Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Саркоидоз и профили цитокинов туберкулеза: неразличимы в бронхоальвеолярном лаваже, но различаются по крови

Sarcoidosis and Tuberculosis Cytokine Profiles: Indistinguishable in Bronchoalveolar Lavage but Different in Blood
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3398021/

Задуманные и разработанные эксперименты: MT CE MEW DM AL. Выполняли эксперименты: MT CE. Проанализированы данные: MT CE AML. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: LP SHW SS JM OMK MW AW. Написал документ: MT CE MEW DM AL.

Клиническое, радиологическое и патологическое сходство между саркоидозом и туберкулезом может затруднить дифференциацию болезни. Усложняющим фактором является то, что некоторые случаи саркоидоза могут быть инициированы микобактериями. Мы предположили, что иммунологическое профилирование может дать представление о возможной взаимосвязи между заболеваниями или позволить нам различать их.

Мы проанализировали бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) при саркоидозе (n = 18), туберкулезе (n = 12) и здоровых добровольцах (n = 16). Мы дополнительно исследовали образцы сыворотки в тех же группах; саркоидоз (n = 40), туберкулез (n = 15) и здоровые добровольцы (n = 40). Был проведен поперечный анализ множественных профилей цитокинов и данные, используемые для различения образцов.

Мы обнаружили, что профили БАЛ неразличимы между обоими заболеваниями и значительно отличаются от здоровых добровольцев. В сыворотке пациенты с туберкулезом имели значительно более низкий уровень интерлейкина-4 (IL-4) цитокина Th2, чем у пациентов с саркоидозом (p = 0,004). Дополнительные различия в сыворотке позволили нам создать модель линейной регрессии для дифференциации болезни (точность в пределах образца — 91%, точность перекрестной проверки — 73%).

Эти данные гарантируют репликацию в независимых когортах для дальнейшей разработки и проверки подписи цитокинов в сыворотке, которые могут отличать саркоидоз от туберкулеза. Системные различия в цитокине Th2 между саркоидозом и туберкулезом также могут быть в значительной степени различными последствиями заболевания для подобных респираторных стимулов.

Имеются многочисленные анекдотические сообщения пациентов с общими респираторными воздействиями, которые впоследствии развивают различные заболевания. Одно из таких интригующих исследований — монозиготные близнецы. Один из близнецов, представленный диспетчером, плевральный выпот, сильно положительный Манту и отрицательный тест Квейма, а затем соответствующим образом отреагировал на противотуберкулезную терапию. Другой близнецы отрицали респираторные симптомы, но рентгенограмма грудной клетки выявила двустороннюю внутригрудную лимфаденопатию, тест Квейма был положительным и клинический курс соответствовал саркоидозу [1].

Микобактериальное участие в патогенезе саркоидоза остается спорным вопросом. Вспомогательные доказательства включают сходство в клинической и рентгенографической картине [2], идентификацию микобактериальной ДНК в саркоидных гранулемах [3] и обнаружение в некоторых когортах саркоидоза периферической крови и бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) INFγ-опосредованных ответов Т-клеток на микобактериальные белки таких как KatG [4]. Напротив, доказательства против отношений включают заметные различия в участках внелегочной болезни и стратегии лечения [2], а также отсутствие INF-опосредованных ответов Т-клеток на иммунодоминантные микобактериальные белки ESAT-6 и CFP-10 при большом мировом саркоидозе исследования [5] — [7].

Профиль Т-клеток в клетках БАЛ саркоидоза смещен в сторону Th1-цитокинов [8] с аналогичными результатами при туберкулезе [9]. Эта картина отличается от той, которая наблюдается при атопической астме, которая проявляет предвзятость Th2 [10] или гиперчувствительный пневмонит, который проявляет сильный ответ Th17 [11]. В отличие от БАЛ, в обоих случаях мало изучено профиля цитокинов в сыворотке.

Мультиплексированный белковый анализ все чаще используется для иммунологического профилирования и идентификации биомаркеров, где точная быстрая диагностика имеет первостепенное значение [12] с многообещающими данными по ряду заболеваний, включая системную красную волчанку [13] и рак предстательной железы [14].

Анализ профилей цитокинов у пациентов с саркоидозом и туберкулезом с демографически подобранными данными может дать дополнительную информацию о любых взаимосвязи между обоими заболеваниями или разрешить идентификацию диагностических сигнатур. Поэтому мы решили исследовать нестимулированные образцы БАЛ и сыворотки при легочном саркоидозе, туберкулезе легких и здоровом контроле путем измерения цитокиновой панели, которая наилучшим образом представляла спектр иммунного процесса, связанного с обоими заболеваниями, включая Th1 (INFγ, TNFα) и Th2 (IL-4 , IL-5, IL-13), стимуляция Т-клеток (IL-2, IL-12), активация макрофагов (Il-1b), образование гранулемы (IL-8) и ограничение воспаления (IL-10) , Мы считаем, что данные, приведенные здесь, достигли этих целей и открывают путь к дальнейшей работе по выявлению сигнатур цитокинов сыворотки для различения обоих заболеваний.

Все участники были завербованы после предоставления письменного информированного согласия, и этическое разрешение на исследование было получено Комитетом по этике Святой Марии (ссылка 07 / H0712 / 85).

Все пациенты с туберкулезом или саркоидозом имели легочную болезнь, свидетельствующие о дополнительном внелегочном участии в меньшем числе случаев. Образцы туберкулеза были взяты из подтвержденных культурой случаев. Образцы саркоидоза были взяты у пациентов с сильным клиническим диагнозом, поддерживающей гистологией и последующим клиническим течением в соответствии с первоначальным диагнозом в соответствии с рекомендациями Американского торакального общества [15]. Образцы туберкулеза и саркоидоза были взяты из больницы Св. Марии в Лондоне и Королевской больницы Бромптон в Лондоне и соответствовали по возможности для возраста, пола и этнической принадлежности. Все больные образцы БАЛ были взяты до начала любого лечения. Образцы сыворотки саркоидоза брали у пациентов при минимальной стероидной терапии (≤10 мг преднизолона в день) и других иммуносупрессивных препаратов. Здоровые образцы добровольцев были взяты из двух не связанных между собой исследований в Центре респираторной инфекции Императорского колледжа. Все здоровые добровольцы были набраны из Лондона. Они не были специально подвергнуты скринингу на латентное заболевание туберкулеза (с использованием IGRA или Tuberculin Skin Testing), но у них не было доказательств респираторного заболевания и других серьезных сопутствующих заболеваний. Все образцы были собраны в течение 24 месяцев. Демографические данные для всех лиц показаны в таблице 1.

Обработка происходила в условиях изоляции 2 категории. Жидкость BAL собирали с использованием стандартных рекомендаций в Imperial College NHS Trust после введения в воздуховоды примерно 90 мл 0,9% солевого раствора с возвратом приблизительно 40 мл. Затем жидкость пропускали через апертурную сетку размером 100 мкм. Сыворотку обрабатывали из крови, которую давали сгущать в течение 60 мин перед центрифугированием при 1000 г в течение 10 минут при комнатной температуре (RT). Все образцы хранили при -80 ° С в течение 90 минут сбора.

Анализ мультиплексных цитокинов проводили в предварительно покрытых 96-луночных планшетах (сверхчувствительный анализ человека TH1 / TH2 10 plex, Meso Scale Discovery — MSD, Мэриленд, США). 25 мкл разбавителя 2 диспергировали в каждую лунку. Пластину герметизировали и инкубировали энергичным горизонтальным встряхиванием в течение 30 минут при комнатной температуре. 25 мкл образца (жидкость BAL, сыворотка или внутренний стандарт) добавляли на лунку и все образцы измеряли в двух экземплярах. Плиты герметизировали и инкубировали энергичным горизонтальным встряхиванием в течение двух часов при комнатной температуре. Планшеты трижды промывали 0,05% Tween 20 (Abcam, Cambridge, UK) в PBS (Sigma-Aldrich, UK). На каждую лунку помещали 25 мкл раствора 1 × антитела для обнаружения, а запечатанные планшеты инкубировали энергичным горизонтальным встряхиванием в течение двух часов при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза 0,05% Твин 20 в PBS. В каждую лунку добавляли 150 мкл 2 × считывающего буфера Т. Пластины анализировали с использованием программного обеспечения MSD SECTOR Imager 2400 и Discovery Workbench 3.0 (как из Meso Scale Discovery, США). Среднее значение двух скважин принималось за записанное показание при условии, что коэффициент вариации (CV) составлял менее 10%. Концентрации, зарегистрированные ниже стандартной, сохранялись как абсолютные значения. Для целей логарифмического анализа показания 0 были скорректированы до 0,01 пг / мл.

Для каждого прямого сравнения (саркоидоз против туберкулеза, саркоидоз против здорового и туберкулеза против здорового) значение p рассчитывали с использованием теста Манна-Уитни для каждого цитокина. Значения P были скорректированы для множественных сравнений с использованием поправки Bonferroni (умножая каждое значение p на 10). Анализ данных выполнялся с использованием GraphPad Prism версии 5.04 для Macintosh (La Jolla, Калифорния, США). Чтобы создать классификационное правило для различения заболеваний, логистическая регрессия частичных наименьших квадратов (PLS) была проведена с использованием пакета gpls в версии R 2.13.1 (R Foundation for Statistics Computing, Vienna, Austria). Для модели логической регрессии, найденной PLS, была рассчитана частота ошибочной классификации образцов. Для получения оценки ошибки предсказания модели логистической регрессии PLS была использована перекрестная валидация «один-одинешний».

(A) профиль цитокинов BAL, (B) уровни BAL уровней TNFα и (C) BAL IL-13.

Профили цитокинов при остром легочном саркоидозе и активном легочном туберкулезе БАЛ (все из необработанных пациентов в течение 2 недель после постановки диагноза) были неотличимы друг от друга (табл. 2 и рис. 1а). Медианные уровни Th1-цитокинов INFγ и TNFα были выше при обоих заболеваниях по сравнению с здоровыми БАЛ, и это повышение было значительным (p <0,05) с TNFα (рис. 1b).

Средний уровень БАЛ Th2 цитокинов IL-4 и IL-13 (рис. 1c) был значительно выше при саркоидозе и туберкулезе по сравнению со здоровыми БАЛ (p <0,001). Повышенные уровни IL-5 были обнаружены у больных БАЛ по сравнению со здоровыми, но это увеличение достигло статистической значимости только при туберкулезе. Уровни IL-1β и IL-10 значительно повышались при обоих заболеваниях по сравнению с здоровыми БАЛ, тогда как уровни IL-2 были значительно увеличены при саркоидозе. Уровни IL-12p70 и IL-8 не были существенно различны для любой группы.

Уровни сыворотки Th1-цитокинов INFγ и TNFα достоверно повышались как при легочном саркоидозе, так и при туберкулезе легких по сравнению с здоровыми добровольцами (табл. 2 и рис. 2а). Уровни IL-2 и IL-8 были повышены при обоих заболеваниях по сравнению с здоровыми добровольцами, но они повышались только до статистической значимости при саркоидозе. Более низкие уровни IL-1β были обнаружены при обоих заболеваниях по сравнению с здоровой сывороткой, имеющей значение при саркоидозе, и чуть ниже значения туберкулеза (скорректировано p = 0,059). Уровни сыворотки IL12p70 и IL-10 существенно не различались между любыми группами.

(A) профиль цитокинов сыворотки и (B) уровни IL-4 в сыворотке крови при легочном саркоидозе, туберкулезе легких и здоровых добровольцах; и (C) уровни IL-4 в сыворотке крови при остром легочном саркоидозе, активном туберкулезе легких и здоровых добровольцах.

Напротив, уровни сывороточных Th2-цитокинов IL-4, IL-5 и IL-13 были снижены при обоих заболеваниях по сравнению с здоровыми добровольцами. Важно отметить, что уровни IL-4 в сыворотке были значительно ниже (p = 0,004) при туберкулезе по сравнению с саркоидозом (рис. 2b), и эти различия сохранялись при сравнении пациентов с острым легочным саркоидозом и активным туберкулезом легких, все из которых были завербованы до начало соответствующего лечения (рис. 2в). Уровни IL-5 и IL-13 также были ниже при туберкулезе, хотя эти различия не достигли статистической значимости. При детальном анализе сывороток легочного саркоидоза не наблюдалось существенных различий в любом измеренном цитокине в отношении присутствия легочного фиброза, наличия внелегочной болезни или продолжительности времени после постановки диагноза (данные не показаны).

Для дифференциации между саркоидозом и туберкулезом применялся целевой биоинформационный подход к использованию различий в цитокинах сыворотки. Частичные наименьшие квадраты использовались для создания модели логистической регрессии, сравнивающей значения всех сывороточных цитокинов. Наиболее подходящей моделью было log (P (Tuberculosis) / P (саркоидоз)) = 1.214 + 8.884 * IL1 + 0,075 * IFN + 0,32 * IL12p70 + 0,039 * TNF — 0,097 * IL5 — 0,015 * IL8 — 0,73 * IL13 — 0,606 * IL10 — 2.404 * IL2 — 4.231 * IL4. Правило классификации заключалось в том, чтобы классифицировать образец как туберкулез, если log (P (туберкулез) / P (саркоидоз)) больше нуля или как саркоидоз в противном случае.

Применяя эту модель к данным, наблюдаемые и предсказанные группы заболеваний для сывороток были зарегистрированы (рис. 3). Созданная модель имела коэффициент ошибочной классификации внутри образца 9% (5/55 сывороток), то есть позволял предсказать, был ли образец сыворотки саркоидозом или туберкулезом с точностью 91%. Частота ошибок внутри образца, возможно, является недооценкой истинной ошибки прогнозирования этой модели, поскольку одни и те же данные использовались как для модели, так и для оценки ее точности. Таким образом, анализ «выбытия» был выполнен для перекрестной проверки и использовался для получения лучшей оценки ошибки прогнозирования, которая составляла 27% (15/55).

Отделение цитокинов между БАЛ и сывороткой (с точки зрения определения более высокой концентрации) было сходным при остром легочном саркоидозе и активном туберкулезе легких для всех 10 цитокинов (рис. 4а). С Th2 цитокинами различия были очевидны по сравнению с здоровыми группами, например. медианы уровней IL-4 были выше в БАЛ, чем в сыворотке при саркоидозе (отношение БАЛ: сыворотка = 5,39) и туберкулезе (соотношение = 2,01), но эта картина была отменена у здоровых добровольцев, где почти не было измерено IL-4 в БАЛ давая соотношение меньше 1 (фиг.4b-d). Наблюдаемые закономерности также наблюдались там, где данные были доступны у тех же пациентов, что и на рисунке 4е, например. 11 из 14 пациентов с саркоидозом имели значительно более высокий уровень IL-4 в БАЛ, чем их сыворотка (p = 0,0062).

(A) БАЛ: соотношение цитокинов сыворотки, наблюдаемое при легочном саркоидозе и туберкулезе легких, (B) БАЛ и уровни IL-4 в сыворотке крови при легочном саркоидозе, (C) БАЛ и уровни IL-4 в сыворотке крови при туберкулезе легких, (D) БАЛ и уровни IL-4 в сыворотке крови у здоровых добровольцев и (E) соответствуют BAL и уровни IL-4 в сыворотке крови при легочном саркоидозе.

Это первое исследование для сравнения профилей цитокинов как периферически, так и в месте заболевания у пациентов с саркоидозом и туберкулезом. Острый легочный саркоидоз и активный туберкулез легких имеют ряд клинических, радиологических и гистологических сходств, затрудняющих дифференциальную диагностику. Мы показали, что профили цитокинов в БАЛ обоих заболеваний кажутся неотличимыми друг от друга, но эти различия существуют в сыворотке. Что касается БАЛ, ожидалось значительное повышение TNFα (по сравнению с здоровыми добровольцами) из предыдущих исследований [16], [17], но здесь впервые показано, что на аналогичных уровнях у пациентов с демографически подобранными показаниями. Это может представлять собой общую острую фазовую реакцию, не наблюдаемую в здоровых легких. Однако TNFα имеет ряд специфических функций, включая активацию макрофагов и образование гранулемы [18], а неразличимые уровни БАЛ указывают на то, что реакция хозяина TNF в месте заболевания одинакова в обоих условиях независимо от диагноза и этиологии.

Цитокины Th2 IL-4 и IL-13 достоверно повышались при обоих заболеваниях по сравнению с БАЛ здорового контроля. На сегодняшний день исследования саркоидоза BAL T-cell несовместимы с цитокинами Th2. В одном из исследований были обнаружены уровни спонтанной секреции IL-4, сходные с здоровыми средствами контроля [19], в то время как другая обнаруженная экспрессия IL-13 мРНК была значительно увеличена по сравнению с здоровыми средствами контроля [20] в соответствии с нашими данными. Что касается туберкулеза, мы не знаем о предыдущей работе по изучению уровней БАЛ ИЛ-13, но было показано увеличение секреции IL-4 как с CD4 +, так и с CD8 + Т-клеток в активном туберкулезе легких по сравнению с таковыми со скрытой инфекцией [21]. Повышенные уровни Th2 BAL, наблюдаемые здесь, также приводили к специфической секреализации заболевания с уровнями IL-4, IL-5 и IL-13 выше в БАЛ, чем сыворотка, что было противоположно тому, что наблюдалось при здоровом контроле.

Данные цитокинов в сыворотке показывают в первый раз идентичный образ цитокинов Th1 (как продемонстрировано INFγ и TNFα) при обоих заболеваниях, значительно повышенных у здоровых добровольцев. Имеются ограниченные опубликованные данные о профилях цитокинов в сыворотке крови при любом заболевании, но в исследованиях по туберкулезу обнаружен повышенный уровень сыворотки INFγ по сравнению с здоровым контролем [22]. Основной вывод нашего исследования заключается в том, что уровень IL-4 в сыворотке крови был значительно ниже при туберкулезе по сравнению с саркоидозом. Эта разница оставалась после статистической коррекции bonferroni для множественных сравнений. Пять пациентов с туберкулезом с измеряемым IL-4 не отличались клинически или рентгенологически как группа по сравнению с большинством с неопределяемыми уровнями.

Эти различия в сыворотке позволили создать модель логистической регрессии для дифференциации обоих заболеваний с точностью 91%. Из пяти пациентов, классифицированных по модели, не было никаких клинических признаков, которые могли бы отделить их от правильно классифицированных пациентов. Проведенный один анализ был выполнен для перекрестного подтверждения нашей модели и оценки точности в независимом наборе данных, и это привело к точности 73%, что, возможно, представляло более точный уровень дискриминации в клинической практике. Недавнее транскриптомическое исследование выявило саркоидозную подпись крови, которая не могла быть дифференцирована от туберкулеза [23]. Транскриптомические подписи цельной крови не обязательно коррелируют с уровнями сывороточного белка, а альтернативные методы исследования, например, в нашем исследовании, могут обеспечить лучшие показатели активности цитокинов в сыворотке.

В одном из предыдущих исследований были определены количественные уровни мРНК IL-4 при саркоидозе и туберкулезных гранулемах в пораженных лимфатических узлах и было установлено, что четыре из восьми образцов туберкулеза выражали обнаруживаемые количества мРНК IL-4 и / или IL-5 по сравнению с необнаружимыми уровнями в шести саркоидоза [24]. Одним из объяснений этого является то, что клетки Th2 могут локализоваться на месте заболевания при туберкулезе, но не так при саркоидозе, что приводит к более высоким уровням IL-4 в сыворотке крови, обнаруженным у наших пациентов с саркоидозом. Известно, что оба заболевания, как правило, имеют преимущественно клетки Th1 в месте заболевания [8], [9], но в настоящее время имеются ограниченные опубликованные данные для теории о том, что существует различие в локализации Th2-клеток между заболеваниями. Другое исследование показало, что содержание внутриклеточного IL-4 лимфоцитов периферической крови уменьшалось у пациентов с туберкулезом легких по сравнению с здоровыми добровольцами [25], а селективное увеличение мРНК антагониста IL-4 IL-4 в периферических клетках было идентифицировано в латентная туберкулезная инфекция по сравнению с здоровым контролем [26]. Оба этих исследования периферической крови согласуются с нахождением очень низких уровней сывороточного IL-4 у большинства пациентов с туберкулезом легких.

Возможное объяснение сходства в БАЛ, но различия в профилях цитокинов в сыворотке крови заключаются в том, что как саркоидоз, так и туберкулез имеют сходные инфекционные триггеры, приводящие к идентичным иммунным ответам хозяев гранулематозного типа в легких. Это подтверждается неразличимыми уровнями всех цитокинов, измеренных в БАЛ, охватывающих спектр патогенного ответа, включая стимуляцию Т-клеток (IL-2, IL-12), активацию макрофагов (IL-1b) и образование гранулемы (TNFα, IL-8 ). Однако, несмотря на аналогичные локальные реакции на месте заболевания, системный ответ варьируется между индивидуумами, о чем свидетельствуют значительно более высокие уровни IL-4 в сыворотке (и возможное повышение уровня IL-5 и IL-13) при саркоидозе. Повышенные уровни IL-4 в сыворотке крови при саркоидозе могут отражать постоянный и продолжающийся мультисистемный воспалительный аллергический ответ на антиген, не полностью очищенный иммунной системой, в отличие от более низких уровней, наблюдаемых при туберкулезе. Важно отметить, что не было различий в распространенности астмы или ХОБЛ между группами саркоидоза и туберкулеза, поэтому это не отвечает за различия, наблюдаемые в профилях Th2 в сыворотке.

Ряд заболеваний аномального иммунитета хозяина, таких как хроническая болезнь трансплантата против хозяина [27] и системный склероз [28], характеризуются клетками Th2, секретирующими IL-4, которые впоследствии играют роль в активации и рекрутировании В-клеток, продуцирующих IgE, мачту клеток и эопсинофилов. Более высокие уровни IL-4, наблюдаемые при саркоидозе, могут также объяснять ответ периферического антитела, который сильнее, чем у туберкулеза [29]. Повышенный уровень IL-4 в сыворотке крови при саркоидозе предполагает, что использование селективных антагонистов IL-4 или растворимых рекомбинантных рецепторов IL-4 можно исследовать по их эффективности для снижения активности заболевания при саркоидозе [30]. Подробное исследование периферических уровней ИЛ-4 при саркоидозе может также способствовать нашему пониманию механизмов действия иммуносупрессивной терапии при заболевании.

У нашего исследования есть несколько ограничений. Во-первых, учитывая присущую внутригрупповую изменчивость уровней цитокинов БАЛ, наблюдаемую в болезненных состояниях, потребуется гораздо больший анализ, чтобы исключить возможность дальнейшего различия между профилями саркоидоза и БАЛ цитокинов. Это особенно важно для тех цитокинов, где средний уровень является низким, несмотря на то, что имеется большой обнаруженный диапазон, например. при измерении уровней INFγ и IL-8 в БАЛ пациентов с саркоидозом и туберкулезом. Более широкий набор данных также сможет определить иммунологическую или клиническую значимость любых выбросов в более высоком диапазоне измерений цитокинов. В рамках более крупного исследования было бы интересно включить пациентов с другими гранулематозными заболеваниями, такими как гранулематоз Вегенера. Это может определить, существует ли цитокиновый профиль, который отражает гранулематозные состояния легких в целом. Во-вторых, стадия заболевания (определяемая легочной рентгенограммой) у пациентов с саркоидозом не была определена для этого исследования, поскольку наш опыт показал нам, что даже эксперты-радиологи могут подвергать субъективно разные оценки стадии при оценке тех же самых рентгенограмм. Однако наличие или отсутствие легочного фиброза с помощью КТ-сканирования с высоким разрешением грудной клетки не ассоциировалось с профилем цитокинов BAL или сыворотки при саркоидозе (данные не показаны). Наконец, все образцы БАЛ были взяты у пациентов в острой стадии их заболевания до начала соответствующей терапии, но сыворотки были взяты у пациентов с более длительной продолжительностью заболевания, некоторые из которых находились на лечении. Несмотря на минимальные поддерживающие дозы иммуносупрессии, мы не можем исключить возможность того, что даже низкие дозы могут повлиять на профиль цитокинов.

Тем не менее, сравнение пациентов с острым необработанным легочным саркоидозом (n = 16) и пациентов с более хроническим заболеванием (n = 24), некоторые из которых, возможно, были на стероидной терапии, показывает, что не было различий в каком-либо измеренном цитокине сыворотки, что указывает на существенное влияние иммуносупрессии на профиль цитокинов сыворотки при саркоидозе (данные не показаны). Кроме того, основное различие, которое мы выявили между сароцидозом и туберкулезом, то есть уровни IL-4 в сыворотке, остается статистически значимым после коррекции множественных сравнений, даже когда сравнивались только пациенты с острым необработанным легочным саркоидозом и активным туберкулезом легких (рис. 2в). Все эти образцы были взяты у пациентов во время бронхоскопии до начала лечения либо туберкулезом, либо саркоидозом. Таким образом, значительная разница в уровнях IL-4 в сыворотке между двумя заболеваниями не является артефактом лечения.

В настоящее время нет стабильно надежных анализов крови для диагностики саркоидоза или для определения различий между саркоидозом и туберкулезом. Уровни фермента ангиотензина в сыворотке крови (ACE), измеренные при саркоидозе, для мониторинга прогрессирования заболевания (которые являются единственным биомаркером сыворотки при обычном клиническом применении) неспецифичны, поскольку ACE повышается при ряде заболеваний, включая сам туберкулез [31]. После анализа широкого спектра иммунных биомаркеров (включая Th1, Th2 и связанные с гранулемой цитокинами) как в БАЛ, так и в сыворотке мы впервые показали, что только один цитокин в одном отделении, сывороточный IL-4, значительно отличается между саркоидозом и туберкулезом, и что эта разница сохраняется при строгой статистической коррекции для множественных сравнений. Мы также показали, что это различие все еще присутствует при анализе пациентов с первым представлением с острым легочным заболеванием до любого лечения, как это было бы установлено в клинической практике, где быстрый и точный диагноз имеет первостепенное значение.

Несмотря на эти результаты, единственного измерения IL-4 сыворотки недостаточно для дифференциального диагноза между заболеваниями. Несмотря на то, что различия статистически значимы, между уровнями, измеренными у отдельных пациентов с саркоидозом и туберкулезом, все еще существует значительное совпадение. Однако различия, наблюдаемые при использовании ИЛ-4, могут стать основой более широкого профиля цитокинов сыворотки, чтобы точно отличить саркоидоз от туберкулеза; включение дополнительных маркеров в более крупное исследование может существенно улучшить точность 73% используемой здесь панели. Такие будущие исследования должны быть сосредоточены только на недавно диагностированных больных туберкулезом и саркоидозом в острой стадии заболевания до начала любой терапии, так как эти группы, где дифференциация заболевания имеет первостепенное значение. Такой подход может оказаться быстрым дополнением к дифференциальной диагностике, которая может быть применена в клинических условиях до любых инвазивных процедур. Кроме того, системные различия Th2-цитокинов между двумя заболеваниями могут зависеть от различных результатов заболевания у пациентов, подвергшихся воздействию подобных респираторных стимулов.

Мы хотели бы поблагодарить всех пациентов и здоровых добровольцев, которые пожертвовали БАЛ и образцы сыворотки для целей этого исследования. Мы также хотели бы поблагодарить Ван Дао и Ивонн Клементс за их помощь в подготовке образцов и анализе цитокинов.

Образцы пациентов были собраны на сайтах Imperial College Healthcare NHS Trust. Лабораторная работа и анализ данных проводились в Институте Райт Флеминг, Имперский колледж Лондона.

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Финансирование: эта работа поддерживается Wellcome Trust (код гранта WT085275MA) и Советом медицинских исследований (код гранта G0801620). Финансисты не играли никакой роли в разработке исследований, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовить рукопись.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *