамках программы по искоренению туберкулеза крупного рогатого скота с использованием внутрикожного туберкулинового кожного теста [6]. Тем не менее, нынешняя заболеваемость увеличилась до 0,25% (примерно 1000 крупного рогатого скота в год) [24]. Для искоренения туберкулеза крупного рогатого скота срочно необходима эффективная и эффективная диагностическая система или стратегия. Серологические тесты с использованием M. bovis-специфических антигенов и анализ интерферона-гамма (IFN-γ) в настоящее время рассматриваются или оцениваются в Корее. Эти анализы используют микобактериальные культуры в качестве золотого стандарта для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. Культивирование занимает 3-6 недель, в то время как присутствие M. bovis может быть подтверждено с использованием кислотно-быстрого окрашивания бактерий и биохимических тестов [22]. Пятно Зиля-Нильсена прост и быстрей, но не может отличить M. bovis от нетуберкулезных микобактерий. Кроме того, обычные биохимические тесты являются трудоемкими и трудоемкими.

Был разработан SD-тест Bioine TB Ag MPT64 Ag MPT64 Rapid Test (SD MPT64 Rapid test) — простой иммунохроматографический тест (ИКТ) для комплекса M. tuberculosis и использует моноклональные антитела для обнаружения белка MPT64 [1,9]. MPT64 — это белок, специфически выделяемый членами комплекса M. tuberculosis, включая M. tuberculosis, M. bovis и M. africanum, а также некоторые штаммы M. bovis bacilli Calmette-Guérin (BCG) [12]. Rapid Test SD MPT64 широко используется для подтверждения идентификации изолятов M. tuberculosis у людей. Кроме того, тест очень чувствителен и специфичен. Тест SD MPT64 Rapid потенциально полезен для идентификации M. bovis, члена комплекса M. tuberculosis, поскольку антиген MPT64 экспрессируется всеми членами комплекса M. tuberculosis [10]. Тем не менее, лишь немногие доклады оценили эффективность этого теста для анализа изолятов M. bovis у животных. Поэтому мы оценили способность теста SD MPT64 Rapid идентифицировать изоляты M. bovis у крупного рогатого скота и оленей.

Справочные бактериальные штаммы, состоящие из 25 микобактерий и 12 других бактерий, были получены из Американской коллекции типовых культур (АТСС, США) и использованы для настоящего исследования (таблица 1). M. bovis AN5 выращивали в срединной среде Middlebrook 7H9 (Difco, США), дополненной 10% средой обогащения OADC Middlebrook (BBL, США), чтобы определить предел обнаружения теста. Для теста SD MPT64 Rapid использовались виды Mycobacterium, выращенные на среде Löwenstein-Jensen (UNION LAB, Корея) и другие бактериальные штаммы, выращенные на агаровых пластинах Luria-Bertani (Difco). В этом исследовании оценивали 113 штаммов M. bovis field, выделенных из крупного рогатого скота и оленя в Корее, а также 25 M. avium и 27 M. intracellulare клинических штаммов, выделенных у людей (таблица 2). Все микобактериальные изоляты были идентифицированы окрашиванием Ziehl-Neelsen и биохимическими испытаниями, как описано ранее [22]. AccuProbe (Gen-Probe, США), REBA Myco-ID (M & D, Корея) и мультиплексная ПЦР были выполнены для идентификации видов Mycobacterium и отличают M. bovis от других членов комплекса M. tuberculosis [14,15,20].

SD MPT64 Быстрое испытание проводилось в соответствии с рекомендациями производителя. Три или четыре колонии микобактериальных штаммов, выращенных в средах Лёвенстейна-Йенсена и других бактериальных штаммов, выращенных на агаровых чашках Луриа-Бертани, эмульгировали в 200 мкл экстракционного буфера. Затем 100 мкл помещали в лунки для образцов теста, и результаты визуально оценивали на основе развития цвета после инкубации при комнатной температуре в течение 15 мин. Неактивные изоляты M. bovis в тесте были подтверждены секвенированием гена mpt64.

Для определения предела обнаружения теста SD MPT64 Rapid была проведена серия разбавленной суспензии M. bovis AN5 от 2,1 × 103 до 2,0 × 106, культивированной в среде Middlebrook 7H9 с 10% обогащенной средой, с помощью теста SD MPT64 Rapid и колоний- (CFU) подсчитывали, используя пластины Middlebrook 7H10 (Difco) с 10% обогащенной средой.

Чувствительность, специфичность, положительное прогностическое значение (PPV) и отрицательное предсказательное значение (NPV) определялись с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (версия 4.0, GraphPad Software, США). Согласование результатов испытаний оценивалось на основе значений каппа с использованием SPSS 13.0 (SPSS, США).

Тест SD MPT64 Rapid был проведен для 25 контрольных штаммов микобактерий и 12 других бактерий для идентификации членов комплекса M. tuberculosis. Тест SD MPT64 Rapid дал сильные результаты для M. bovis, M. africanum и M. tuberculosis, но не M. bovis BCG Pasteur или M. bovis BCG Danish (Таблица 1). Никакого положительного сигнала не наблюдалось для бацилл без туберкулезных микобактерий (NTM) или любых других протестированных бактерий. Эти результаты предполагают, что тест SD MPT64 Rapid может идентифицировать членов комплекса M. tuberculosis, включая M. bovis, с высокой степенью специфичности.

Десятикратные разведения M. bovis AN5 использовали для измерения предела обнаружения теста SD MPT64 Rapid. Как показано на фиг.1, предел обнаружения теста для M. bovis оценивался в 5,5 × 104 КОЕ / мл. Тест дал сильный положительный сигнал (фиолетовая линия) для образцов, содержащих более 5,4 × 105 КОЕ / мл M. bovis и явный положительный сигнал для образцов, содержащих 1,3 × 105 КОЕ / мл или 2,7 × 105 КОЕ / мл М. Бови. Испытуемый сигнал был слабо положительным для образца, содержащего 6,8 × 104 КОЕ / мл M. bovis, и был слабым, но определяемым как положительный при тщательном обследовании для образца, содержащего 3,4 × 104 КОЕ / мл M. bovis.

Всего для оценки способности теста SD MPT64 Rapid для идентификации изолятов M. bovis у животных использовались 113 изолятов M. bovis от животных и 52 изолята NTM (таблица 2). Среди изолятов M. bovis 109 (96,5%) имели положительный результат теста SD MPT64 Rapid; все изоляты M. avium и M. intracellulare дали отрицательные результаты. Положительные результаты были получены для 95,5% (63/66) изолятов M. bovis у крупного рогатого скота и 97,9% (46/47) изолятов от оленей. Чувствительность составила 96,5% (95% доверительный интервал [ДИ], 91,2-99,0), специфичность составляла 100% (95% ДИ, 96,7-100,0), положительное прогностическое значение составляло 100,0% (95% ДИ, 96,7-100,0), отрицательное прогностическое значение было 92,9% (95% ДИ, 82,7-98,0), а значение каппа составляло 0,945.

Целью этого исследования было оценить тест SD MPT64 Rapid, ИКТ для M. tuberculosis. Мы оценили способность теста подтвердить личность изолятов M. bovis у животных. ИКТ широко используются для диагностики инфекционных заболеваний из-за его простого и быстрого характера. Тест SD MPT64 Rapid обладает высоким уровнем чувствительности и специфичности для выявления M. tuberculosis у людей [1,9,19]. Несколько групп включали изоляты M. bovis в их оценке теста SD MPT64 Rapid и обнаружили, что некоторые изоляты M. bovis не вызывали реакции [5,11,16]. В настоящем исследовании оценивалась способность теста SD MPT64 Rapid для обнаружения изолятов M. bovis у животных с использованием значительного числа образцов.

Чувствительность (96,5%) и специфичность (100,0%) теста SD MPT64 Rapid для изолятов M. bovis, наблюдаемых в настоящем исследовании, были сопоставимы с показателями предыдущих отчетов (чувствительность 92 ~ 99% и специфичность 97 ~ 100%), для M. tuberculosis [3,4,19]. Эти результаты показывают, что тест SD MPT64 Rapid является таким же специфичным и чувствительным для M. bovis, как и для M. tuberculosis. Предел обнаружения M. bovis был аналогичен показателю обнаружения в M. tuberculosis [1,19].

В этом исследовании четыре из 113 изолятов M. bovis (3,5%) были нереактивными в тестах SD MPT64 Rapid. Это открытие сопоставимо с данными других исследований, в которых тест MPT64 Rapid использовался для обнаружения изолятов M. tuberculosis у людей. Фальсифицированная скорость теста MPT64 Rapid составляет 3,1% (12 из 384) в соответствии с Hirano et al. [13] и 1,4% (2 из 146) согласно Wang et al. [23]. Эти отчеты показывают, что эффективность теста SD MPT64 Rapid аналогична для изолятов M. tuberculosis у людей и M. bovis у животных. Для трех из четырех нереактивных изолятов M. bovis два содержат делецию между 512 и 688 парами оснований (bp) в гене mpt64, а оставшаяся имеет точечную мутацию в позиции 402 (от G до A), которая создала остановку кодон. Эти результаты были аналогичны результатам в докладе Хирано и др. [13] и подразумевают, что эти изменения могли привести к ложноотрицательным результатам в тесте SD MPT64 Rapid.

Мутацию идентифицировали путем секвенирования гена mpt64 в трех из четырех нереактивных изолятов M. bovis (данные не показаны). Это могло бы привести к ложным отрицаниям, полученным в результате теста SD MPT64 Rapid, как также было сообщено Hirano et al. [13]. Поскольку неправильная идентификация M. bovis может иметь серьезные последствия, обычные или молекулярные тесты для подтверждения присутствия этого микроорганизма должны выполняться, когда микробиологические данные указывают на M. bovis, но результат SD MPT64 Rapid не отрицателен.

Результаты этого исследования показывают, что тест SD MPT64 Rapid может быть полезным методом быстрой идентификации изолятов M. bovis у животных. Тест может заменить обычные анализы подтверждения. Большая простота и низкая стоимость теста SD MPT64 Rapid по сравнению с другими методами делают этот метод хорошим выбором для подтверждения изолятов M. bovis. Использование этого теста для идентификации изолятов M. bovis у животных может способствовать установлению стратегии искоренения туберкулеза крупного рогатого скота. В заключение, тест SD MPT64 Rapid — простой и надежный метод, который может служить диагностическим инструментом для подтверждения наличия M. bovis у животных.

Это исследование было поддержано грантом Программы развития биотехнологической промышленности, Министерства сельского хозяйства, продовольствия и сельских дел, Кореи (грант № 314025-03) и частично грантом Агентства по карантину животных и растений (Z -AD13-2010-11-0502).

Конфликт интересов отсутствует.

M .: Mycobacterium, ATCC: Американская коллекция типовых культур.

* Штаммы, изолированные от людей.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *