Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Высшая корреляция основного антигена HCV с подсчетом клеток CD4 + T по сравнению с РНК HCV у пациентов с коинфекцией HCV / HIV-1

A Higher Correlation of HCV Core Antigen with CD4+ T Cell Counts Compared with HCV RNA in HCV/HIV-1 Coinfected Patients
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3155566/

Задуманные и разработанные эксперименты: TS FL HZ. Выполнены эксперименты: TS XC WZ YX CX. Проанализированы данные: TS XC LW. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: GC YZ SW LW. Написал газету: TS FL.

Развитие инфекции HCV обычно сопровождается хроническим гепатитом C (CHC) у большинства пациентов, тогда как спонтанный вирусный клиренс HCV (SVC) встречается только у немногих испытуемых. По сравнению с широко распространенным применением тестирования РНК HCV методом количественного RT-PCR обнаружение основного антигена HCV может быть альтернативным показателем в диагностике инфекций вируса гепатита С и в мониторинге состояния инфекционных индивидуумов. Тем не менее, корреляция и различия между этими двумя показателями в инфекции HCV нуждаются в большем количестве исследований, особенно у пациентов, коинфицированных ВИЧ-1. В этом исследовании было зарегистрировано в общей сложности 354 человека, инфицированных вирусом гепатита С и / или анти-ВИЧ, из деревни Центрального Китая. Кроме того, были измерены гепатопатические переменные, связанные с HCV, включая клинический статус, ALT, AST, анти-HCV Abs, а также измененные количества Т-клеток CD4 + / CD8 +, основной антиген HCV и вирусную нагрузку HCV. Концентрация основного антигена HCV в сыворотке была высоко коррелирована с уровнем РНК HCV у пациентов с ХГС с коинфекцией ВИЧ-1 или без нее. Следует отметить, что концентрация основного антигена HCV отрицательно коррелировала с числом лимфоцитов CD4 +, в то время как не было обнаружено корреляции между уровнем РНК HCV и количеством лимфоцитов CD4 +. Наши результаты показали, что количественное определение основного антигена HCV плазмы может быть альтернативным показателем анализа QPCR РНК HCV при оценке связи между репликацией HCV и иммунным статусом хозяина у пациентов с коинфекцией HCV / HIV-1.

Инфекция вируса гепатита С (HCV) и вируса иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1) была распространена в нескольких провинциях Китая из-за антисанитарных коммерческих методов сбора крови до конца 1990-х годов [1] — [3], тогда как HCV больше часто передается через антисанитарную кровь или продукты крови по сравнению с ВИЧ-1инфекцией [4] — [7]. В отличие от ВИЧ-1, сообщалось, что примерно 14-40% людей, инфицированных ВГС, самопроизвольно очистили вирус и не обнаружили сывороточной РНК HCV [8] — [14]. Считается, что серопозитивные индивидуумы против HCV с обнаружимой РНК HCV имеют активную HCV-инфекцию и классифицируются как хроническая инфекция гепатита C (CHC), в то время как у пациентов с HCV-серопозитивными факторами с отрицательной РНК HCV (то есть с виремией-отрицательной) инфекции и были классифицированы как спонтанный вирусный клиренс HCV (SVC) [15].

При разработке методов прямого обнаружения вируса HCV (РНК или основного белка) ожидается, что инфекционный статус HCV может быть оценен лучше, если результаты антител к HCV и обнаружения вируса будут рассматриваться вместе. Следует отметить, что по сравнению с широко распространенным применением обнаружения РНК HCV с использованием метода RT-qPCR анализ антигена HCV может быть полезной помощью для диагностики подозрительных вирусных инфекций гепатита C и для мониторинга состояния инфекционных индивидуумов. Однако применение и значимость анализа антигена HCV и его корреляции с обнаружением РНК HCV все еще недостаточно изучены, особенно на фоне коинфекции ВИЧ-1.

В этом кросс-секционном исследовании мы проанализировали и сравнили серологические и вирусологические характеристики ВИЧ-положительных и виремий-отрицательных пациентов с ВГС в общей сложности 354 пациентами с гепатитом С и / или ВИЧ-1 серопозитивными. Также были оценены клинические корреляции и влияние ВИЧ-ассоциированных факторов на аномалии функции печени у пациентов с коинфекцией HCV / HIV-1. Результаты показали, что сывороточное тестирование антигена антигена HCV имеет сравнимую чувствительность и высокую стабильность к РНК РНК HCV qPCR у пациентов с ХГС с или без коинфекции ВИЧ-1 и количественное определение основного антигена HCV плазмы может быть практической альтернативой анализу РНК РНК HCV в клинических оценка инфекции HCV. Однако уровень основного антигена HCV отрицательно коррелировал с количеством CD4 + T-клеток и ответом антител против HCV (отношение S / CO) было положительно коррелировано с количеством CD4 + T-клеток у ВИЧ-инфицированных пациентов с CHC с числом лимфоцитов CD4 + менее 1000 / мкл, в то время как не было обнаружено корреляции между уровнем РНК HCV и количеством лимфоцитов CD4 +. Наши данные показывают, что основной антиген HCV, вероятно, может быть более чувствительным к иммунному давлению, чем РНК HCV в условиях иммунодефицита, вызванных коинфекцией ВИЧ-1.

В общей сложности 1252 жителей (на долю которых приходится 80% местного населения) из деревни Шанцай, провинция Хэнань в центральном Китае, были исследованы на сыворотку HBsAg, антитела против HCV и антитела против ВИЧ, которые были получены местным CDC (Shangcai Center for Контроль и профилактика заболеваний) и местную больницу (Народная больница округа Шанцай). 354 человека, которые были серопозитивными и / или анти-ВИЧ-1 серопозитивными против HCV, но были отрицательными для HBsAg, были зарегистрированы в этом кросс-секционном исследовании в августе 2009 года. Ни один из участников не получал противовирусную терапию HCV. Более 90% участников были так называемыми бывшими донорами крови (FBD), у которых была история нестандартного планового донорства крови, а другие были их родителями, супругом или детьми. Все участники были опрошены обученным и квалифицированным персоналом с использованием стандартизированного вопросника, включая подробную общую информацию, историю донорства крови и использование противовирусных или антиретровирусных препаратов. Были измерены антитела против HCV, уровень РНК HCV, уровень основного антигена HCV и признаки гепатопатии (клинический статус, количество Т-клеток CD4 / CD8, ALT, AST, GGT, щелочная фосфатаза, альбумин, билирубин, количество тромбоцитов и исследование ультразвука в печени) во всех изучаемых предметах. Все инфицированные ВИЧ-1 люди регулярно получали (~75%) или периодически (~ 10%) режим высокоактивной антиретровирусной терапии первой линии (ВААРТ), состоящий из двух нуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы (НИОТ) AZT / ddI (~ 60%) или d4T / 3TC (~ 40%) и один ненуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы (NNRTI) NVP, который был поддержан программой China CARES (Community Resource Resource and Education Services). Исследование было одобрено органами институционального контроля в Институте здоровья Пекинский университет, а информированные формы согласия были подписаны всеми участниками. Характеристики всех субъектов при зачислении представлены в таблице S1. Были завербованы еще одиннадцать здоровых контрольных образцов (серонегативные и HCV-негативные субъекты ВИЧ и HCV) из той же деревни (хотя они не были включены в эту когорту исследования).

Сыворотку и плазму собирали при зачислении. Связанные с печенью ферменты, включая АЛТ (аланинаминотрансфераза), АСТ (аспартатаминотрансфераза), γ-GT (γ глутамилтранспептидаза), АЛП (щелочная фосфатаза), альбумин, глобулин и соотношение альбумин / глобулин, были измерены традиционными клиническими стандартизованными методами.

Суммарное число лимфоцитов CD4 + / CD8 + T-cell было выполнено стандартизованными технологиями подсчета единичных платформ с использованием цитометрических методов. Все реагенты были получены от BD Biosciences (BD Biosciences, San Jose, CA) и подсчеты клеток CD4 + / CD8 + были определены в течение 12 часов с использованием FACS Calibur (BD Biosciences, San Jose, CA).

Фрагмент 573-bp в гене Core генома HCV амплифицировали с помощью полуположенной ПЦР (сначала с P1-верхним и P3-нижним, затем с P1-верхним и P2-ниже). P1-upper: gcgaaaggcctt ctggta; P2-lower: cgcacggcacgcacccggg; P3-lower: ccgcagag (a / g) tc (c / t) cccacgta. Все реакции ПЦР проводили с отрицательным контролем в назначенной ПЦР-чистой комнате. Продукты ПЦР подвергались анализу последовательностей путем циклического секвенирования и методов терминатора окрашивания с помощью анализатора последовательности ДНК ABI 3730xl (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA).

ВИЧ-1 подвергали скринингу с помощью ELISA-анализа (GBI Biotech Co., Ltd., Beijing, China) для антител к ВИЧ, и положительные тесты были подтверждены анализом ВИЧ-блотинга 2.2 WB (HIV Blot 2,2 WB, Genelabs Diagnostics, Singapore) местный Центр по контролю и профилактике заболеваний.

Все образцы сыворотки тестировали на присутствие антител против HCV с использованием системы ARCHITECT Anti-HCV (Abbott Diagnostics, Abbott Park, США). HCV-антитела считались реактивными, если отношение S / CO (образец RLU / обрезание RLU) было больше или равно 1,0. Все образцы с отношением S / CO от 1,0 до 5,0 были подтверждены анализом RIBA (HCV BLOT 3.0, МР-диагностика, США). Вирусную нагрузку на плазму HCV определяли с помощью набора для амплификации Abbott RealTime ™ HCV (Abbott Molecular Inc. Des Plaines, IL, США) в соответствии с инструкциями производителя. Предел обнаружения составляет 30 МЕ / мл, что эквивалентно 1,48 log10IU / мл.

Квантовый антиген плазменного HCV количественно определяли с использованием коммерческого хемолюминесцентного иммуноанализа микрочастиц (CMIA) (6L47 ARCHITECT HCV Ag Reagent Kit, Abbott Diagnostics, Abbott Park, США) в соответствии с инструкциями производителя с пределом обнаружения 3 фмоль / л.

Ранговая корреляция Спирмена, согласованные пары Уилкоксона, U-тесты Манна-Уитни и тесты Чи-Квадрата Пирсона (коррекция Йетса для непрерывности используется в определенных ситуациях) выполнялись с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 5.0, когда это необходимо.

В этом исследовании 354 участника были разделены на 5 групп (ВИЧ-неинфицированный CHC, ВИЧ-инфицированный CHC, ВИЧ-неинфицированный SVC, ВИЧ-инфицированный SVC и только ВИЧ-инфекция) в зависимости от наличия антител против HCV, анти-ВИЧ антитела и вирусной нагрузки на ВГС (фиг.1А). Клинические данные участников, предоставленные местным CDC, показали, что более 90% участников, инфицированных HCV и / или ВИЧ, были бывшими донорами крови (FBD) в период между 1990 и 1997 годами, а передача пола была причиной заражения левых лиц. Население ВИЧ-неинфицированных лиц с ХГС, что означало моноинфекцию HCV, что подтверждается обнаруживаемой вирусной нагрузкой в ​​плазме, составляло самую высокую долю (129/354, 36,44%) среди всех пяти групп. Более четверти участников принадлежали к населению ВИЧ-инфицированного ХСН (98/354, 27,68%), который был инфицированной HCV и ВИЧ-1 группой. И ВИЧ-неинфицированные SVC (65/354, 18,36%), и ВИЧ-инфицированные популяции SVC (44/354, 12,43%) представляли собой серопозитивные люди HCV с необнаруживаемой вирусной репликацией HCV (фиг.1A), которые считались имеющими предшествующий HCV инфекции и были классифицированы как несущие HCV, поскольку циркулирующая РНК HCV поддерживалась на неопределяемом уровне, тогда как реакции антител к сыворотке были положительными. На основе характеристик распределения инфекции HCV и ВИЧ-1 (фиг.1A) были рассчитаны показатели самовосстановления HCV в серонегативных и серопозитивных популяциях ВИЧ, представленных в процентах от серопозитивности SVC / HCV на фиг.1B. Результаты показывают, что статистической разницы (X2 = .237, P = 0,626) не было в процентах от серопозитивности SVC / HCV между инфицированными ВИЧ-1 (30,99%) и неинфицированными (33,51%) популяциями. Проведено сравнение процентной доли серопозитивности HCV и ВИЧ у всех 1252 жителей. Данные показали, что 26,84% участников были серопозитивными по ВГС, тогда как только 12,78% участников были серопозитивными по ВИЧ. Существовала значительная разница в серопозитивной скорости между HCV и ВИЧ (X2 = 76,9, P <0,001, фиг.1C). Разница между ВГС и уровнем инфицирования ВИЧ может быть результатом более эффективной передачи HCV, чем ВИЧ, через передаваемый через кровь маршрут, как сообщалось ранее, или от более высокой базовой распространенности HCV, чем ВИЧ.

(A) 354 серопозитивных или серопозитивных участников вируса гепатита С HCV были разделены на 5 различных групп (ВИЧ-неинфицированный CHC, ВИЧ-инфицированный CHC, ВИЧ-неинфицированный SVC, ВИЧ-инфицированный SVC, только ВИЧ-инфекция) в зависимости от наличия сывороточного ВИЧ- 1 / HCV-антитела и РНК HCV. Были указаны пропорции каждой группы по 354 предметам. (B) Сравнение процентного содержания субъектов SVC у серопозитивных субъектов HCV у ВИЧ-1 неинфицированных (черный квадрат) и ВИЧ-1 (пустых квадратов) пациентов. (C) Процент серопозитивных пациентов с HCV (черный квадрат) и ВИЧ-1 (пустой квадрат) у всех 1252 жителей. Испытания Pearson Chi-Square проводились для сравнения процента между двумя различными группами, показанными в (B) и (C). Тройные звездочки (***) указывают значения P ниже 0,001.

ALT и AST считались двумя критическими ферментами для оценки функции печени. Нормальные клинические диапазоны значений ALT и АСТ сыворотки обычно обозначались как не более 40 МЕ / мл. Мы рассчитали процент пациентов с повышенными значениями АЛТ (> 40 МЕ / мл) или АСТ (> 40 МЕ / мл) на группу. Никакой существенной разницы между ALT (X2 = 0,221, P = 0,638) или AST (X2 = 0,018, P = 0,895) не было обнаружено между моноинфекцией HCV (ВИЧ-неинфицированный CHC, 44,96% для ALT и 44,18% для АСТ) группа и коинфекция HCV / ВИЧ (ВИЧ-инфицированный CHC, 41,84% для ALT и 45,92% для группы AST) (фиг.2A и B). Интересно отметить значительные различия в процентах со значениями выше 40 МЕ / мл для ALT (X2 = 3,854, P = 0,05) и AST (X2 = 13,722, P <0,001) между ВИЧ-неинфицированным SVC (10,78% для ALT и 3.08% для АСТ) и ВИЧ-инфицированного SVC (25,00% для ALT и 27,08% для АСТ). Аналогичные существенные различия для абсолютных значений ALT (P = 0,008) и AST (P <0,001) были найдены между этими двумя субпопуляциями (фиг.2А и В). Хотя процентное содержание повышенных АЛТ (11,11%) и АСТ (22,22%) было выше в моноинфицированной ВИЧ-инфекции, чем в здоровом контроле (0% для АЛТ и 5,56% для АСТ), статистической разницы не было. Это возможно из-за небольшого размера популяции для моноинфекции ВИЧ (n = 18) и здорового контроля (n = 19) (фиг.2A и B). Кроме того, не было обнаружено корреляции между вирусной нагрузкой ALT или AST и HCV или между отношением ALT или AST и S / CO антитела против HCV у ВИЧ-инфицированных неинфицированных CHC и ВИЧ-инфицированных пациентов с CHC (данные не показаны).

(A) ALT; (B) AST. Процент пациентов с положительными значениями АЛТ или АСТ (более 40 МЕ / мл) в каждой группе был указан в середине рядом с каждой группой. Медиана также была показана как горизонтальная полоса в каждой группе. Группа a (○), b (•), c (△), d (▴), e (▽) и f (▾) указала участников ВИЧ-неинфицированного CHC, ВИЧ-инфицированного CHC, ВИЧ-неинфицированного SVC, ВИЧ- инфицированных SVC, ВИЧ-моноинфицированных пациентов и здорового контроля соответственно. Тесты Пирсона Чи-Квадрата (коррекция Йейтса для непрерывности использовалась в определенных ситуациях) были выполнены для сравнения процентных значений со значениями выше 40 МЕ / мл, а U-тесты Манна-Уитни использовались для сравнения значений АЛТ / АСТ между двумя различными группами , Одинарная звездочка (*) указывает значения P ниже 0,05. Двойные звездочки (**) указывают значения Р ниже 0,01, а тройные звездочки (***) указывают значения Р ниже 0,001.

Соотношение S / CO антител против HCV, измеренных системой ARCHITECT Anti-HCV, сравнивали между пятью группами, упомянутыми выше. Результаты показали, что уровни анти-HCV-антител были намного выше в позитивных группах РНК HCV, чем в отрицательной группе РНК HCV, независимо от того, была ли у ВИЧ-1 или с ВИЧ-инфекцией или нет ВИЧ-инфекция (рис. 3A, P <0,001 для групп (a) ВИЧ-неинфицированный CHC по сравнению с (c) ВИЧ-неинфицированным SVC; и группы (b) ВИЧ-инфицированный CHC по сравнению с (d) ВИЧ-инфицированным SVC]. Этот результат свидетельствует о том, что РНК HCV плазмы (положительная или неопределяемая) значительно влияют на уровень циркулирующих ответов против HCV-антител. Кроме того, значительная разница в уровнях антител против HCV между моноинфекцией HCV (ВИЧ-неинфицированным CHC) и коинфекцией HCV / HIV-1 (ВИЧ-инфицированный CHC) (P = 0,025) (фиг.3A) , Отношение анти-HCV Abs S / CO у большинства пациентов с HCV РНК-положительным гепатитом С без инфицирования ВИЧ-1 (99,23%) было больше или равно 10, тогда как меньшинство (9 субъектов, приблизительно 10%) РНК HCV-положительного HCV / ВИЧ-1 были инфицированы, чтобы нести низкие отношения S / CO анти-HCV Abs (менее 10). Этот результат согласуется с тем фактом, что связанный с ВИЧ-1 иммунодефицит тесно связан с нарушением гуморального иммунного ответа. Кроме того, между субпопуляциями с титрами антител против HCV (S / CO) было обнаружено существенное различие в количестве лимфоцитов CD4 + (P = 0,025) менее 10 и S / CO не менее 10 (фиг. 3B). Количество лимфоцитов CD4 + у всех девяти ВИЧ-инфицированных пациентов с ХГС с низким титром антител против HCV (S / CO) составляло менее 500 / мкл (максимальное значение количества CD4 + T составляло 484 / мкл у этих 9 пациентов). Интересно, что все эти девять пациентов были положительными как для HCV-РНК, так и для основного антигена. Эти данные свидетельствуют о том, что иммунодефицит, связанный с ВИЧ, не влияет на чувствительность обнаружения антигена HCV.

(A) S / CO антитела против HCV. Отношение S / CO было показано как график графика точек рассеяния. Значения (S / CO) не менее 10 были учтены как антитела к HCV, а процентная доля пациентов с HCV антителом была указана для каждой группы. (B) CD4 + Т-клетки подсчитываются в ВИЧ-инфицированных субпопуляциях CHC на основе уровня титра антител против HCV (S / CO). (C) вирусная нагрузка плазменной HCV у ВИЧ-1-неинфицированных CHC и ВИЧ-инфицированных пациентов с CHC. (D) Концентрация основного антигена вируса HCV у ВИЧ-неинфицированных CHC и ВИЧ-инфицированных пациентов с ХГС. Группа a (○), b (•), c (△), d (▴), e (▽) и f (▾) указала участников ВИЧ-неинфицированного CHC, ВИЧ-инфицированного CHC, ВИЧ-неинфицированного SVC, ВИЧ- инфицированных SVC, ВИЧ-моноинфицированных пациентов и здорового контроля соответственно. Медиана была показана как горизонтальная полоса в каждой группе. Для статистического сравнения двух разных групп были выполнены U-тесты Манна-Уитни. Одинарная звездочка (*) указывает значения P ниже 0,05. Двойные звездочки (**) указывают значения Р ниже 0,01, а тройные звездочки (***) указывают значения Р ниже 0,001.

Вирусную нагрузку плазменного вируса гепатита C и основной антиген HCV измеряли с помощью набора для амплификации Abbott RealTime ™ HCV и набора для анализа Abbott ARCHITECT HCV Ag. Сравнение проводилось только для пациентов с HCV-РНК-положительными (ВИЧ-неинфицированные CHC и ВИЧ-инфицированные группы CHC), так как не выявлялась вирусная нагрузка вируса гепатита C у ВИЧ-инфицированных пациентов с ВИЧ-инфекцией. Следует отметить, что основной антиген HCV не выявлялся у всех пациентов с отрицательным HCV-РНК, тогда как большинство пациентов с ХГС были реакционноспособны для определения основного антигена HCV (125/129, 96,90% для ВИЧ-неинфицированной группы CHC и 96/98, 97,96 % для ВИЧ-1-инфицированной группы CHC). Все пациенты с ВГС, которые спонтанно очистили инфекцию HCV, были отрицательными от сердечного антигена и не имели пациентов с положительным сердечным антигеном, тогда как отрицательная HCV-РНК была обнаружена у всех 354 индивидуумов, которые твердо продемонстрировали специфичность теста на антиген HCV. Кроме того, у 4 пациентов, которые были РНК HCV положительными, но отрицательными для тестирования антигена HCV, были обнаружены в субпопуляции, не инфицированной ВИЧ-инфекцией. Значения HCV-РНК этих четырех пациентов составили 2,6, 2,87, 4,08 и 5,79 log10IU / мл соответственно. Кроме того, у двух пациентов, у которых была положительная РНК HCV, но отрицательная для теста на сердечный антиген HCV, была обнаружена в ВИЧ-инфицированной субпопуляции CHC, а значения HCV-РНК этих двух пациентов составили 2,90 и 3,13 log10IU / мл соответственно. Эти данные показали, что пациенты, у которых была РНК HCV, но отрицательная для теста на антиген HCV, были меньше и обычно имели очень низкие вирусные нагрузки HCV. Однако не было доказательств, подтверждающих, что ВИЧ-инфекция может повысить вероятность такого редкого события. Статистический анализ показал, что оба уровня РНК HCV РНК (P = 0,0116) (рис.3C) и основной антиген HCV (P = 0,008) (рис. 3D) были значительно выше в коинфекции HCV / HIV-1 (ВИЧ-инфицированные CHC), чем при моноинфекции HCV (ВИЧ-неинфицированный CHC). Можно предположить, что репликативные уровни HCV повышаются быстрее у ВИЧ-инфицированных пациентов, чем у моноинфицированных пациентов с HCV [16].

В этом исследовании был использован новый коммерческий хемилюминесцентный набор для иммуноанализа микрочастиц для измерения основного антигена HCV. Обнаружение основного антигена HCV имеет высокую чувствительность, как указано выше. Мы обнаружили, что 96,90% ВИЧ-неинфицированных пациентов с ХГС и 97,96% ВИЧ-инфицированных пациентов с ХСН были реакционноспособны к измерению основного антигена HCV. И в первый раз мы сообщали, что концентрации сыворотки основного антигена HCV были высоко коррелированы с уровнями РНК HCV как у моноинфицированных HCV (r = 0,8083, P <0,001), так и с HCV / HIV-1 (r = 0,9524 , P <0,001) в этом обследовании поперечного сечения (фиг.4А). Дальнейший анализ показал, что корреляция была очень сходной как у HCV-1b, так и у HCV-2a генотипов пациентов с ХСН (данные не показаны). Это говорит о том, что измерение основного антигена HCV станет отличным суррогатом для теста на РНК HCV для мониторинга вирусной репликации HCV в клиническом применении, хотя они ориентированы на совершенно разные цели (белок или нуклеиновую кислоту) и предоставят клиническим исследователям альтернативный метод с низкой стоимостью и легкая манипуляция для оценки инфекционного статуса инфицированных HCV пациентов. Мы также изучили, связано ли отношение концентрации вирусной нагрузки на вирусную нагрузку / HCV вируса гепатита C с статусом инфекции при моноинфекции HCV и коинфекции HCV / HIV-1. Интересно отметить, что значительно более высокое соотношение уровней вирусной нагрузки на вирусную нагрузку / HCV вируса HCV было обнаружено у моноинфицированных пациентов с HCV по сравнению с инфицированными HCV / HIV-1 пациентами (P = 0,0414) (фиг.4B).

Ранговая корреляция Спирмена и U-тесты Манна-Уитни выполнялись отдельно (A) и (B). Одинарная звездочка (*) указывает значения P ниже 0,05, а тройные звездочки (***) указывают значения P ниже 0,001.

Мы также проанализировали соотношение между значениями ВГС-абс (S / CO) и количества лимфоцитов CD4 + у пациентов с числом лимфоцитов CD4 менее 1000 / мкл. Интересно отметить, что значительная положительная корреляция (r = 0,3155, P = 0,0033) была обнаружена у ВИЧ-инфицированных пациентов с ХГН (фиг.5A), хотя статистических различий не было обнаружено в моноинфекции HCV (ВИЧ-неинфицированных CHC) и ВИЧ- неинфицированные группы SVC (данные не показаны). Как показано на фиг.5B и C, концентрация антигена HCV HCV отрицательно коррелировала (r = -0,2847, P = 0,0083) с числом лимфоцитов CD4 +, в то время как не было обнаружено корреляции между вирусной нагрузкой HCV и количеством лимфоцитов CD4 + в коинфекции ВИЧ Пациентов с ХСН, хотя концентрация основного антигена HCV в сыворотке была высоко коррелирована с уровнем РНК HCV как у инфицированных HCV моноинфицированных, так и у HCV / ВИЧ-1, как описано выше. Эти данные свидетельствуют о том, что флуктуация концентрации основного антигена HCV была более чувствительной, чем вирусная нагрузка HCV или вирусная нагрузка HCV, не синхронизировалась с количеством лимфоцитов CD4 + у лиц с коинфекцией HCV / HIV-1. Кроме того, были проанализированы эффекты РНК HCV или основного антигена HCV на периферические подсчеты Т-клеток CD4 / CD8 у моноинфицированных пациентов с HCV, и никакой разницы не было найдено (данные не показаны).

Ранговая корреляция Спирмена была выполнена, а двойные звездочки (**) обозначали значения Р ниже 0,01.

С момента введения ВААРТ в 1996 году заболеваемость большинством оппортунистических заболеваний резко снизилась [17], [18], а заболевание печени, связанное с HCV, стало основной причиной заболеваемости и смертности у ВИЧ-1-инфицированных людей. Bica et al. [19] и Monga et al. [20] продемонстрировал, что конечная стадия заболевания печени была основной причиной смерти в серопозитивной популяции ВИЧ-1 после введения ВААРТ. В Китае большинство инфицированных ВИЧ-1 людей (включая FBD) получили первые линии ВААРТ-режимов, состоящие из двух НИОТ и одного ННИОТ с 2003 года. Предварительные данные опроса (все еще продолжающиеся, неопубликованные) в нашей лаборатории показали, что инфекции HCV также составляло до 50% смертности у лиц, инфицированных ООП.

В нескольких исследованиях [21], [22] исследовано распределение и корреляция положительности или отрицательности РНК HCV среди серопозитивных популяций HCV. В нашем настоящем исследовании процент отрицательных пациентов с РНК HCV среди пациентов с серопозицией против HCV был немного выше у серонегативных ВИЧ-1 (33,51%), чем сероположительные (30,99%) ВИЧ-1 (рис.1B) у зарегистрированных участников ( более 90% субъектов, имеющих историю донорства крови), в то время как эта разница не достигла статистической значимости. Тем не менее, трудно сделать вывод о том, что уровень самовосстановления HCV не связан с инфекцией ВИЧ-1, поскольку трудно определить, происходит ли заражение HCV до или после заражения ВИЧ-1. Если перед заражением ВИЧ-1 происходит острая инфекция HCV и самовосстановление, не должно быть никакой связи между самовосстановлением HCV и ВИЧ-1-инфекцией. Поскольку передача HCV более эффективна, чем ВИЧ-1, через антисанитарную кровь или продукты крови, наиболее вероятно, что самовосстановление HCV произошло до заражения ВИЧ-1 в большинстве FBD с коинфекцией ВИЧ-1 / HCV.

В ряде исследований в поперечном сечении были исследованы предсказатели повышенных ферментов печени у ВИЧ-инфицированных пациентов без HCV-инфекции [23] — [27]. Тем не менее, последствия вируса ВИЧ-1 per se или ВААРТ на прогрессирование повреждения печени у пациентов с HCV-инфекцией недостаточно изучены. Наши результаты показали, что связанные с ВИЧ факторы могут влиять на повышенные сигналы (ALT и AST) функции печени, поскольку ВИЧ-инфицированная группа SVC показала более высокий уровень АЛТ в сыворотке (Р = 0,05) и АСТ (Р <0,001), чем ВИЧ-неинфицированный SVC (рис.2). В нашем исследовании 80% (35/44) ВИЧ-инфицированных пациентов с SVC (включая пациентов с повышенным АЛТ / АСТ) проходили лечение ВААРТ регулярно или периодически. Режимы ВААРТ состояли из двух НИОТ (AZT / ddI или d4T / 3TC) и одного NNRTI (NVP). Использование НИОТ может немного ухудшить функцию печени с очень низкой частотой, а невирапин может быть связан с гепатитом на фоне высокоинтенсивных CD4 + T-клеток [28], [29]. Понятно, что влияние связанных с ВИЧ факторов на расстройства печени может быть умеренно-умеренным, потому что не было обнаружено различий между группами ХСН с коинфекцией ВИЧ-1 и без нее. Тем не менее, трудно однозначно заключить, какой фактор сыграл важную роль в усугублении повреждения печени при рассмотрении хронической гепатотоксичности, связанной с ВААРТ, неполного восстановления иммунитета и других возможных факторов из наших текущих данных.

Наши данные показали, что отношение S / CO анти-HCV Abs у HCV-РНК-положительных пациентов с коинфекцией ВИЧ-1 или без нее было значительно выше, чем у пациентов с серонегативностью РНК HCV (фиг.3А, Р <0,001) , что согласуется с гипотезой о том, что активная внутрипеченочная репликация и стимуляция HCV имеет решающее значение для поддержания более высоких уровней сывороточных анти-HCV-ответов. Теоретически, клиренс или экстремальный спад внутрипеченочной репликации HCV приведут к постепенному снижению специфических антител к HCV из-за потери постоянной стимуляции вирусными компонентами HCV. Как только вирус будет очищен, титр сывороточных антител к HCV будет постепенно снижаться, и, наконец, произойдет самопроизвольная сероконверсия.

В предыдущих исследованиях сообщалось, что количественное определение КВ HCV методом ELISA, таким как Lumipulse Ortho HCV Ag (Lumipulse-Ag) (Ortho Clinical Diagnostics) с пределом обнаружения 50 фмоль / л, может использоваться при различных показаниях контроля вирусной нагрузки, включая оценка исходной вирусной нагрузки до терапии и исследование ранней вирусной кинетики во время терапии [30] — [32]. В последнее время коммерчески доступен высокочувствительный анализ для основного антигена HCV с использованием полностью автоматизированного метода CMIA. Реактивный срез для этого анализа был установлен на 3 фмоль / л (S / CO = 1,0) для максимальной специфичности, хотя было определено, что предел обнаружения составляет 0,83-1,24 фмоль / л [33]. Был описан ряд потенциальных клинических применений для этого анализа, в том числе значительно сократить период диагностического окна для выявления острой инфекции в качестве инструмента для мониторинга заболеваемости / хода заболевания в различных группах пациентов, таких как пациенты с гемодиализом и потребители инъекционных наркотиков, как быстрый тест для подтверждения активной инфекции в положительных случаях против HCV и как независимый параметр для прогнозирования реакции на лечение [33]. В настоящем исследовании, как сывороточная концентрация основного антигена HCV, так и вирусная нагрузка HCV были значительно ниже при моноинфекции HCV, чем коинфекция HCV / HIV-1. Следует отметить, что количественное определение CMIA-теста на основной антиген HCV сильно коррелирует с соответствующей вирусной нагрузкой HCV в ХГС с или без инфекции ВИЧ-1 (фиг. 4A). Кроме того, основной антиген HCV имел скорость обнаружения, сравнимую с использованием тестирования РНК HCV. Напротив, титр сывороточного анти-HCV при моноинфекции HCV был значительно выше, чем при коинфекции. Как показано на фиг.3А, низкие отношения S / CO (менее 10) антител против HCV в сыворотке были обнаружены у меньшего количества инфицированных HCV-РНК положительных HCV / HIV-1 пациентов (приблизительно 10%). Однако это значение заметно выше, чем процентное соотношение с низким отношением S / CO (менее 1%) по сравнению с процентным соотношением монотерапии ВИЧ-инфицированных HCV РНК HCV, что указывает на повышенный риск ложной негативности инфекции HCV, только если судить по наличию положительное антитело против HCV у пациентов с коинфекцией ВИЧ-1. На фиг.3А показано, что необнаружимое антитело против HCV (0,09 S / CO) произошло у одного ВИЧ-инфицированного пациента с ХГС (вирусная нагрузка HCV: 4,11 log10IU / мл, концентрация ядра HCV: 16,03 фмоль / л, количество CD4 + Т-клеток: 346 / мкл). В результате было бы полезно оценить инфекционный статус HCV ВИЧ-1-положительной популяции путем обнаружения антигена HCV или РНК. Следует отметить, что была обнаружена значительная положительная корреляция между отношением S / CO анти-HCV-антител и периферическим количеством CD4 + Т-клеток в коинфекции HCV / HIV-1. Было показано, что концентрация основного антигена HCV отрицательно коррелирует с количеством лимфоцитов CD4 + (r = -0,2847, P = 0,0083), в то время как не было обнаружено корреляции между вирусной нагрузкой HCV и количеством лимфоцитов CD4 + у пациентов с коинфекцией ВИЧ-инфицированных (фиг. 5B и C). Эти данные можно интерпретировать как намек на то, что тестирование антигена антигена HCV было более чувствительным, чтобы отражать иммунное давление, чем тестирование РНК HCV. Возможная интерпретация заключалась в том, что период полувыведения основного белка HCV был относительно короче при регулярном иммунодефиците человека, чем при условии иммунодефицита, тогда как распад РНК HCV сыворотки был менее чувствителен к иммунному клиренсу по сравнению с основным белком HCV. Эта интерпретация может также частично отвечать за более высокое отношение РНК HCV к основному антигену, обнаруженному у ВИЧ-неинфицированных пациентов с ХГС, по сравнению с ВИЧ-инфицированными индивидуалами CHC (фиг. 4B).

В этом исследовании мы предположили, что основной антиген HCV можно использовать в качестве маркера репликации HCV у антитела против HCV-положительного населения без лечения, с или без коинфекции ВИЧ-1. Хорошо известно, что применение теста на антиген HCV на диагностику HCV имеет ряд преимуществ. Во-первых, для тестирования антигена HCV не требуется сложного оборудования, а производительность — экономия времени по сравнению с тестированием РНК HCV. Во-вторых, ожидаемая цена на тестирование антигена HCV более дешева, чем обнаружение РНК HCV. Было показано, что конечный антиген HCV-ядра более стабилен в сыворотке и плазме, чем РНК HCV [34], [35]. Было продемонстрировано, что концентрация основного антигена HCV была воспроизводимой и стабильной даже после инкубации при комнатной температуре в течение одной недели, тогда как концентрация РНК HCV резко снижалась после инкубации при 25 ° C в течение 24 часов [35]. Таким образом, тестирование антигена генов HCV может служить полезным альтернативным маркером для количественного анализа репликации HCV и мониторинга анти-HCV-терапии.

В целом наши данные показали, что существуют характерные серологические и вирусологические характеристики пациентов с положительным и отрицательным гепатитом С у пациентов с гепатитом С в сыворотке крови с или без коинфекции ВИЧ-1. Важно отметить, что наблюдалась отличная корреляция между вирусной нагрузкой вируса HCV и концентрацией основного белка HCV не только в моноинфицированной HCV-популяции, но и в коинфицированной популяции HCV / HIV-1. Анализ антигена HCV обнаружил подавляющее большинство положительных результатов РНК HCV с или без инфекции ВИЧ-1 (97,96% и 96,9% соответственно). Учитывая HCV, тестирование основного антигена имеет сравнимую чувствительность к РНК HCV qPCR. Концентрация основного антигена HCV, но не уровень РНК HCV, была отрицательно коррелирована с количеством лимфоцитов CD4 +. Наши данные свидетельствуют о том, что количественное определение основного антигена HCV плазмы может быть новым и альтернативным показателем уровня периферического HCV, чем уровень РНК HCV при оценке связи между репликацией HCV и иммунным статусом хозяина у пациентов с коинфекцией HCV / HIV-1.

Характеристики 354 пациентов с ВГС и / или ВИЧ-1 сероположительностью, включенными в исследование.

(DOC)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Мы очень благодарны всем, кто предоставил образцы крови для этого исследования. Мы также благодарим доктора Пэн Инь и доктора Мэри Кунс за их советы по подготовке этой рукописи.

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Финансирование: эта работа была поддержана грантами Национального научно-технического проекта по инфекционным заболеваниям (2008ZX10002-012, 2008ZX10002-013 и 2009ZX10004-903). Финансисты не играли никакой роли в разработке исследований, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовить рукопись.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *