Нажмите "Enter", чтобы перейти к контенту

Дивергенция вируса ВИЧ и симинского иммунодефицита, Заир

Divergent HIV and Simian Immunodeficiency Virus Surveillance, Zaire
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3310624/

Недавняя ВИЧ-инфекция или дивергентные штаммы вируса ВИЧ или синдрома обезьян-иммунодефицита (SIV) могут быть ответственны за результаты, не зависящие от вестерн-блоттинга, на 70 образцах сыворотки от работников Заирской больницы, которые были реакционноспособны в иммуноферментном анализе. Используя универсальную полимеразную цепную реакцию ВИЧ-1, ВИЧ-2 и праймеры SIV, мы обнаружили 1 (1,4%) последовательность ВИЧ-1. За исключением 1 образца, никаких молекулярных доказательств для необычных ВИЧ-или SIV-подобных штаммов в этой выборке не обнаружено.

Считается, что ВИЧ-1 и ВИЧ-2 являются результатом передачи по перекрестным видам от ВИЧ-инфицированных шимпанзе от обезьян-иммунодефицита (SIV) и сажистых мангабей соответственно, которые представляют собой 2 (SIVcpz и SIVsm) 6 основных лентивирусных филогенетических линий ( 1,2). Нет доказательств того, что штаммы SIV из оставшихся нечеловеческих линий приматов заражают людей, хотя многие из них растут в клетках человека in vitro, как и SIVcpz и SIVsm (3). Поскольку люди подвергаются воздействию множества лентивирусов приматов через кровь или биологические жидкости во время охоты, разведения мясника, употребления мяса дичи и сохранения приматов в качестве домашних животных (3), существует потенциал для зоонозной передачи различных лентивирусов приматов во многих частях Африки к югу от Сахары , включая бассейн реки Конго (4). Этот потенциал подтверждается идентификацией камерунского человека, чьи серологические результаты у ВИЧ были неопределенными, но образцы сыворотки сильно и исключительно реагировали с пептидом SIVmnd V3 (5). Еще более убедительным аргументом в пользу выявления перекрестных видов является недавний вывод камерунского человека, который, возможно, подвергся воздействию колобуса SIV, о чем свидетельствуют сильные гуморальные (env IDR и V3) и слабый клеточный (кляп) иммунный ответ ( 6). Хотя последовательности SIV не были идентифицированы ни в одном из этих случаев, результаты показывают, что люди, вероятно, подвергаются воздействию разных ретровирусов-обезьян, которые могут установить новые инфекции у людей (3).

Нечеловеческие приматы, инфицированные SIV от признанных в настоящее время линий, могут содержать антитела, которые серологически перекрестно реагируют с некоторыми антигенами ВИЧ-1 или ВИЧ-2 (3). Во многих случаях вирусные вестерн-блоты ВИЧ (WB) с неопределенными профилями обезьян, инфицированных SIV, напоминают антитела иммуноферментного иммуноферментного анализа (EIA) ВИЧ-инфицированных, WB-неопределенных человеческих сывороток из Африки. В целом, такие неопределенные африканские сыворотки демонстрируют широкий спектр реакционной способности к белкам ВИЧ-1, в отличие от преобладающей реактивности p24 в WB-неопределенных сыворотках у людей в Соединенных Штатах (7-9). Эти данные свидетельствуют о том, что WB-неопределенные образцы вирусных сывороток ВИЧ-инфекции от лиц, живущих в Африке, могут отражать не только недавнюю ВИЧ-инфекцию, но и инфекцию с сильно расходящимся штаммом ВИЧ-1 (10); они могут отражать либо перекрестную реактивность с неизвестными патогенами африканского происхождения, либо воздействие новых штаммов ВИЧ или SIV.

Мы исследовали присутствие ВИЧ или SIV в 70 HIV EIA-реактивных, WB-неопределенных образцах сыворотки, собранных в 1984 и 1986 годах сотрудниками больницы Мама Йемо в Киншасе, Заир (в настоящее время Демократическая Республика Конго) (11). Полосы ВБ идентифицировали с использованием анализа WB ВИЧ-1/2 (версия 2.2, Genelabs Diagnostics, Singapore) и классифицировались как неопределенные в соответствии с критериями для интерпретации ВИЧ-1 (http://www.cdc.gov/mmwr/preview/ mmwrhtml / 00001431.htm). Вкратце, положительный результат ВБ указывает на реактивность по меньшей мере на p24 и 1 из 3 env (gp41, gp120 или gp160) белков с интенсивностью полос, по крайней мере такой же сильной, как и при слабом положительном контроле; отрицательный результат ВБ указывает на отсутствие реактивности и неопределенный результат ВБ указывает на реактивность по меньшей мере на 1 белок.

Из 70 образцов WB-неопределенной сыворотки 69 показали широкий спектр WB-неопределенных полос у ВИЧ-1, а 1 имел WB-неопределенный образец ВИЧ-2 со слабой реакционной способностью против gp36, p68 и gp80 белков. Анализ WB-неопределенных моделей ВИЧ-1 обеспечивал несколько важных наблюдений. Во-первых, большинство образцов (41/69, 59%) проявляли реактивность к множественным вирусным белкам (рис.), Тогда как остальные образцы (28/69, 41%) демонстрировали реактивность против одиночных ВИЧ-1 белков, включая p24 (13 / 69, 18,8%), p17 (n = 8, 11,6%), gp160w (w = слабый) (n = 4, 5,8%) и p51, p66 и gp41w (каждый n = 1, по 1,4%). Во-вторых, во всех, кроме 3-х экземплярах, WB-неопределенные образцы с реакционной способностью к множественным вирусным белкам объединяют белки p24 или p17 gag или оба с другими, давая следующие 21 профили: p17 / p24 (14/69, 20,3%); p24 / p66 и p17 / p24 / p66 (n = 3 каждый, по 4,3%); p24 / p51, p17 / p24 / p51 и p17 / p24 / gp41w (n = 2 каждый, по 2,9%); p17 / p66, p17 / gp160, p24 / gp160, p24 / p51 / gp41w, p17 / p51 / p66, p17 / p31 / gp41w, p24 / p51 / p55, p24 / p51 / p66, p17 / p24 / p51 / p66, p17 / p24 / p51 / p55, p17 / p24 / p55 / p66, p24 / p31 / p51 / p55, p31 / p66, p51 / gp41w и p31 / p66 / gp41w (каждый n = 1, по 1,4%). В целом, этот анализ показал реактивность по отношению к 8 белкам ВИЧ-1, которые встречались как отдельные полосы или множественные комбинации. В то время как реакционная способность к p24 может представлять собой либо раннюю инфекцию ВИЧ, либо реакцию на неспецифические антигены (8), реакционная способность к другим белкам ВИЧ-1 (p17, p31, p51, p55, p66, gp41 или gp160) может отражать по крайней мере воздействие ВИЧ -1, ВИЧ-2 или SIV, а также перекрестная реактивность с еще неидентифицированными штаммами ВИЧ или SIV (3,10).

A) Распределение ВИЧ-1 вестерн-блот-неопределенных образцов среди 69 образцов сыворотки из Киншасы, Заир, реактивных методом иммуноферментного анализа. B) Филогенетическая классификация протеазной последовательности ВИЧ-1 ZA30972 (GenBank, к которой присоединяется № AY562558), выделенной из реакционной сыворотки p17. Филогенетическое дерево генерировалось методом соседнего соединения с нуклеотидным расстоянием, рассчитанным по 2-параметрическому методу Кимуры (12), включенному в пакет GeneStudio (http://www.genestudio.com). Контрольные последовательности были получены из базы данных Los Alamos (http://hiv-web.lanl.gov/MAP/hivmap.html). Положение outgroup (вирус иммунодефицита Simian [SIV] cpz) не показано. Значения по отраслям представляют собой процент из 100 копий начальной загрузки. Шкала шкалы указывает на эволюционное расстояние 0,10 нуклеотидов на позицию в последовательности.

Чтобы определить, может ли быть обнаружена ВИЧ-и SIV-подобная РНК в 70 WB-неопределенных образцах, мы попытались провести амплификацию обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (RT-PCR) ВИЧ-1, ВИЧ-2 и SIV. Однако из-за небольшого объема (<300 мл) некоторых образцов сыворотки было использовано ограниченное количество праймеров. Мы выбрали 4 набора праймеров для 3 высококонсервативных областей генов, включая env-gp41, pol protease и pol integrase, которые мы ранее разработали и широко протестировали для эффективной ПЦР-амплификации полевых образцов. Вкратце, праймеры gp41 позволяют амплифицировать группы HIV-1 M (подтипы A-K и U [неклассифицируемые]) N и O и SIVcpz с эффективностью 95% (13); ВИЧ-1-специфичные протеазные праймеры эффективно (> 95%) обнаруживают группы M-вирусы (подтипы A-K и U [неклассифицируемые]) и позволяют успешно амплифицировать некоторые отрицательные образцы PCR-gp41. Протеазовые праймеры типа ВИЧ-2 позволяют амплифицировать ВИЧ-2 по крайней мере подтипы А и В (13), а праймеры интегразы ВИЧ-2 / СИВ усиливают ВИЧ-2 и по меньшей мере 5 основных линий СИВ, включая SIVcpz, SIVsm, SIVagm (Африканская зеленая обезьяна), SIVmndBK12 (мандрилл) и SIVsyk (обезьяна Сайкс) (14). Целочисленные праймеры должны также усиливать другие линии SIV, включая SIVcol, SIVLhoest / SIVsun, SIVgsn, SIVmus, SIVmon, SIVtal и SIVdeb (3). Это предсказание основано на том факте, что генетическое разнообразие этих последовательностей в 3′-конце областей праймера было таким же, как в штаммах, ранее использовавшихся для тестирования (15), что было четко видно через выравнивание ДНК интегразов-праймеров со всеми SIV геномной последовательности интегразы, депонированной в GenBank. Положительный контроль амплификации ПЦР включал HIV-1 Mn, HIV-2 ROD и SIVsm. Используя этот подход, мы амплифицировали ген протеазы HIV-1 (PR) 297 п.о. только из 1 (1,4%) из 70 сывороточных образцов. Остальные 69 образцов были ПЦР-отрицательными для всех тестируемых праймеров. Филогенетический анализ последовательности PR-генов показал близкую филогенетическую связь с штаммом HIV (1) HIV-1 (рис.), Рекомбинантным вирусом, который содержит части подтипов A и D и неклассифицируемую область, которая была идентифицирована в 1985 году в Заире (16).

Последовательность PR-гена была идентифицирована в сыворотке человека с реакционной способностью только к группе полосок p17 WB, что свидетельствует о том, что этот человек недавно был инфицирован и что антитела ко всем антигенам ВИЧ-1 еще не развились. Информация о демографии, риске или клиническом статусе этого человека отсутствует. В остальных 69 образцах с неопределенным WB мы не могли исключить воздействие SIV от нечеловеческих приматов, от обработки зараженного мяса животных до его употребления или от содержания обезьян в качестве домашних животных. Хотя ограниченный молекулярный объем этого исследования и качество старых образцов сыворотки могут быть недостаточными для молекулярного подтверждения таких вирусов, наши результаты сложных ВИЧ-WB-неопределенных образцов с реакционной способностью к множественным вирусным белкам в образцах сыворотки от людей, живущих в Демократическая Республика Конго предоставляет всестороннюю информацию о ВИЧ-неопределенных сыворотках ВИЧ в середине 1980-х годов.

Предлагаемая цитата для этой статьи: Schaefer A, Robbins KE, Nzilambi EN, St. Louis ME, Quinn TC, Folks TM, et al. Дивергентное эпидемиологическое наблюдение за ВИЧ-инфекцией и вирусом иммунодефицита обезьян, Заир. Emerg Infect Dis [серийный номер в Интернете]. 2005 Sep [дата цитируется]. http://dx.doi.org/10.3201/eid1109.050179

Г-жа Шефер является биологом в Лабораторном отделении, Отделе профилактики ВИЧ / СПИДа, Национальном центре по профилактике ВИЧ, ЗППП и ТБ, Центрах по контролю и профилактике заболеваний. Ее нынешняя область интересов — исследования расходящихся штаммов ВИЧ и SIV-подобных вариантов важности общественного здравоохранения.

Комментариев нет.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *