Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

MABGEL 1: первая фаза 1 испытания моноклональных антител против ВИЧ-1 2F5, 4E10 и 2G12 в качестве вагинального микробицида

MABGEL 1: First Phase 1 Trial of the Anti-HIV-1 Monoclonal Antibodies 2F5, 4E10 and 2G12 as a Vaginal Microbicide
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4278856/

Конкурирующие интересы: У авторов есть следующие интересы: BAV является сотрудником, ответственным за клинические исследования в Polymun Scientific GmbH (Австрия), компании, участвующей в коммерческой разработке 2F5, 4E10 и 2G12, но не имеет доли участия в этой компании и не имеет обязанностей BAV связанных с исследованными молекулами. У нас нет патентов, продуктов в разработке или выпущенных на рынок продуктов. Это не изменяет приверженность авторов ко всем политикам PLoS ONE по обмену данными и материалами.

Задуманные и разработанные эксперименты: GCM RCW SCW VJ CJL. Провели эксперименты: GCM RCW CRT VJ BAV CJL. Проанализированы данные: GCM JMB VJ CJL. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: RCW JMB VJ BAV. Написал документ: GCM RCW SCW JMB CRT VJ BAV CJL. Координация обучения: GCM CRT.

Моноклональные антитела (mAbs), которые потенциально нейтрализуют широкий спектр изолятов ВИЧ, являются потенциальными кандидатами на микробициды. На сегодняшний день местное применение mAb у людей и их стабильность во влагалищных выделениях не изучалось.

Оценить фармакокинетику и безопасность mAb 2F5, 4E10 и 2G12 при применении вагинально у женщин.

Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование фазы 1.

Двадцать восемь здоровых, сексуально абстинентных женщин ежедневно вводили 2,5 г геля в течение 12 дней, содержащих 10 или 20 мг / г каждого mAb (MABGEL) или плацебо. Основные клинические оценки и выборка наблюдались на исходном уровне, 1, 8 и 24 часа после 1-й дозы и 12 и 36 часов после 12-й дозы.

После корректировки коэффициентов разбавления медианные уровни 2F5, 4E10 и 2G12 при вагинальных выделениях в течение 1 часа после МАБГЕЛ с высокой дозой составляли 7,74, 5,28 и 7,48 мг / мл соответственно. Уровни 2F5 и 4E10 постепенно снижались с аналогичными оцененными периодами полураспада (4,6 и 4,3 часа). Напротив, уровни 2G12 снижались более быстрыми темпами в первые 8 часов, с предполагаемым периодом полураспада 1,4 часа в течение этого периода. Не было никаких признаков системной абсорбции. Не было выявлено существенных различий в локальных или системных побочных явлениях или изменениях влагалищной флоры (по qPCR) между активными и плацебовыми гелевыми рукавами. Хотя по меньшей мере 1 неблагоприятное событие было зарегистрировано у 96% участников, 95% были умеренными, и ни у кого не было серьезного.

Вагинальное применение 50 мг каждого mAb ежедневно было безопасным в течение 12-дневного периода. Медианные концентрации mAb, обнаруженные через 8 часов после приема, были потенциально достаточными для блокирования передачи ВИЧ. G12 проявлял более быстрое удаление из влагалища человека, чем 4E10 и 2F5, вероятно, из-за плохой стабильности 2G12 в кислотных выделениях вагинального человека. Необходимы дальнейшие исследования для разработки вагинальных микробицидов и систем доставки.

ISRCTN 64808733 UK CRN Портфолио 6470

Женщины остаются непропорционально затронутыми пандемией ВИЧ-1. В странах Африки к югу от Сахары, где гетеросексуальные половые контакты являются основным путем передачи, женщины составляют примерно 60% взрослых, живущих с ВИЧ-инфекцией. Среди лиц с ВИЧ в возрасте от 15 до 24 лет около 85% составляют женщины [1]. Имеются значительные последние достижения в области использования антиретровирусных препаратов (АРВ) в профилактике ВИЧ. В рамках диссонирующих гетеросексуальных партнерств, обеспечивающих комбинированные АРВ-препараты в качестве лечения ВИЧ-позитивного партнера [2] или Truvada (тенофовир плюс эмтрицитабин, Gilead, Foster City, CA, США) в качестве предоперационной профилактики (PrEP) для отрицательного партнера [3], сократились в рамках партнерских передач женщинам на 96% и 66% соответственно. Тем не менее, исследования устного PrEP у женщин, которые не знают о ВИЧ-статусе своего партнера, показали противоречивые результаты [4], [5], [6]. Доказательство концепции эффективности АРБ-микробицида для профилактики передачи ВИЧ-1 было продемонстрировано в исследовании CAPRISA 004, в котором 1% тенофовирового геля, использованного до и после секса, давало 39% защиты в целом [7]. Эффективность повышалась пропорционально соблюдению дозировки (подтверждается фармакокинетическими анализами), причем 54% защиты достигается при использовании геля в более чем 80% вагинальных половых актов. Недавние разочаровывающие результаты VOICE Trial (которые сравнивали ежедневное использование одного из 3 вмешательств — пероральный трювада, устный тенофовир или 1% тенофовирного вагинального геля, но показали, что ни одна из этих стратегий не была защитной из-за низкой приверженности [6]), еще раз подчеркнула необходимость разработки продуктов, приемлемых для женщин, и соответствия их стилю жизни. Как и в случае с контрацепцией, маловероятно, что один продукт или стратегия подойдет всем женщинам и будет влиять на ряд факторов, включая стабильность отношений, восприятие необходимости и любые неблагоприятные последствия. Менее ежедневные графики дозирования, такие как пред- или пери-койтальные или механизмы доставки длительного действия, например. кольца или инъекции, могут оказаться более благоприятными для некоторых женщин, чем ежедневные вмешательства.

Несмотря на несомненный потенциал АРВ-препаратов в качестве PrEP, остаются опасения в том, что актуальные АРВ-препараты или неполное присоединение к пероральному дозированию АРВ могут вызвать мутации резистентности у пользователей, которые заражаются ВИЧ. Эффективность также может быть снижена при наличии АРВ-резистентных штаммов ВИЧ. Таким образом, разработка микробицидов против ВИЧ на основе АРВ-препаратов остается приоритетной задачей.

Были идентифицированы моноклональные антитела (mAb), которые сильно нейтрализуют широкий спектр изолятов ВИЧ [8] — [10]. Некоторые из лучших характеризуются ими: 2F5, 4E10 и 2G12. 2F5 и 4E10 связываются с соседними эпитопами ELDKWA и NWFDIT на проксимальной внешней области мембраны gp41 [11], тогда как 2G12 связывается с кластером углеводных остатков на щите гликана gp120 [12]. Внутривенный (IV) пассивный перенос 2F5, 4E10 и 2G12 защищал макаки после заражения вирусом IV, оральным, ректальным и вагинальным обезболиванием / вирусом иммунодефицита человека (SHIV) [13] — [16].

В дополнение к вышеуказанным исследованиям на животных, mAb 2F5, 2G12 и 4E10 были использованы в исследованиях пассивной иммунотерапии у людей. Было проведено 4 исследования, в которых участвовало в общей сложности 39 ВИЧ-положительных людей [17] — [20]. Субъекты получали дозу каждого mAb, от 1 до 5 г на инфузию, с недельными интервалами между 4 и 16 неделями. В целом, mAbs показали, что они безопасны, без серьезных побочных эффектов или тромботических осложнений. Мягкие симптомы миалгии, артралгии и сыпи были замечены в 8/24, 5/24 и 2/24 предметах соответственно, получая от 42 до 48 г mAb более 13-16 вливаний в последних 2 исследованиях [21]. В этих исследованиях, где все участники хранили, до ВААРТ-вирусные изоляты, которые были чувствительны к нейтрализации по меньшей мере из 2 mAb (все 3 mAb в большинстве), некоторая эффективность при временной задержке вирусного отскока после прекращения ВААРТ наблюдалась в 14/16 человек, которые инициировали ВААРТ во время острой / ранней инфекции ВИЧ-1, при этом 4 сохраняли подавление VL до <50 копий / мл в течение всего периода инфузии. Во время отскока появились вирусные мутанты, которые были устойчивы к 2G12 у 19/22 участников, что давало дополнительные доказательства того, что он вызывал нейтрализующий эффект, вызывающий избирательное давление [19], [20].

Хотя генерация отдельных широко нейтрализующих mAb при хронической инфекции ВИЧ-1 чаще встречается, чем ранее оценивалась, антитела против области MPER относительно редки [22] — [24], причем наиболее широко нейтрализующие mAb нацелены на gp120 [25]. Поэтому было высказано предположение, что они могут возникать в результате атипичных путей индукции В-клеток и потенциально связывать эпитопы хозяина («сам») [23], [26], [27]. Первоначально было показано, что как 2F5, так и 4E10, но не 2G12, проявляли автореактивность in vitro путем связывания с различными фосфолипидами, гистонами и другими авто-антигенами [26]. Затем были проведены дальнейшие анализы и эксперименты в отношении клинических испытаний человека для исследования возможности аутореактивности in vivo и возможных тромбоэмболических нарушений, связанных с 4E10, 2F5 и 2G12. Во время последнего испытания дизайн исследования был изменен для сбора перспективных данных от четырех последних пациентов с высокой дозой. Наблюдалось очень мягкое (<1,25 × ULN) удлинение активированного частичного тромбопластинового времени (APTT) через 30 минут после инфузии, которое быстро переносилось, но не было никакого эффекта на протромбиновое время (ПТ) [21]. Эксперименты in vitro показали, что влияние на профиль коагуляции было опосредовано 4E10. Дальнейшие анализы показали, что 4E10, но не 2F5 или 2G12, демонстрирует кросс-реактивность на низком уровне с кардиолипином и что инфузия 4E10 приводит к кратковременным низким титрам анти-кардиолипинового антитела [21], [28]. Подобные кратковременные повышения анти-кардиолипиновых антител являются признанной особенностью некоторых вирусных инфекций, в том числе ВИЧ-1, и редко являются патогенными, в отличие от «классического» антикардиолипина, связанного с аутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка [29] - [32 ]. Был сделан вывод о том, что мало доказательств того, что mAb придают повышенный риск тромбоза или других аутоиммунных явлений, но что мониторинг как параметров коагуляции, так и антител к кардиолипину (aCL) должен проводиться в любых дальнейших клинических испытаниях [21].

Вагинальный микробицид, содержащий комбинацию 4E10, 2F5 и 2G12 (MABGEL), был разработан Европейской программой по микробицидам (EMPRO). Поэтому мы провели исследование фазы 1 (MABGEL1) для оценки фармакокинетики и безопасности MABGEL у здоровых женщин-добровольцев. Мы также изучили вагинальные периоды полувыведения mAb в исследовании устойчивости ex-vivo. Помимо первых исследователей, изучающих местное применение mAb в женском половом тракте, мы также среди первых применили количественные молекулярные методы [33], чтобы определить влияние микробицидного продукта на вагинальную микрофлору [34] , [35]. Учитывая, что даже тонкие нарушения влагалищной флоры потенциально могут увеличить риск заражения ВИЧ [36] — [38], точная количественная оценка и идентификация бактерий на уровне видов может оказаться полезным дополнением к оценкам безопасности, которые в настоящее время применяются при испытаниях вагинальных продуктов [39]. Количественные, основанные на ДНК методы (амплификация генов 16SrRNA) имеют преимущество перед культурой в том, что они могут обеспечить точную оценку широкого спектра недобросовестных и привередливых видов с использованием хранимых тампонов, а не свежих образцов.

Протокол MABGEL1 и поддерживающий контрольный список CONSORT доступны в качестве вспомогательной информации; см. Контрольный список S1 и Протокол S1. Результаты были представлены в соответствии с рекомендациями CONSORT 2010 (www.consort-statement.org) [40], [41].

MABGEL 1 был одобрен Кембриджширом 1 Научно-исследовательским комитетом по этике NHS (REC) и проводился в соответствии с принципами, изложенными в правилах Декларации Хельсинки и Великобритании о лекарственных средствах для использования человеком (клинические испытания). Полностью информированное письменное согласие было получено от всех участников до каких-либо учебных процедур.

Утверждение также было получено от Северо-Восточного Йоркширского научно-исследовательского альянса и Управления по лекарственным средствам и лекарственным средствам в Великобритании. Исследование было зарегистрировано в базах данных европейских и международных клинических испытаний: EudraCT (2008-000312-32), ISRCTN (64808733) http://www.isrctn.com/ISRCTN64808733 и в Портфолио исследований сети клинических исследований Великобритании (исследование 6470) http://public.ukcrn.org.uk/search/StudyDetail.aspx?StudyID=6470

MABGEL1 было рандомизированным двойным слепым плацебо-контролируемым исследованием, проведенным в период с сентября 2009 года по июль 2010 года в Медицинской школе Hull-York Medical School, Йоркская больница, Великобритания. Основная цель исследования заключалась в оценке местной фармакокинетики 2F5, 4E10 и 2G12 при применении вагинально и, кроме того, для определения наличия каких-либо признаков системной абсорбции mAb. Оценка локальной и системной безопасности mAb при применении вагинально была вторичной целью исследования.

В том числе скрининг, оценки проводились в течение 8 посещений и 2 последующих телефонных звонка, охватывающих 3 менструальных цикла.

Целевой набор составил 30; 10 предметов в исследовании. Номера субъектов были рандомизированы на высокую дозу МАБГЕЛ, малую дозу МАБГЕЛЬ или гелевую машину только в соотношении 1:1:1 с использованием заблокированной рандомизации смешанных размеров блока. Рандомизация выполнялась Йоркской испытательной группой в Йоркском университете. Программа рандомизации была создана с использованием Microsoft Visual Basic, и копия сгенерированных данных была надежно сохранена в базе данных, защищенной паролем. Список рандомизации был надежно отправлен York Trials Unit квалифицированным специалистом в Polymun Scientific, Австрия, для маркировки исследуемого геля, после чего он был уничтожен. Персонал, проводящий последующие анализы, не имел доступа к этому списку. Участники получили порядковые номера в порядке регистрации. Все участники, сотрудники учебных заведений, фармацевты, клиницисты и статистики были ослеплены для изучения заданий. Двойное ослепление оставалось на месте в течение всего исследования.

Процедуры найма, согласия и регистрации были проведены клиническими врачами в соответствии с протоколом, утвержденным РЭК. Женщины имели право на участие в исследовании, если они были в возрасте от 18 до 45 лет, ВИЧ-отрицательными, при хорошем общем состоянии здоровья, а не беременных, грудном вскармливании или в течение 12 недель после родов, используя надежный метод контрацепции (как определено в исследовании протокол, то есть последовательное использование презервативов, комбинированных оральных контрацептивов (COCP), содержащих только пероксид перорального контрацептива (POP), содержащего прогестаген, внутриматочного устройства, инъекционного или имплантированного противозачаточного средства на основе прогестагена) и без клинически значимых нарушений при базовых анализах крови. На скрининговом визите была проведена тщательная медицинская история и физический осмотр. Оценка нижних отделов половых путей включала кольпоскопию и фотографию с цифровым изображением, а также скрининг на инфекции половых путей (Chlamydia trachomatis (CT), Neisseria gonorrhea, Trichomonas vaginalis, виды Candida, бактериальный вагиноз (BV)). Анализ крови включал гематологию, биохимию, параметры коагуляции (активированное частичное тромбопластиновое время (aPTT), протромбиновое время (PT)), ВИЧ, сифилис, HBV, серологию HCV и антитела против кардиолипина (aCL) IgG [21].

mAb были выражены в клетках яичника китайского хомячка (CHO) как человеческий IgG1 (k) и изготовлены Polymun Scientific, Вена, Австрия. Гели, по внешнему виду, содержали 20 мг / г (высокая доза MABGEL) или 10 мг / г (низкая доза МАБГЕЛ) каждого из mAb в транспортном средстве гидроксиэтилцеллюлозы (1,6%), глицерина (2,5%), метилпарабена ( 0,18%), пропилпарабен (0,02%), мальтоза (от 5 до 5%) и очищенная вода (до 100%). Индивидуальные дозы 2,5 мл переносили из шприцев и вводили с использованием одноразовых аппликаторов Ortho влагалища. Участники начали использовать гели между 7 и 13 днями менструального цикла. Первая доза вводилась в экспериментальной медицине под наблюдением врача-исследователя. Последующие 11 доз применялись в домашних условиях участниками в последующие дни. 1-я доза была применена ранним утром, а 12-е — в заранее установленное время вечером. Соответствие гелевому использованию оценивали по истории, дневным карточкам и осмотру возвращенных шприцев.

Участники оставались в клинике в течение 1 часа после 1-й дозы. Других амбулаторных ограничений не было. Участники должны были быть сексуально абстинентными и воздерживаться от использования тампонов и вагинальных продуктов за 48 часов до 1-й дозы до 36 часов после 12-й дозы.

Образцы цервико-вагинальные были получены непосредственно перед 1-й дозой и через 1 час, 8 часов и 24 часа после 1-й дозы и 12 и 36 часов после 12-й дозы. Два образца были взяты для каждого участника в каждый момент времени с использованием губок Weck-Cel (Medtronic, Watford, Hertfordshire, UK), каждый из которых выдерживали против слизистой оболочки влагалища в боковом сундуке в течение 1 минуты и взвешивали сборку до и после образца , Обработка и хранение были такими же, как описано ранее [42]. Образцы сыворотки собирали в начале исследования, через 8 часов после 1-й дозы и 12 часов после 12-й дозы.

концентрации mAb определяли во влагалищных выделениях и сыворотке внутренним ELISA в Polymun Scientific с использованием высокоочищенных внутренних антител 2F5, 4E10 и 2G12 в качестве стандартов и ранее описанной методики [19]. Нижний предел обнаружения анализов mAb составлял 0,06 мкг / мл. Значения <0,06 мкг / мл сообщались как не обнаруженные (ND). Уровни mAb во влагалищных выделениях были скорректированы с учетом фактора разведения, введенного добавлением буфера во время обработки образцов Weck-Cel, рассчитанных как (объем экстрактного объема (600 мкл) + объем секреции / объем секреции). Вес отдельных образцов Weck-Cel конвертировали в объемы, предполагая плотность 1 мг / мкл. Элюаты двух образцов Weck-Cel, взятых для каждого участника за посещение, собирали для анализа с помощью ELISA и коэффициенты разбавления, рассчитанные с использованием среднего из двух объемов проб. В связи с сообщением кросс-реактивного связывания 2G12 Candida albicans и C. tropicalis [43], вагинальные культуры кандидов (агар сагуро-декстрозы плюс хлорамфеникол, оксид, Basingstoke, Хэмпшир, Великобритания); и видообразование (API 20 C AUX, bioMerieux, Basingstoke, Hampshire, UK) были выполнены при входе.

Участникам мониторировали неблагоприятные события (AE) и соблюдение на каждом этапе фармакокинетического отбора. Дополнительные проверки безопасности и соответствия проводились также через 2, 5 и 8 дней после 1-й дозы. Окончательная оценка последующего наблюдения проводилась через 10-28 дней после завершения дозирования.

Генитальные AE были запрошены с использованием вопросов, связанных с неожиданным вагинальным кровотечением, генитальным дискомфортом (зуд, жжение, болезненность), выделением, дизурией и диспареунией. Кольпоскопия и захват изображений выполнялись до отбора проб. Кольпоскопия проводилась в общем соответствии с Руководством CONRAD / WHO по стандартизации кольпоскопии для оценки вагинальных продуктов (2004) [44], однако никакие промывания лазером или тампоны не использовались отдельно от образцов исследования, указанных в протоколе, чтобы избежать воздействия по фармакокинетическим оценкам.

Вагинальную флору контролировали с помощью микроскопии на месте (с использованием оценки Nugent [45]) и путем определения бактерий Lactobacilli и BV-ассоциированных организмов с помощью количественной полимеразной цепной реакции (qPCR) (проведенной в Институте тропической медицины (ITM) Антверпен, Бельгия) , Высокие вагинальные образцы были получены на базовом уровне (скрининговый визит), через 36 часов после 12-й дозы и при окончательном осмотре, используя флокированные мазки Dacron (Copan, Italy) (хранились при предварительной обработке -20 ° C). Методы экстракции ДНК и qPCR были подробно описаны ранее [33]. ПЦР проводили с использованием SYBR Green PCR Mastermix (Qiagen, Venlo, Нидерланды) на 5 мкл образцов экстрагированной ДНК. Конкретные праймеры были выбраны для обнаружения лактобацилл в целом, а также отдельных видов (Lactobacillus crispatus, L. gasseri, L. jensenii, L. vaginalis и L. iners) и BV-ассоциированных организмов Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae. Грунтовки (синтезированные Eurogentec, Seraing, Бельгия) были разработаны для L. vaginalis
[33], но были описаны в других местах для других видов L., generic Lactobacilli, G. vaginalis и A. vaginae
[46] — [49].

На протяжении всего исследования проводились анализы крови на антитела aCl, профиль свертывания крови, гематология и биохимия (лабораториями патологии Йоркской больницы в соответствии со стандартными протоколами).

AEs были оценены в соответствии с таблицами, разработанными Британской исследовательской комиссией по клиническим исследованиям по разработке микробицидов (гениталии) [50] и Национальным институтом здравоохранения США по СПИДу (версия 1.0, декабрь 2004 г.) (все остальные) [51]. Причинность оценивалась как относящаяся к исследуемому гелю (определенно, возможно, возможно, связанная) или не связанная (вероятно, не связанная, не связанная).

Все статистические анализы были выполнены с намерением исправить базис с использованием STATA версии SE 10.1. концентрации mAb были суммированы в каждый момент времени для каждой группы лечения (высокая доза MABGEL, низкая доза MABGEL и плацебо) как минимум, медиана и максимум. Лекарственные руки сравнивались с использованием критерия ранга Крускал-Уоллис, скорректированного на галстуки, и где это было статистически значимым, P <0,05, два активных плеча MABGEL сравнивались с использованием теста Манна-Уитни U. Анализ вагинальных образцов проводился как до, так и после корректировки для коэффициента разбавления.

Для каждого типа AE количество пережитых событий, а также количество и процент участников, участвующих в мероприятии, были подсчитаны по степени тяжести и отношениям к лечению для каждой руки. Общее количество AE на участника в каждой группе сравнивалось с использованием отрицательной биномиальной регрессии. Анализ проводился для всех событий и для событий, классифицируемых как возможно или, возможно, связанных с лечением. Исследование не было рассчитано с достаточной степенью для статистического сравнения скоростей различных типов АЕ между оружием.

Для каждого вида Lactobacillus G. vaginalis и A. vaginae, наличие или отсутствие у женщин в каждый момент времени с помощью руки исследования сравнивали с использованием теста Fishers Exact. Абсолютные подсчеты сравнивались в каждом временном интервале между исследуемыми оружиями с использованием критерия ранга Крускала Уоллиса, исправленного для связей.

Оценки места жительства вагинального t1 / 2 для каждого mAb были получены с использованием концентраций mAb, обнаруженных через 1, 8 и 24 часа после 1-й дозы в обеих группах MABGEL. Графики, показывающие концентрацию mAb в зависимости от времени и концентрации mAb мочи в зависимости от времени, были выполнены для каждого mAb с использованием данные от всех участников, получающих MABGEL (высокая и низкая доза). Предполагая экспоненциальный распад, анализ ковариационной модели (ANCOVA) был привязан к данным, преобразованным в журнал, со временем как непрерывным предиктором и участником как категориальный фактор. Были выполнены две проверки этого предположения; во-первых, термин «квадрат времени» был включен и протестирован для проверки линейности, тогда однородность t1 / 2 оценивалась путем тестирования взаимодействия между временем и участником. При условии соблюдения этих предположений линия может быть установлена ​​как loge (y) = a — bt, где y — уровень антитела, t — время, a и b — постоянные. Кроме того, для участника был включен фактор. Период полураспада t1 / 2 — это время, когда y уменьшается или лога (y) падает на log (2). Следовательно, loge (2) = bt1 / 2, t1 / 2 = loge (2) / b. 95% -ный доверительный интервал (CI) можно найти при применении того же преобразования к CI для наклона.

Утверждение было получено от руководящих комиссий по информационным технологиям ITM и университетской больницы Антверпена для сбора вагинальных секреций от полностью соглашенных здоровых бессимптомных женщин, посещающих исследовательскую клинику ITM для дальнейшего анализа in vitro (см. Протокол S2). Все женщины, естественно, ездили на велосипеде, имели нормальную вагинальную флору (оценка Нугента 0-3) и были отрицательными при скрининге на инфекции половых путей. Вагинальные выделения получали от восьми женщин путем аспирации шприцев. Аспираты объединяли (конечный рН 4,3) и затем смешивали 1:1 с 10 мг на 1 мл 2F5, 4E10 и 2G12 и инкубировали в течение 24 часов при 37 ° C. Аликвоты для тестирования удаляли предварительную инкубацию и составляли 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 и 24 часа. mAb были измерены в Polymun Scientific с использованием связывающих ELISA, описанных выше.

Сорок девять женщин прошли обследование, и в исследование было включено двадцать восемь женщин (рисунок 1). Из тех, кто был исключен при скрининге, у 3 женщин были инфекции половых органов (2 × BV, 1 × CT); 11 женщин были оценены врачом-исследователем и главным исследователем, чтобы иметь значительные текущие общие медицинские условия, у 1 были нарушенные тесты функции печени (аланиновая трансаминаза в два раза выше нормы), 2 не использовали надежный метод контрацепции, 1 считалось маловероятным способный соблюдать протокол исследования (фобия иглы), а 2 не были зарегистрированы у врача общей практики. 1 женщина, имеющая право на участие, отказалась от участия в связи с началом новой работы. Исследование было прекращено в начале июля 2010 года из-за истечения срока годности одобрения исследуемых гелей. Десять женщин получали высокую дозу MABGEL, 9 низких доз и 9 плацебо. Руки исследования хорошо сочетались с регистрацией, за исключением случаев, когда женщины, получавшие МАБГЕЛЬ с низкой дозой, были немного старше с более высоким паритетом (таблица 1). Все участники завершили работу. Три женщины (по одному на руку) каждый пропустили 1 дозу в середине периода дозирования, а два набора образцов Weck-cel не были проанализированы; один (в группе с высокой дозой MABGEL) из-за неправильного времени дозирования (участник ошибочно применил вторую дозу геля только до 24 часов после посещения первой дозы), а один (плацебо-рука, 8 часов после 1-й дозы) отброшен по ошибке. Все остальные образцы были получены в определенные моменты времени и проанализированы с данными, представленными в соответствии с назначенным исследованием. Ни один из участников не сообщил о пользе какого-либо пола или вагинального продукта.

IUCD = медовое внутриматочное противозачаточное устройство, IUS = внутриматочная система, COCP = комбинированная оральная противозачаточная таблетка, POP = (содержащая дезогестрел) прогестагенная таблетка, DMPA = депо-медроксипрогестерона ацетат.

Как показано в таблицах 2-4, статистически значимые различия между уровнями mAb, обнаруженными в плацебо, а также малыми дозами и большими дозами MABGEL во всех временных точках, за исключением 2G12 в 36 часов (после 12-й дозы) ( Крускала-Уоллиса). Несмотря на то, что наблюдались четко наблюдаемые различия между концентрациями, обнаруженными в высокой дозе, по сравнению с малыми дозами MABGEL в большинстве точек времени, они достигали статистической значимости при 1-часовом посещении 1-й дозы для 2F5 и 4E10, а не для 2G12 (Манн-Уитни U). Эти результаты были достоверными как до, так и после корректировки коэффициентов разбавления. На рис. 2 и 3 показаны медианные концентрации 2F5, 4E10, 2G12 в малой дозе и малой дозе MABGEL (после регулировки коэффициентов разбавления).

ND: не обнаружено (т.е. <0,06 мкг / мл нижнего предела анализа).

* Hrs post — 1-я доза A, 12-я доза B.

ND: не обнаружено (т.е. <0,06 мкг / мл нижнего предела анализа).

* Hrs post — 1-я доза A, 12-я доза B.

ND: не обнаружено (т.е. <0,06 мкг / мл нижнего предела анализа).

* Hrs post — 1-я доза A, 12-я доза B.

Не было доказательств системной абсорбции mAb (данные не показаны). Не было статистически значимых различий в уровнях любого из mAb между тремя руками исследования в любой момент времени, и никакого увеличения от исходных значений (доза) не наблюдалось ни для одного из mAb.

Графики, показывающие концентрацию mAb и концентрации mAb лока (до и после регулировки коэффициентов разбавления) в зависимости от времени, показаны на рисунках 4 и 5. Используя концентрации, скорректированные для коэффициентов разбавления, оценки места жительства t1 / 2 во влагалищных выделениях (образцы Weck-Cel) были одинаковы для обоих mAb MPER (4,3 часа (95% ДИ от 3,6 до 5,3) для 4E10, 4,6 часа (95% ДИ от 4,0 до 5,0) для 2F5) (рисунки 2 и 3). Оценки T1 / 2 были примерно на 1 час короче, используя нескорректированные значения, причем скорректированные и нескорректированные данные соответствовали экспоненциальной модели. Напротив, вагинальные уровни 2G12 не соответствовали одному общему экспоненциальному распаду, демонстрируя более быструю начальную скорость спада, чем другие два mAb, которые затем замедлялись при более низких концентрациях. Оценка, полученная для раннего t1 / 2 2G12, на основе 1 и 8-часового значения после 1-й дозы, составляла 1,4 часа (95% ДИ от 1,1 до 1,8). Приведенные оценки t1 / 2 относятся к полному набору данных, поскольку исключение выбросов не оказывает ограниченного влияния на оценки.

Мы провели исследование устойчивости in vitro, чтобы исследовать ускоренное снижение in vivo 2G12 во влагалищных выделениях. Результаты показаны на рисунке 6 и подтверждают данные in vivo. 4E10 почти не снижался в течение 24 часов, 2F5 — незначительное снижение, тогда как 2G12 демонстрировал быстрое снижение с кажущейся двуфазной кривой.

Как показано в таблице 5, AE были зарегистрированы всеми, кроме одного участника, однако 95% были слабыми (1 класс). Нет AEs были серьезными (класс 3/4), и только 4 были умеренными (2 класс). Два умеренных АЭ произошли у одного участника в группе плацебо исследования, остальные 2 произошли у двух отдельных участников, как в малой дозе MABGEL. В целом, не было существенных различий в среднем числе AE, зарегистрированных на одного участника между плацебо, малой дозой и высокодозированными плечами, и это справедливо для всех событий (P = 0,6) (отрицательный бином), а также 88% событий, которые, по крайней мере, возможно связаны с использованием геля (т.е. побочные реакции (ОР) (Р = 0,1).

51% зарегистрированных ОР затрагивали половой путь, включая неожиданные вагинальные кровотечения, аномальные выделения из влагалища и вагинальный дискомфорт. Из них наиболее часто встречались вагинальные кровотечения, о которых сообщали 46% (13/28) участников. Результаты исследования, свидетельствующие о возможном воспалении слизистых оболочек, были отмечены у 5 участников. Было зарегистрировано 4 случая эритемы (нет в высоких дозах, 3 в низкой дозе, 1 в группе плацебо) и 1 случай нарушения поверхностного эпителия (<1 мазок) (плацебо); все были мягкими и локализованными. Один из случаев эритемы, связанный с болезненностью, был отнесен C. albicans (обнаружен в культуре до 1-й дозы) и обработан флуконазолом; все остальные были самоограничивающимися. Только 2 AE были замечены на кольпоскопии, которые, возможно, не были обнаружены в отчете участника или визуальном осмотре невооруженным глазом. У 1 участника была небольшая область эритемы на ее задней стенке влагалища, которую не видели невооруженным глазом. Единственное поверхностное нарушение эпителия было просто видно невооруженным глазом, но лучше очерчено с помощью кольпоскопа. Оба этих результата были обнаружены при посещении 3 (8 часов после 1-й дозы), но были разрешены путем посещения 4 (24 часа после 1-й дозы). Генитальные данные не присутствовали при более чем одной последовательной оценке, хотя все они были связаны с использованием исследуемого геля. В целом, у пациентов, принимавших плацебо (17), было больше генитальных AR, чем в плечах MABGEL (9 высоких доз и 13 низких дозах).

Все лабораторные АР были 1-го класса, и ни одно из них не требовало какого-либо медицинского вмешательства. Все значения aCL и значения aPTT во время исследования были в лабораторных нормальных диапазонах. 6 участников (3 плацебо-рука, 3 руки с высокой дозой MABGEL) имели временно умеренно повышенные результаты ПТ (<1,25 × верхний предел нормы), обнаруженный во время исследования. У 2 из этих участников (1 плацебо, 1 высокая доза) результаты ПТ были повышены на визите 2 (до 1-й дозы) и были посещены 8 образцов, но не между ними. Они считались не связанными с изучением использования гелем Главным исследователем, как только повышенным до и через несколько недель после воздействия геля.

Не было доказательств того, что либо MABGEL, либо плацебо вызвали изменение в вагинальной флоре. Лактобациллы были обнаружены у всех женщин во всех посещениях с использованием общих ПЦР-праймеров. A. Vaginae и G. vaginalis присутствовали только в меньшинстве женщин. В общем, наличие или отсутствие определенного вида Lactobacillus или BV-ассоциированных бактериальных видов, по-видимому, оставалось постоянным на протяжении всего исследования (таблица 6)

PLD: послеродовая доза, IQR: межквартильный диапазон.

В соответствии с предыдущим анализом единственный момент времени и виды Lactobacillus, где наблюдалось значительное различие в количествах, обнаруженных между исследуемыми плечами, были при скрининге на L. iners (p = 0,04) (Kruskal-Wallis). В целом, никаких каких-либо существенных изменений в отношении любых бактериальных видов, ассоциированных с Lactobacillus или BV, не было обнаружено с базового уровня в течение 36 часов после 12-й дозы или окончательного посещения в любой группе исследования, как определено количественно qPCR (данные не показаны). Только одна женщина в малой дозе Мабгеля разработала BV во время исследования (тяжелый белый разряд, оценка Nugent 8 и pH 6,4 при окончательном контроле). G. vaginalis присутствовал при этом посещении по высоким показателям (3,7 × 107), тогда как при предыдущих посещениях он отсутствовал.

MABGEL 1 было первым исследованием для оценки фармакокинетики и безопасности местного применения mAb в женском половом тракте. Различия были выявлены в степени исключения влагалища и периодов полураспада между 2G12 и mAb 2 MP5 и 4E10. В то время как 2F5 и 4E10 экспоненциально уменьшались, с t ½ в течение 4-5 часов, уровни 2G12 снижались быстрее изначально, при более медленном снижении при более низких концентрациях. Интересно, что такие результаты отличались от таких, которые наблюдались в параллельном исследовании PK у киномолгусных макак (Macaca fascicularis) [52]. Макаки (n = 6) были вагинально введенными MABGEL, содержащими 20 мг / г каждого mAb (то же, что и у женщин в группе с высокой дозой MABGEL). Ввиду их меньших размеров влагалища применяли 2 г, а не 2,5 г геля; Выборка Weck-cel, методология обработки и выявление ELISA были такими же, как и в нашем исследовании, хотя опубликованные данные не включали корректировку коэффициентов разбавления. В макаках вся выборка выполнялась в последовательных временных точках после однократного применения геля. У женщин по соображениям комфорта и логистики образцы в 12 и 36 часах были выполнены после 12-й дозы. Для 2F5 и 4E10 средние (средние или медианные) влагалищные концентрации в макаках в эквивалентных временных точках были очень похожи на средние (средние или медианные) концентрации влагалища в мажорных дозах с малой интенсивностью до тех пор, пока не были учтены коэффициенты разбавления. Напротив, уровни 2G12 были значительно выше у макак, снижаясь экспоненциально с такой же скоростью, что и mAb MPER. Однако следует отметить, что все животные в этом исследовании были предварительно обработаны Depo-Provera (DMPA), тогда как женщины в руках MABGEL нашего исследования были либо естественным образом циклически (n = 10), либо использовали ряд не-DMPA-гормональных контрацепция (COCP n = 1, desogestrel-POP n = 1, внутриматочная система n = 2, имплантат n = 5). Дальнейшие исследования, разработанные специально для изучения эффектов конкретных гормональных контрацептивов на фармакокинетику млекопитающих генитального тракта, будут полезны.

Как мы описали, мы провели исследование стабильности mAb in vitro для дальнейшего изучения наших in vivo результатов. Мы обнаружили, что при вагинальных выделениях, получаемых у женщин с естественным циклом с нормальной вагинальной флорой, в отсутствие ингибиторов протеазы, 4E10 был наиболее стабильным, уровни 2F5 несколько снижались, а уровни 2G12, как и in vivo, быстро снижались изначально с более медленным снижением при более низких концентрациях.

Очевидная пониженная стабильность 2G12 в вагинальных выделениях человека по сравнению с mAb MPER может быть связана с его структурой. 2G12 имеет необычную третичную структуру со связанными областями переменной тяжелой цепи (VH) с обменом доменами, что дает ей расширенную линейную конфигурацию, а не классическую форму Y или T. Эта конфигурация создает дополнительные сайты, связывающие антиген, что позволяет наномолярное связывание с аффинностью к олигоманнозным кластерам внутри gp120 [53]. IgG восприимчив к протеолизу с помощью ряда физиологических ферментов, включая плазмин, пепсин, трипсин, катепсины, эластазы. Шарнирная область является наиболее восприимчивой частью антитела к расщеплению, и больше мест вокруг области шарнира становятся восприимчивыми к ферментативному расщеплению после воздействия низкого рН [54]. Кристаллографический анализ 2G12 показал, что существует адаптируемый шарнир между областями VH и CH1 (1-я константная тяжелая цепь), что позволяет обменивать доменную структуру [53], и мы предлагаем, чтобы эта область была восприимчива к ускоренному физиологическому протеолизу в кислой человеческой цервико-вагинальная среда, которая не наблюдается в макаках или в плазме.

Сравнения вагинальной микрофлоры между людьми и макаками, как cynomolgus, так и крупной мариной макаки (Macaca nemestrina), показали сходство в диапазоне идентифицированных бактериальных видов с помощью микроскопии и культуры, но различия в пропорции, в которой каждый присутствует , Например, Lactobacilli обычно обнаруживаются в более низкой плотности и стрептококках Viridans с более высокой плотностью у макак, чем обычно для здорового влагалища человека, причем большинство производства перекиси водорода относится к последнему, а не к предыдущему [55], [56]. В общем, вагинальный рН выше у макак, от 5,5 до 8 у M. fascicularis и от 4 до 8,5 у M. nemestrina, причем наиболее часто встречаются 6-7 [56], [57]. Это сопоставимо с 3,8-4,5 у здоровых женщин [58]. Межвидовые различия во влагалищном рН и, возможно, в других, еще не определенных, переменных, например. в ферментативной активности секретов слизистой оболочки, могут лежать в основе наблюдаемых различий в фармакокинетике половых путей 2G12 у макак по сравнению с женщинами и могут иметь последствия для оценки функции / персистенции других защитных агентов.

Фармакокинетика внутривенного введения 2G12, 4E10 и 2F5 ранее изучалась у ВИЧ-положительных индивидуумов [19], [20]. В отличие от более быстрого элиминации цервико-вагинальных секретов, в плазме 2G12 проявляется гораздо более длительное исключение t1 / 2 (14,1 дня) по сравнению с 4E10 (6,6 дня) и 2F5 (3,2 дня) [18]. Эти разности плазмы t1 / 2 никогда не были полностью объяснены. Различия в рециркуляции неонатальным Fc-рецептором (FcRn) являются одним из возможных механизмов. Поскольку все 3 mAb обладают одинаковыми константными (Fc) областями IgG1k, ожидается, что они будут иметь сходные сродства FcRn. Однако недавние наблюдения показывают, что структура вариабельного (Fv) домена может влиять на связывание FcRn через стерические влияния на область Fc [59]. Таким образом, формальная оценка взаимодействия FcRn-mAb может быть оправдана.

Хотя показано, что FcRn экспрессируется эпителием женских половых путей человека [60], наши данные, демонстрирующие отсутствие системного поглощения mAb и более короткий период полувыведения mAb в половых органах по сравнению с плазмой, не поддерживают функциональную роль in vivo для FcRn. Однако одним из ограничений нашего исследования является то, что мы не проводили биопсии тканей, чтобы искать местное удержание. Дальнейшие исследования с использованием биопсий тканей, в том числе у половозрелых женщин, могут быть оправданы.

Даже несмотря на любое потенциальное влияние на связывание FcRn, различия в структуре Fv и общем молекулярном заряде между 2G12 и антителами MPER могут все еще влиять на их фармакокинетику. В целом, более базовая (более высокая) изоэлектрическая точка большинства антител по сравнению с другими сывороточными белками (pI 6,5-10 против 5,5) имеет тенденцию способствовать их удержанию в тканях, поскольку она делает их более вероятными для связывания с отрицательно заряженными фрагментами на клетке поверхности или внутри внеклеточной матрицы [61], и улучшает захват клеток пиноцитозом [62], [63]. В целом, существует тенденция к тому, что антитела проявляют большее поглощение и связывание тканями и, как следствие, увеличение их клиренса при увеличении катионации. Напротив, хотя анонированные антитела обычно демонстрируют меньшее поглощение тканей, они могут проявлять либо повышенную, либо уменьшенную плазму и общий клиренс тела [61], [63]. Можно предсказать их более высокие показатели (9-10 для 2F5 и 9,5 для 4E10 против 7,5-8,5 для 2G12, B Vcelar, Personal Communication) и, возможно, их большее сродство к липидам [64], что mAb MPER можно было бы рассмотреть более легко с помощью тканей, чем 2G12. Это может объяснить их более быстрый клиренс плазмы. Кроме того, это может привести к их сохранению в больших концентрациях в слизи и / или поверхностных слоях вагинального эпителия [65]. Последний требует дальнейшего исследования, например. путем изучения распределения mAb в биопсии цервико-вагинальной ткани ex vivo после применения MABGEL in vivo или в культивированных эксплантах.

Данные исследований эксплантатов и системы заражения макаком SHIV пояснили, что mAb должны проявлять как сильную нейтрализацию ВИЧ-1, так и FcγR-опосредованную активность для блокирования вагинальной передачи [66] — [68], свойства, проявляемые всеми тремя mAb в нашей [52]. Кроме того, широта охвата циркулирующих штаммов ВИЧ и механизм нейтрализации, например, степень зависимости от вирусных взаимодействий с рецептором CD4-рецептора Env-хозяина, будь то обратимая или необратимая, также будет важна in vivo. Вероятно, ключевой особенностью реализации реального мира будет широта охвата, так как чем меньше количество mAb, необходимое для нейтрализации как можно ближе к 100% передаваемых штаммов, тем меньше будет издержки производства, и тем больше простота изготовления шкалы и клиническое развитие. 4E10 — действительно замечательный mAb в этом отношении, с нейтрализацией 96, 98 и 100% штаммов в различных анализах [8], [9], [10]. Хотя теперь были описаны серии mAb с по меньшей мере 10-кратной [9], [69] и 100-кратной [10] большей эффективностью, чем 4E10, очень немногие имеют ту же ширину, что и 4E10. Одним из исключений является недавно описанный 10E8, который также нейтрализовал 98% штаммов и нацеливается на перекрытие эпитопа с эпитопом 4E10, но примерно в 6 раз сильнее [70]. Несмотря на снижение ширины охвата, чем 4E10 и 2F5, 2G12 нейтрализует ВИЧ гораздо быстрее, чем mAb MPER, которые занимают несколько часов, чтобы опосредовать максимальную нейтрализацию in vitro
[8], [71]. Однако, в то время как первые могут индуцировать пролитие Энва, что приводит к постоянной вирусной инактивации, нейтрализация, опосредованная 2G12, является обратимой [71]. Было показано, что все 3 mAb действуют синергически in vitro (B. Vcelar, Personal Communication).

Потенциальная корреляция многих анализов in vitro, анализирующих функции mAb с защитой in vivo от ВИЧ-инфекции, в настоящее время неясна. Было показано, что никотиан-продуцируемое 4E10 было более эффективным при блокировании инфицирования ВИЧ-1JR-CSF половых клеток человека, экспрессирующих ex vivo, в сравнении с более новыми gp-120, связывающими ВИЧ-нейтрализующие mAb PG9 и PG16, несмотря на то, что последний имеет in vitro Значения IC90, которые были измерены> 200 и> 2000 раз ниже [72]. Однако в 10 раз больше 4E10 требовалось блокировать инфекцию ткани по сравнению с анализом TZM-bl. Было также показано, что 2F5 эффективен при блокировании ВИЧ-инфекции (ВИЧ BaL) в системе цервикального эксплантата [68].

На сегодняшний день количество антител, необходимых на поверхностях слизистой оболочки для предотвращения заражения ВИЧ-1, не было полностью установлено. Тем не менее, можно сравнить между уровнями mAb, обнаруженными во влагалищных выделениях в нашем исследовании фазы 1, и теми, которые показаны, чтобы блокировать передачу ВИЧ в моделях вагинальной передачи SHIV, не связанных с человеческим приматом (NHP). Для исследований SHIV NHP данные доступны для вагинальных концентраций (а) транссудативных mAb, присутствующих после внутривенной инфузии, или (b) непосредственно вагинально вводимых mAb. В недавнем исследовании 5 макак получили одну высокую дозу вагинального заражения SHIVBaL после инфузии IVF 25 мг / кг. Заданный инокулум вводили через 6 часов после инфузии во время максимальных концентраций влагалища 2F5, в среднем 306 мкг / мл (диапазон 19,4 — 463,2 мкг / мл). Животные не заразились [68]. Эти исследователи использовали одни и те же методы отбора проб, методологию ELISA и коррекцию фактора разбавления, как и мы, и экстраполяцией медианов уровней 2F5, которые мы обнаружили как в лапах MABGEL с высокой и низкой дозой в 8 часов (после 1-й дозы), так и при высокой дозе в 12 часов (пост 12-й дозы) должно быть достаточно для блокирования передачи ВИЧ. Однако концентрации люминального mAb после инфузии iv mAb зависят от системного-слизистого градиента и могут не отражать адекватную концентрацию mAb в тканях [68]. В исследовании, специально предназначенном для исследования профилактической эффективности 2 мл малой дозы (20 г / мл) MABGEL, обработанных прогестероном макаков в 4 группах (необработанные контрольные (n = 6), плацебо-лечение за 1 час до заражения (n = 9), плацебо-лечение за 4 часа до заражения (n = 9), MABGEL за 1 час до заражения (n = 9) и MABGEL за 4 часа до заражения (n = 6)) оспаривали внутри вагинально с запасом, содержащим 4-10 (AID50) SHIV162P3 в 50% человеческой семенной плазме. Было инфицировано 5/6 контрольных животных, а также 15/18 животных, которые получали плацебо. Эффективная защита от заражения SHIV была получена только с помощью MABGEL и с равной эффективностью в течение 1 часа (6/9 неинфицированных, Chi-Square p = 0,038) и 4 ч (4/6 неинфицированных, Chi-Square p = 0,037) вызов [52]. Что касается рассмотренного выше исследования PK макаки, ​​концентрации влагалища 2F5 и 4E10, обнаруженные во время заражения, были близки к соответствующим значениям, найденным в нашем исследовании, но уровни 2G12 были выше. Однако, поскольку в обоих этих исследованиях передачи использовались макаки с индуцированным прогестероном вагинальным истончением, который не наблюдался у людей, и бросать вызов инокуляции при количестве копий выше, чем в эякуляте человека, наши данные ясно указывают на возможность возникновения защитного эффекта у женщин.

Мы не наблюдали токсичности, связанной с 12 днями введения MABGEL. Хотя вагинальное кровотечение было зарегистрировано почти у половины участников, это, как и другие генитальные АЭ, наблюдалось одинаково часто в активном и плацебо оружии. Межменструальное кровотечение обычно сообщается во влагалищных исследованиях микробицидов [73]. Хотя было обнаружено несколько незначительно повышенных РТ-результатов, ни одна из них не была временно связана с кровотечением, и ввиду отсутствия системной абсорбции mAb и нормальной аланиновой трансаминазы, aPTT и aCL титров, они считались связанными с внутренняя изменчивость в лабораторном анализе PT. Остальные клинические АР были равномерно распределены между исследуемыми препаратами и оценивались как отражающие фоновые заболевания.

Учитывая связь между пертурбациями вагинальной микрофлоры и повышенным риском заражения ВИЧ [36] — [38], оценка влияния актуальных продуктов на вагинальную микрофлору является существенной [39]. В целом, используя qPCR, не было никаких доказательств того, что присутствие или отсутствие каких-либо видов Lactobacillus было затронуто применением исследуемого геля, и никаких статистически значимых различий в группах не наблюдалось. Более низкое процентное обнаружение L. iners в группе с низкой дозой присутствовало при скрининге (p = 0,04 (Fisher’s Exact)), поэтому оно не зависело от использования исследуемого геля. Выполнение наших окончательных оценок дозирования через 36 часов после последней дозы могло потенциально пропустить некоторые изменения из-за динамического характера вагинальной флоры. Из-за ожидаемой низкой частоты G. vaginalis и A. vaginae никаких существенных выводов в отношении них не может быть достигнуто, и поэтому дальнейшая оценка влияния Mabgel на эти и другие связанные с BV виды необходима в условиях с высоким BV распространенность, например в исследовании II фазы [39]. Хотя наше исследование не предназначалось для непосредственного сравнения методологий оценки вагинальной флоры, можно с уверенностью отметить, что в целом было достигнуто согласие между клиническими, микроскопическими и qpCR-оценками, что повышает достоверность наших результатов.

Дальнейшее рассмотрение должно быть уделено пути развития mAb как микробицидов. Открытие новых, все более мощных mAb, особенно 10E8 [70] и альтернативных методов производства на основе растений [74], [75], увеличивает их потенциал, чтобы быть эффективными и доступными агентами профилактики ВИЧ. Кроме того, наши данные свидетельствуют о том, что даже на уровне эффективности 4E10 единичная доза может достигать достаточных концентраций in vivo для блокады передачи в течение многих часов. Таким образом, предельная ширина и глубина активности могут быть достигнуты, например, тройной комбинацией 4E10, PGV04 и VRC01 [10], [69], и это можно рассматривать как прототип продукта. Недавние данные даже предположили возможность как иммунологической профилактики как системного, так и полового тракта, которая могла бы обеспечить долгосрочную доставку и защиту mAb [76] — [78].

В заключение, в нашем исследовании было показано, что ежедневное применение до 50 мг каждого из 2F5, 4E10 и 2G12 во влагалище было безопасным в течение 12-дневного периода и достигало концентраций моноклональных антител, потенциально способных блокировать передачу ВИЧ. Однако наши результаты подчеркивают важность клинической оценки стабильности и идеально функционируют во влагалищной среде будущих кандидатов на микробицид. Дальнейшие исследования, включая оценку распределения ткани mAb генитального тракта после вагинального применения, функциональные исследования для оценки нейтрализации и FcR-связывающей способности регенерированного антитела, более широкую оценку влияния на вагинальную бактериальную и иммунную среду и сравнение между потребителями гормональных контрацептивов и естественно, велосипедные женщины требуются и требуют разработки более мощных комбинаций mAb в качестве микробицидов.

Контрольный список для клинического испытания MABGEL1.

(DOC)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Окончательный одобренный протокол для клинического испытания MABGEL1.

(PDF)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Окончательный утвержденный протокол для исследования устойчивости in vitro 2F5, 4E10, 2G12 во влагалищных выделениях.

(PDF)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Все авторы внесли непосредственный вклад в подготовку исследования, а также рассмотрели и внесли свой вклад в окончательную рукопись. Мы хотели бы поблагодарить многих людей, которые поддерживали и помогали нам в суде, особенно во всех добровольцах.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *