Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Распространенность туберкулеза у свиней, убитых на двух скотобойнях в Эфиопии, и молекулярная характеристика туберкулеза Mycobacterium, выделенная из туберкулезных поражений у свиней

Prevalence of tuberculosis in pigs slaughtered at two abattoirs in Ethiopia and molecular characterization of Mycobacterium tuberculosis isolated from tuberculous-like lesions in pigs
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3661388/

Туберкулез (ТБ) представляет собой инфекционное гранулематозное заболевание, вызванное кислотоустойчивыми бациллами рода Mycobacterium. Болезнь поражает практически всех видов позвоночных. Хотя туберкулез у млекопитающих почти контролируется во многих развитых странах, он по-прежнему является серьезной проблемой у людей и домашних животных, включая свиней в развивающихся странах. В Эфиопии распространенность туберкулеза у свиней неизвестна. Поэтому это исследование было разработано для оценки распространенности туберкулеза у свиней в центральной Эфиопии и для характеристики возбудителей с использованием молекулярных методов.

Оценочная распространенность туберкулеза составила 5,8% (49/841). Возраст и происхождение свиней были значительно связаны (Р <0,001) с распространенностью. Напротив, связь пола, типа пола и источника воды с распространенностью не может быть показана. Позитивность культуры была подтверждена в 30,6% (15/49) туберкулезно-подобных поражений. Из 15 изолятов 12 были быстрыми положительными кислотами, а пять из них были подтверждены мультиплексной ПЦР в составе комплекса M. tuberculosis. Выделение пяти изолятов далее подтвердило, что они были M. tuberculosis, принадлежащие SIT1088 (два изолята) и SIT1195 (один изолят). Остальные два изолята принадлежат к идентичному сполиготипу, образец которого не найден в базе данных сполиготипов (SpolDB4).

Выделение M. tuberculosis у свиней предполагает возможный риск передачи между людьми и свиньями. Следовательно, требуется создание возможных методов управления.

Туберкулез (ТБ) представляет собой инфекционное гранулематозное заболевание, вызванное кислотоустойчивыми бациллами (AFB) рода Mycobacterium. Болезнь поражает практически всех видов позвоночных [1]. Бактериями туберкулеза являются туберкулез Mycobacterium (M.), агент болезни у приматов, M. bovis у других млекопитающих и M. avium у птиц. Специфика хозяина относительна [2].

Свиньи восприимчивы ко всем трем типам туберкулезных бацилл [1,3]. Было высказано предположение о наличии корреляции между возникновением туберкулеза у свиней и прямым или косвенным контактом свиней с туберкулезными людьми, крупным рогатым скотом или птицами [4,5]. Наличие туберкулеза у свиней практически во всех странах, где свиней выращивают, уже давно сообщается [4]. В Эфиопии ретроспективный отчет по анализу данных о контроле за мясом от Shitaye и его коллеги [6] показал показатель распространенности туберкулеза на 0,009% у свиней, убитых в бойне Аддис-Абебы в 1996-2005 годах. Этот отчет является единственной доступной информацией о туберкулезе у свиней в Эфиопии. Микобактериальные виды не были изолированы в исследовании.

Воздействие туберкулеза у свиней осложнено. Туши свиней осуждаются из-за туберкулезных поражений [7]. Потери от испытаний и убоя крупного рогатого скота для борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота, вызванные распространением M. bovis инфицированными свиньями [8,9] и потерями от разрушения ложноположительных реакторов из-за сенсибилизации по видам микобактерий, отличных от туберкулеза [10 -12] могут быть косвенными последствиями туберкулеза свиней. Кроме того, все большее число сообщений о нескольких типах микобактериальных инфекций среди ВИЧ-инфицированных и иммунокомпрометированных пациентов обвиняют животных в том, что они являются источником инфекций для людей [13-15]. Исследования показали, что свиньи являются одним из возможных источников микобактериальных инфекций для людей и животных [9,16,17].

Хотя туберкулез млекопитающих почти контролируется у людей и домашних животных во многих развитых странах, он по-прежнему является серьезной проблемой в развивающихся странах, включая Эфиопию [18-20]. В Эфиопии эпидемиология туберкулеза почти не изучается. Особенно у свиней это неизвестно. Обнаружение, изоляция и характеристика возбудителей и исследование факторов риска, связанных с заболеванием, являются важными шагами в борьбе с туберкулезом. Поэтому это исследование было разработано для оценки распространенности туберкулеза у свиней в центральной Эфиопии и для характеристики возбудителей с использованием молекулярных методов.

Исследованные образцы и эпидемиологические данные от свиней были собраны из двух скотобоен, расположенных в Аддис-Абебе и Бишофту. Оба города расположены в центральной части Эфиопии. Аддис-Абеба является столицей и крупнейшим городом страны, а Бишофту — быстрорастущим и индустриализирующим городом, расположенным в 46 км к юго-востоку от Аддис-Абебы. Помимо Аддис-Абебы и Бишофту свиньи были привезены на убой в эти скотобойни из Особой зоны Оромии, Адамы и Модджо, которые находятся не более чем в радиусе 100 км от Аддис-Абебы.

Было исследовано общее количество 841 свиней, убитых с марта по сентябрь 2011 года. Подробные вскрышные исследования проводились на всех убитых свиньях по описанной ранее процедуре [21]. Лимфатические узлы и подозрительные органы были разрезаны на срезы толщиной приблизительно 2 мм, чтобы облегчить обнаружение повреждений и осмотреть наличие ТБ-повреждений. Ткани от подозрительных поражений ТБ собирали в стерильные универсальные флаконы, наполненные 5 мл 0,9% солевого раствора для культуры микобактерий. Затем их транспортировали в ледяной коробке со льдом, пока они не добрались до Лаборатории туберкулеза Аклилу Леммы (ALIPB). В лабораторных образцах либо обрабатывали в течение следующих нескольких дней, сохраняя при температуре 4 ° C до времени обработки, либо выдерживали при температуре -20 ° C в течение максимум 10 дней для последующей обработки.

Образцы были дополнительно обработаны для выделения микобактерий в соответствии с протоколами Всемирной организации здравоохранения животных [22]. В лаборатории образцы тканей распиливали с использованием стерильных лопастей и вручную гомогенизировали с использованием раствора и пестика. Затем следовала дезактивация путем встряхивания гомогената в равном объеме 4% NaOH в течение 10-15 минут при комнатной температуре и нейтрализации 1% (0,1 н.) HCl с использованием фенолового красного в качестве индикатора. Нейтрализация была достигнута, когда цвет раствора превратился из фиолетового в желтый. Затем суспензию центрифугировали 3000 × g в течение 15 минут, супернатант отбрасывали и осадок использовали для окрашивания AFB и культуры.

Осадок культивировали на каждом наклоне двух сред Lowenstein-Jensen (LJ), обогащенных глицерином, а другой с пируватом. Наклоны инкубировали аэробно при 37 ° С в течение как минимум восьми недель или до тех пор, пока не наблюдался макроскопический рост, пока они были исследованы на регулярной основе для макроскопического роста. Мазки из видимого роста были подготовлены для микроскопического исследования с использованием метода окрашивания Зиля-Нильсена для выбора положительных изолятов AFB.

Десять положительных изолятов AFB подвергали мультиплексному тесту идентификации ПЦР в соответствии с методикой, описанной Уилтоном и Кузенсом [23], которая обнаруживает и дифференцирует комплекс M. tuberculosis (MTC) из комплекса M. avium (MAC), M. intracellularae и других микобактериальных виды. В качестве источника ДНК-шаблона использовались положительные образцы с положительной реакцией с положительным давлением.

Короче говоря, реакцию амплификации ПЦР проводили в Thermal Cycler (Applied Biosystems, PTC-100 ™) с 20 мкл реакционной смеси, используемой для реакции ПЦР. Этот общий объем состоял из 5 мкл геномной ДНК в качестве матрицы, 8 мкл HotStarTaq Master Mix (Qiagen, Соединенное Королевство), 0,3 мкл каждого из шести различных праймеров, используемых для мультиплексной ПЦР и 5,2 мкл воды Qiagen. Праймерами для амплификации были MYCGEN-F, 5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 ‘(35 нг / мкл); MYCGEN-R, 5’-TGC ACA CAG GCC ACA AGG GA-3 ‘(35 нг / мкл); MYCAV-R, 5’-ACC AGA AGA CAT GCG TCT TG-3 ‘(35 нг / мкл); MYCINT-F, 5 ‘CCT TTA GGC GCA TGA TGT CTT TA 3′ (75 нг / мкл); TB1-F, 5’-GAA CAA TCC GGA GTT GAC AA-3 ‘(20 нг / мкл); и TB-1- R, 5’-AGC ACG CTG TCA ATC ATG TA-3 ‘(20 нг / мкл). M. tuberculosis (H37Rv) и M. avium использовали в качестве положительных контролей, тогда как вода Qiagen служила отрицательным контролем. Затем реакционную смесь нагревали до 95 ° С в течение 10 минут. Затем последовало 35 циклов реакции, состоящих из 95 ° С в течение 1 минуты для денатурации; 61 ° C в течение 0,5 минуты для отжига; 72 ° C в течение 2 минут для удлинения. Наконец, реакционную смесь выдерживали при 72 ° С в течение 10 минут.

Продукты ПЦР подвергали электрофорезу в 1,5% -ном агарозном геле в 10 × TAE-буфере. В геле-электрофорезе использовали бромид этидия в соотношении 1:10, 100 б.п. ДНК-лестницы (Promega Cooperation, USA) и оранжевый 6 × загрузочный краситель. Гель был визуализирован в световом шкафу Multi-image ™ с использованием Alpha Innotech версии 1.2.0.1 (Alpha Innotech Corporation). Все члены рода Mycobacterium производят полосу 1030 пар оснований и M. avium или подвидов, таких как M. avium subsp. паратуберкулез производит дополнительную полосу 180 б.п., M. intracellularae — полоса 850 п.о., а полоса 372 п.о. может быть усилена от членов МТС.

Налицо удаление RD4 было проведено на изолятах, которые показали полосу, рассматриваемую как специфичную для MTC мультиплексной ПЦР. Для этой типизации удаления процедура Кадмуса и др. [24] последовали. Праймеры, которые были использованы, включают RD4 FlankF 5′-CTC GTC GAA GGC CAC TAA AG-3 ‘, RD4 FlankR 5′-AAG GCG AAC AGA TTC AGC AT-3′ и RD4 Внутренний 5’-ACA CGC TGG CGA AGT ATA GC -3 ‘, чтобы проверить наличие локуса RD4. Система HotStarTaq Master Mix от Qiagen использовалась для ПЦР с праймерами, описанными выше. M. tuberculosis H37Rv и M. bovis использовали в качестве положительного контроля, тогда как вода Qiagen служила отрицательным контролем.

Реакционную смесь, состоящую из 10 мкл HotStarTaq Master Mix, 0,3 мкл каждого из трех праймеров (RD4 FlankR, RD4 FlankF и RD4 Internal), 2 мкл ДНК-матрицы и 7,1 мкл H2O Qiagen, добавляя до конечного объема 20 мкл, нагревали в Thermal Cycler (Applied biosystem; PTC-100 ™) до 95 ° C в течение 15 минут. Затем проводили 35 циклов, состоящих из дезатурации при 95 ° С в течение 1 минуты, отжига при 55 ° С в течение 1 минуты и растяжения при 72 ° С в течение 1 минуты. Наконец, реакционную смесь выдерживали при 72 ° С в течение 10 минут.

Продукты ПЦР подвергали электрофорезу в 1,5% агарозном геле в 10 × TAE бегущем буфере с бромидом этидия в соотношении 1:10. Для визуального отслеживания миграции ДНК во время электрофореза были использованы ДНК-лестница на 100 п.н. (Promega Cooperation, США) и оранжевый 6 × загрузочный краситель. Гель визуализировали аналогично тому, как описано выше. Присутствие RD4 (M. tuberculosis, M. africanum) дает размер продукта 335 п.о. (RD4 Internal + RD4 FlankR) и в его отсутствие (M. bovis) продукт 446 пар оснований (RD4 FlankR + RD4 FlankF) является усиливается.

Тирацию удаления RD9 применяли к изолятам, которые показали наличие области RD4. Для этой типизации удаления процедура, описанная Cadmus и др. [24] последовали. Праймерами, используемыми для типизации удаления RD9, были RD9 FlankF, 5′-AAC ACG GTC ACG TTG TCG TG-3 ‘, RD9 FlankR, 5′-CAA ACC AGC AGC TGT CGT TG-3′ и RD9 Internal, 5’-TTG CTT CCC CGG TTC GTC TG-3 ‘. Смесь нагревали в Thermal Cycler (Applied Biosystems, PTC-100 ™), используя начальный горячий старт 95 ° C в течение 15 минут, затем 35 циклов 95 ° C в течение 1 минуты, 55 ° C в течение 2 минут и 72 ° С в течение 1 минуты; конечный шаг расширения 72 ° C в течение 10 минут для завершения цикла. Каждая реакционная пробирка для ПЦР содержала 7,1 мкл H2O Qiagen, 10 мкл HotStarTaq Master Mix, 0,3 мкл каждого из трех праймеров (конечная концентрация 1,5 мкМ), 2 мкл шаблонов ДНК образцов или контролей, составляющих общий объем 20 мкл. M. tuberculosis H37Rv и M. bovis использовались в качестве положительных контролей, тогда как вода Qiagen служила отрицательным контролем.

ПЦР-электрофорез продукта и визуализация выполнялись с помощью аналогичной методики, описанной выше. Присутствие RD9 (т.е. M. tuberculosis) дает размер продукта 396 п.о. (RD9 FlankF + RD9 Internal), а его отсутствие (M. africanum, M. bovis) дает размер продукта 575 п.о. (RD9 FlankF + RD9 FlankR) ,

Сполиготипирование — это метод на основе ПЦР, который использует изменчивость области прямого повторения (ДР), разработанной для одновременного обнаружения и определения комплекса M. tuberculosis. Сполиготипирование проводили, как описано ранее Kamerbeek et al. [25] и в соответствии с инструкциями поставщика комплектного полотна (Ocimum Biosolutions Company, Ijsselstein, Нидерланды). Область DR амплифицировали с помощью ПЦР с использованием олигонуклеотидных праймеров (DRa: 5 ‘GGT TTT GGG TCT GAC GAC 3’ и DRb: 5 ‘CCG AGA GGG GAC GGA AAC 3′), полученных из последовательности DR. DRa биотинилируется на 5’-конце. Для ПЦР использовали общий объем 25 мкл следующей реакционной смеси: 12,5 мкл HotStarTaq Master Mix (Qiagen: этот раствор обеспечивает конечную концентрацию 1,5 мМ MgCl2 и 200 мкМ каждого дезоксинуклеотида трифосфата), 2 мкл каждого праймера (20 пмоль каждый), 5 мкл суспензии убитых с высокой температурой клеток (приблизительно от 10 до 50 нг) и 3,5 мкл дистиллированной воды.

Смесь нагревали в течение 15 мин при 96 ° С и затем подвергали 30 циклам 1 минуту при 96 ° С, 1 мин при 55 ° С и 30 с при 72 ° С. Амплифицированный продукт гибридизовали с набором из 43 иммобилизованных олигонуклеотидов, каждый из которых соответствовал одной из уникальных последовательностей ДНК-спейсера в локусе DR. После гибридизации мембрану промывали дважды в течение 10 минут в 2 × SSPE (1 × SSPE составляло 0,18 М NaCl, 10 мМ NaH2PO4 и 1 мМ ЭДТА [рН 7,7]) / 0,5% додецилсульфата натрия при 60 ° С, а затем инкубировали в 1: 4000 разведенной пероксидазы стрептавидина (Boehringer) в течение 45-60 минут при 42 ° C. Затем мембрану дважды промывали в течение 10 минут в 2 × SSPE-0,5% додецилсульфате натрия при 42 ° С и промывали 2 × SSPE в течение 5 минут при комнатной температуре. Гибридизирующая ДНК была обнаружена с помощью усовершенствованного метода хемилюминесценции (Amersham) и подвергнута воздействию рентгеновской пленки (Hyperfilm ECL, Amersham), как указано изготовителем.

Собранные данные были дважды введены, классифицированы, отфильтрованы и закодированы с использованием Microsoft Excel® 2007 и проанализированы с использованием программного пакета STATA 10.1 (StataCorp, Texas, USA). Одномерный анализ проводили с использованием теста Chi-squared. Логистическая регрессия затем использовалась для анализа факторов риска, которые были обнаружены, что было значительно связано с одномерным анализом с отсечкой P≤ 0,2. Эффекты были представлены как статистически значимые, если значение Р было меньше 0,05.

В общей сложности 841 свиньи были осмотрены в двух скотобойнях, где они использовались для настоящего исследования: более 62% были из Аддис-Абебы и 39% находились в Бишофу-Абатхолле. Большинство (67%) свиней были менее одного года. Свиньи были привезены на убой главным образом из Бишофту (60%) и Аддис-Абебы и соседней Особой зоны Оромии (30%). Восемьдесят восемь процентов свиней кормили коммерческим смешанным кормом, в то время как только 12% кормили пиллом, субпродуктами домашней птицы и мусором в дополнение к выпасам на пастбище и / или роуминг для мусора.

Обнаружение грубых поражений, вызывающих туберкулез в любой ткани, использовалось для классификации ткани с поражением ТБ (рис. 1). Распространенность туберкулеза у свиней составляла 5,8% (49/841) на основании патологических поражений. Это было значительно выше у старших свиней (более одного года), чем у более молодых (один год и менее) свиней (10,8% против 3,4%, χ2 = 18,85, P <0,001, таблица 1).

Туберкулезные поражения в различных тканях свиней при убое. Туберкулезные поражения, отмеченные сплошными стрелами в различных лимфатических узлах свиней при убое. Бронхиальный лимфатический узел (A), подчелюстные лимфатические узлы (B, C) и увеличенный средостенный лимфатический узел (D).

Одномерный анализ потенциальных факторов риска, связанных с наличием больших поражений ТБ у убойных свиней

№ исследования: количество свиней, обследованных на валовое поражение ТБ.

Нет положительного: количество туши с общим поражением ТБ.

Кроме того, происхождение свиней было значительно связано с распространенностью (χ2 = 27,67, P <0,001, таблица 1). Свиньи из Аддис-Абебы и близлежащей Особой зоны Оромии имели самую высокую распространенность 12,8%. Аналогичным образом, распространенность была затронута практикой кормления (P <0,05) и местом скотобойни (P <0,05). Свиньи, которые содержались в свободном пастбище и питались одним или несколькими отливками, домашней птицей или оставлялись для бродяг для мусора, имели туберкулез, наводящие на грубые повреждения чаще, чем те, которые питались коммерческим смешанным кормом. Напротив, различия в распространенности между полом, типом пола и источником воды не были статистически значимыми (P> 0,05, таблица 1).

Возраст и происхождение животных были хорошими показателями распространенности туберкулеза у убитых свиней в исследуемых районах (таблица 2). Пожилые свиньи были более чем в два раза (OR = 2,55, CI = 1,36: 4,78, P = 0,004), что может привести к большим повреждениям ТБ, чем свиньи менее одного года. Аналогичным образом, происхождение свиней значительно повлияло на распространенность туберкулеза. Свиньи из Аддис-Абебы и соседней особой зоны Оромии были более чем в три раза (OR = 3,29, CI = 1,69: 6,41, P <0,001), которые, вероятно, демонстрируют туберкулезное поражение на убой, чем свиньи из Bishoftu.

Многомерный анализ потенциальных факторов риска, связанных с наличием больших поражений ТБ у убойных свиней

Гротевые ТБ-наводящие повреждения были собраны из подчелюстных, брыжеечных, средостенных и бронхиальных лимфатических узлов и из тканей легких и печени. Положительность микобактериальной культуры на LJ-среде, обогащенной глицерином, наблюдалась у 30,6% (15/49) исследуемых тканей. Никакого роста не наблюдалось на средах LJ, обогащенных пируватом. Десять из этих изолятов были AFB положительными на окрашивание Ziehl-Neelsen. Обычно поражения чаще наблюдались в лимфатических узлах и тканях пищеварительного тракта, чем в дыхательных путях. Процент бóльших поражений ТБ был самым высоким в подчелюстных лимфатических узлах (28%) и самым низким в средостенных лимфатических узлах (7%). Позитивность культуры наблюдалась на образцах из брыжеечных (20%) и подчелюстных (40%) лимфатических узлов и легких (40%).

Для штамма Mycobacterium genus были напечатаны десять убитых положительных изолятов AFB (рис. 2). Было подтверждено, что шесть изолятов (Лейн 5, 6, 7, 8, 9 и 11) принадлежат к Genus Mycobacterium, поскольку они имеют размер полосы 1030 п.о., характерный для этого рода. Пять из них показали дополнительный размер полосы 372 п.о., что свидетельствует о MTC, в то время как другой изолят (Lane 9) не продуцировал эту полосу. Остальные четыре изолята не создавали никакой полосы.

Разделение гель-электрофорезом продуктов ПЦР мультиплексного типа PCR на штаммах mycobacteria от свиней. Лестница 1: 100 п.н. Лейн 2: M. tuberculosis H37Rv (положительный контроль); Дорожка 3: Qiagen H2O (отрицательный контроль); Лейн 4: M. avium (положительный контроль); Дорожки 5-14 отделяют образцы от свиней.

Затем пять изолятов MTC подвергали удалению RD4 и типизации удаления RD9 (фотография не показана) с использованием праймеров, указанных в разделе методов. ПЦР-продукты размером 335 б.п. (для RD4) и 396 п.о. (для RD9) наблюдались во всех изолятах и, таким образом, подтверждали, что они являются M. tuberculosis.

Характеристика изолятов M. tuberculosis переносилась сполиготипированием. Три сполиготипа, два кластера с двумя изолятами каждый (один из них новый), и был обнаружен последний с уникальным рисунком только с одним изолятом. Один из кластеров классифицирован в SIT-1088, а последний — в SIT-1995 по базе данных Spoligo-International-Typing [26,27], а другой кластер ранее не был описан в базе данных (рисунок 3).

Диаграммное представление шаблонов сполиготипов трех кластеров из пяти изолятов M. tuberculosis из пяти свиней, забитых в центральной Эфиопии. Пять изолятов M. tuberculosis были получены из TB-совместимых тканевых поражений убойных свиней. Эти пять изолятов показали три различных шаблона сполиготипа. Они были SIT1088 (2 изолята), SIT1195 (один изолят), а два изолята (New) представляли идентичные шаблоны, которые ранее не сообщались в базу данных soligotype. SIT = Spoligo-International-Typing number в соответствии с базами данных SpolDB4 / SITVIT [26,27].

В настоящем исследовании возникновение туберкулеза было исследовано убойных свиней в двух скотобойнях Аддис-Абебы и Бишофту. Несмотря на то, что в последние годы свиноводческая промышленность растет, и во многих районах страны создается множество свиней, общественные убоя осуществляются только в болотной фабрике Аддис-Абеба-Абтауирс. Деятельность по контролю за мясом находится под пристальным наблюдением федерального министерства сельского хозяйства, где каждый каркас проверяется признанным мясным инспектором. Бойня в Бишофту входит в частную свиноферму, где убивают небольшое количество свиней. Каркас не проверяется инспекторами мяса на этой бойне. В дополнение к этим двум бойням — несколько побочных действий на заднем дворе во многих мелкомасштабных системах производства свиней, которым благоприятствует растущий спрос на свинину со стороны иностранцев, особенно китайцев, проживающих в этих регионах.

Это исследование является первым в своем роде в Эфиопии для изучения молекулярной эпидемиологии туберкулеза у свиней. Были применены посмертные и бактериологические исследования, а также молекулярная типизация. Предполагаемая распространенность туберкулеза составляла примерно 6% и была ниже, чем оценки распространенности, данные из других африканских стран, включая Камерун [28], Египет [3] и Уганду [29]. С другой стороны, он выше, чем в развитых странах, включая Новую Зеландию [4], Нидерланды [17], Чехию [12] и США [30]. Такие различия в распространенности туберкулеза у свиней между развивающимися и развитыми странами могут быть связаны с искоренением ТБ у людей и крупного рогатого скота в развитом мире, где крупный рогатый скот служил источником инфекции свиньям [30,31].

Значительная связь была выявлена ​​среди возрастных классов и распространенности поражения ТБ у свиней. Туберкулезные поражения чаще встречались у старших свиней, чем у молодых свиней, что может быть связано с хронической природой заболевания, что требует более длительного времени для выявления обнаруживаемых повреждений и из-за более длительного периода воздействия у старших свиней. Эти результаты согласуются с сообщениями других стран и других видов животных [29,32,33].

Было обнаружено, что свиньи, которые содержались на свободном пастбище и кормились слюной, субпродуктами или левыми, чтобы бродить по мусору, в два раза чаще принимали микобактериальные инфекции, чем те, которые питались коммерческим смешанным кормом, хотя разница не была признана значительной. Сообщалось о вспышках M. tuberculosis у свиней, которые были связаны с кормлением сырого мусора из больниц или жилых домов с человеческими заболеваниями [30].

Более высокая оценочная распространенность была зарегистрирована у свиней из Аддис-Абебы и Особой зоны Оромии по сравнению с теми, кто был убит в Бишофту. Этот вариант может быть отражением системы животноводства в том, что свиньи выращиваются в Аддис-Абебе и близлежащей специальной зоне Оромии, где животные содержатся в условиях плохого ведения сельского хозяйства, таких как кормление, птица, подсобное животное и мусор; убежище с другими домашними животными и заключение в бедных жилищных системах и там, где они тесно связаны с другими животными и людьми. В Эфиопии традиционная система малых масштабов, которая является преобладающей системой производства свиней, особенно в Аддис-Абебе и ее близлежащей специальной зоне Оромии, характеризуется отсутствием или минимальным медицинским обслуживанием, дополнительным питанием и надлежащим жильем. Сообщалось, что производство свиней агрегируется в центральной части страны [34], что также может способствовать передаче микобактериальных инфекций среди различных ферм путем перемещения свиней с одной фермы на другую, особенно во время создания новых ферм ,

Повреждения, вызывающие туберкулез, наблюдались в легких, печени, голове и были связаны с брыжеечными лимфатическими узлами. Поражения появляются чаще в голове, в брыжеечных лимфатических узлах и в печени. Наличие туберкулезных поражений в печени, лимфатических узлов головы и мезентерий может указывать на инфекцию при проглатывании зараженного корма, субпродуктов или инфекции при очистке от загрязненного мусора [30,32], тогда как поражения в легком и связанные с ним лимфатические узлы предполагают воздушную передачу [35]. Наблюдение более высокой доли (> 65%) поражений в лимфатических узлах головы и органов желудочно-кишечного тракта свидетельствует о том, что проглатывание является наиболее распространенным способом передачи у свиней. Ранее сообщалось об аналогичных наблюдениях из Уганды [29,30]. Однако это не может исключить воздушную передачу у свиней.

Только около 31% поражений привело к росту микобактерий в культуре. Сообщалось о более низкой скорости роста микобактерий из тканей с крупными поражениями туберкулеза из Чехии [12], Египта [3], Уганды [29] и многих других стран [30]. Неспособность продемонстрировать туберкулезные бациллы может быть связана с появлением исцеленных процессов, которые не содержат более жизнеспособных туберкулезных бацилл или микроорганизмов, отличных от туберкулезных бацилл, вызывающих поражения, таких как Rhodococcus equi или R. sputi, или неадекватности методов, используемых для выделения бугорков бациллы [30,32]. Это также может быть связано с субъективными различиями в выявлении туберкулезных поражений [20]. Тем не менее, культивирование туберкулезных бацилл от таких поражений требует дальнейшего изучения, чтобы обеспечить максимальный выход жизнеспособных организмов из культуры для правильной интерпретации результатов и тем самым надлежащим образом объяснить масштабы заболевания.

Выделение M. tuberculosis, являющегося преобладающим агентом туберкулеза у людей [1], от свиней предполагает передачу между человеком и свиньями, что может произойти в результате тесного контакта между двумя видами [3], кормлением недоваренного мусора или путем выделения мокроты или тела у инфицированных лиц [30]. Выделение M. tuberculosis в легком и связанных с ним лимфатических узлах также поддерживает идею, предложенную Паррой и коллегами [36], что свиньи не являются тупиковыми хозяевами туберкулеза млекопитающих. Предыдущие исследования предполагали межвидовую передачу микобактерий в Эфиопии [19,20,37-40]. Аналогичные результаты были также получены из других стран, где бремя ТБ у людей и животных велико, и где передача между этими двумя людьми, вероятно, будет происходить на регулярной основе [3,41]. Тем не менее, большинство отчетов из развитых стран показали, что поражения туберкулеза у свиней связаны с членами МАС [17,30,42-44]. Принимая во внимание тот факт, что такие доклады поступают из стран, где существует программа борьбы с туберкулезом для млекопитающих, эта разница может быть связана с контролем за туберкулезом, достигнутым этими странами [42].

В начале 20-го века, когда туберкулез у крупного рогатого скота и людей был более распространенным, туберкулез у свиней был либо из-за M. bovis, либо у M. tuberculosis. Однако, например, в США птичий тип ТБ стал чаще встречаться у свиней к 1925 году. Сегодня изоляция микобактерий, отличных от M. avium от свиней, встречается редко в США. В редких случаях это происходит у свиней, которые содержатся в тех же помещениях с зараженным крупным рогатым скотом M. bovis или которые находятся в тесном контакте с инфицированными M. tuberculosis людьми [42]. После применения строгих правил для политики в отношении испытаний и убоя распространенность бычьего типа туберкулеза у свиней постепенно снижалась одновременно с искоренением болезни у крупного рогатого скота в большинстве западных стран [17,30,31].

В этом исследовании один из положительных изолятов AFB имел размер продукта ПЦР, показанный для Genus Mycobacterium, но ни один для MTC или MAC при наборе родов с использованием мультиплексной ПЦР. Следовательно, изолят считается членом микобактерий, отличных от туберкулеза (MOTT). Ранее из других стран сообщалось о выделении MOTT от свиней [3,4]. В Эфиопии МОТТ были изолированы от крупного рогатого скота [20] и верблюдов [33] с туберкулезными поражениями, что указывает на их участие в широком спектре видов животных [45] и их роль в качестве причины туберкулеза.

Два изолята в одном из кластеров с идентифицированным SIT1088 были обнаружены в Египте [46], Индии, Южной Африке и Португалии, а другой отдельный изолят, идентифицированный как SIT1995, был зарегистрирован из Индии [27]. В Эфиопии несколько исследований недавно сообщили о новых штаммах M. tuberculosis [20,33,40,47].

Выделение M. tuberculosis у свиней указывает на возможный риск межвидовой передачи, особенно между свиньями и людьми. Учитывая это предположение и ожидаемое быстрое расширение производства свиней в течение нескольких десятилетий, вполне вероятно, что свиньи могут сыграть определенную роль в увеличении заболеваемости туберкулезом в стране. Следовательно, рекомендуется применять возможные методы контроля.

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Все авторы участвовали в разработке исследования, GA и SMA, задуманного в исследовании, проводили культивирование и молекулярную типизацию, проводили статистический анализ и составляли рукопись. SMA собрала образцы и эпидемиологические данные. Все авторы рассмотрели и утвердили окончательную рукопись.

Авторы благодарят: Университет Аддис-Абебы и Freie Universität Berlin за поддержку в течение всего периода исследования, Институт патологии в Аклилу-Лемме для обеспечения лабораторными средствами и реагентами и его лабораторными кадрами для их сотрудничества во время лабораторных работ. В исследовании участвовали Программа сотрудничества стран Африки, Карибского бассейна и Тихоокеанского региона — Европейского союза (ACP-EU) по высшему образованию (EDULINK) и Министерство сельского хозяйства, Эфиопия. Университет Гондэра финансировал первый автор в течение учебного периода. Авторы также хотели бы поблагодарить Аддис-Абеба-Абатйерс-Энтерпрайз и Алема-свиноферм.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *